【摘要】：目的探究小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過(guò)程中,BMP-2/Smad信號(hào)通路與Wnt/β-catenin通路的串話機(jī)制。方法將預(yù)先準(zhǔn)備好的重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(rh BMP-2)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至C3H10T1/2細(xì)胞,利用G418抗藥性篩查轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為轉(zhuǎn)染組、空白組。通過(guò)ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中的BMP-2含量,采用Western blot和RT-PCR方法檢測(cè)兩組中Smad泛素化調(diào)節(jié)因子2(Smurf2)、β-鏈蛋白(β-catenin)、磷酸化β-鏈蛋白(pβ-catenin)、轉(zhuǎn)錄因子RUNX2、淋巴增強(qiáng)因子1(LEF1)、Axin2、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)等關(guān)鍵細(xì)胞因子的表達(dá)水平。結(jié)果與空白組比較,轉(zhuǎn)染組BMP-2濃度升高并維持在較高水平(P0.05),β-catenin mRNA的表達(dá)上調(diào)(P0.05)和磷酸化水平增加(P0.01),LEF1蛋白合成上調(diào)(P0.05),Smurf2蛋白表達(dá)減少(P0.05),RUNX2的mRMA表達(dá)上調(diào)(P0.01)。結(jié)論在成骨細(xì)胞分化過(guò)程中,BMP-2/Smad信號(hào)通路與Wnt/β-catenin通路存在串話機(jī)制,增加β-catenin的表達(dá)水平,促進(jìn)β-catenin的磷酸化。
[Abstract]:Objective to investigate the crosstalk between BMP-2 / Smad signaling pathway and Wnt/ 尾 -catenin pathway during osteogenic differentiation of mouse bone marrow mesenchymal stem cells. Methods Recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rh BMP-2) plasmid was transfected into C3H10T1/2 cells. G418 resistance was used to screen the transfected cells. The experimental cells were divided into transfection group and blank group. The content of BMP-2 in supernatant of each group was detected by ELISA. The expression of key cytokines such as Smad ubiquitin regulatory factor 2 (Smurf2), 尾 -chain protein (尾 -catenin), phosphorylated 尾 -catenin (p 尾 -catenin), RUNX2, lymphoid enhancer 1 (LEF1) and glycogen synthetic kinase 3 尾 (GSK-3 尾) were detected by Western blot and RT-PCR. Results compared with the control group, the concentration of BMP-2 in the transfected group was elevated and maintained at a higher level (P0.05), the expression of 尾 -catenin mRNA was up-regulated (P0.05) and the level of phosphorylation was increased (P0.01). The expression of Smurf2 protein decreased (P0.05) and the expression of mRMA of RUNX2 was up-regulated (P0.01). Conclusion there is a crosstalk mechanism between BMP-2 / Smad signaling pathway and Wnt/ 尾 -catenin pathway during osteoblast differentiation, which can increase the expression level of 尾 -catenin and promote the phosphorylation of 尾 -catenin.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨關(guān)節(jié)外科;右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院燒傷科;
【基金】：廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):2013XNSFAAA278006,2014GXNSFBA118117) 廣西壯族自治區(qū)高等學(xué)校科學(xué)研究項(xiàng)目資助(編號(hào):KY2015YB071)
【分類(lèi)號(hào)】：R68

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本文編號(hào)：2257834