【摘要】：背景:目前慢病毒介導(dǎo)aggrecanase-1sh RNA及h IGF-1雙向作用于類風(fēng)濕患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究還處在初級(jí)階段。目的:觀察在將aggrecanase-1sh RNA、h IGF-1基因同時(shí)轉(zhuǎn)染到人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后,目的基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及細(xì)胞分化情況。方法:體外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并應(yīng)用攜帶aggrecanase-1sh RNA、h IGF-1基因和綠色熒光蛋白的慢病毒載體轉(zhuǎn)染第3代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,同時(shí)以空載體轉(zhuǎn)染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為陰性對(duì)照組。待病毒轉(zhuǎn)染率到最高時(shí)分別提取各組細(xì)胞的蛋白檢測(cè)從而得出目的基因表達(dá)量。并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染成功后細(xì)胞的骨架及細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果與結(jié)論:成功于體外培養(yǎng)出人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,而且以慢病毒為載體成功的將目的基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)。熒光顯微鏡下可觀察到細(xì)胞發(fā)出綠色熒光,各組的平均轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到88%。Western blot檢測(cè)結(jié)果及激光共聚焦顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)顯示,目的基因在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)可高效持續(xù)的表達(dá)出相應(yīng)蛋白,且細(xì)胞形態(tài)變化也可間接證明aggrecanase-1sh RNA、h IGF-1基因可共同促進(jìn)人骨髓干細(xì)胞向軟骨的定向分化。
[Abstract]:BACKGROUND: At present, the research of lentivirus-mediated aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 acting on bone marrow mesenchymal stem cells of rheumatoid patients is still in its infancy. Objective: To observe the expression and cell differentiation of the target gene after transfecting aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 gene into bone marrow mesenchymal stem cells. METHODS: Human bone marrow mesenchymal stem cells were cultured in vitro and transfected into the third generation of human bone marrow mesenchymal stem cells with lentiviral vector carrying aggrecanase-1sh RNA, h IGF-1 gene and green fluorescent protein, and the human bone marrow mesenchymal stem cells were transfected with empty vector as negative control group. RESULTS AND CONCLUSION: Human bone marrow mesenchymal stem cells were successfully cultured in vitro, and the target gene was successfully transfected into cells by lentivirus vector. The results were observed under fluorescence microscope. The results of Western blot and confocal laser microscopy showed that the target gene could efficiently and sustainably express the corresponding protein in human bone marrow mesenchymal stem cells, and the changes of cell morphology could indirectly prove aggrecanase-1sh RNA and H IGF-1 gene. It can promote the directional differentiation of human bone marrow stem cells into cartilage.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R684

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本文編號(hào)：2250997