發(fā)布時間：2018-09-15 07:23

【摘要】：背景:獲取高純度、高活性的成骨細胞是進行骨代謝研究的基礎(chǔ)。目的:探索一種簡便、高效的原代成骨細胞培養(yǎng)方法。方法:將新生24 h內(nèi)的SD大鼠,分離獲取顱骨的頂骨和額骨,預(yù)先采取胰酶和膠原酶消化,再進行組織塊培養(yǎng)的方法提取成骨細胞。通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài),細胞計數(shù)繪制細胞生長曲線,采用堿性磷酸酶BCIP/NBT染色和茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色進行成骨細胞鑒定。結(jié)果與結(jié)論:(1)細胞形態(tài)呈長梭形、三角形、不規(guī)則多邊形,有兩至三個細胞突起;(2)透射電鏡下線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在成骨細胞中非常豐富,并且有較多細胞突起,呈現(xiàn)出典型成骨細胞特點;(3)細胞剛接種時生長緩慢,3 d后增殖加快,第7天達高峰;(4)堿性磷酸酶BCIP/NBT染色顯著陽性,茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色橘紅色;(5)采用酶消化法聯(lián)合組織塊法提取的細胞具有典型的成骨細胞特征和功能,是一種理想的原代成骨細胞分離培養(yǎng)方法。
[Abstract]:Background: the acquisition of high purity and high activity osteoblasts is the basis of bone metabolism. Objective: to explore a simple and effective method for primary osteoblast culture. Methods: the parietal and frontal bones of the skull were isolated from SD rats within 24 hours. The osteoblasts were extracted from the parietal and frontal bones by trypsin and collagenase digestion. Cell morphology was observed by inverted phase contrast microscope and transmission electron microscope. Cell growth curve was plotted by cell count. Osteoblasts were identified by alkaline phosphatase BCIP/NBT staining and alizarin red mineralized nodule staining. Results and conclusions: (1) the shape of cells was long fusiform, triangular, irregular polygon, with two to three cell processes, (2) mitochondria and endoplasmic reticulum were abundant in osteoblasts under transmission electron microscope, and there were many cell processes in osteoblasts. There were typical osteoblasts, (3) the proliferation of the cells increased after 3 days of inoculation, and reached the peak on the 7th day; (4) the alkaline phosphatase BCIP/NBT staining was significantly positive. Alizarin red calcium nodules staining orange; (5) the cells extracted by enzyme digestion combined with tissue block method have typical characteristics and functions of osteoblasts, which is an ideal method of primary osteoblast isolation and culture.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院;廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81260142)~~
【分類號】：R68

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 夏露;梁星;王培志;王國平;;改良植塊法培養(yǎng)原代成骨細胞[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年09期

2 王敏,辛海霞,黃象艷;胰島素樣生長因子-1對成骨細胞生長影響的實驗研究[J];中國矯形外科雜志;2004年Z2期

3 楊志明,余希杰,解慧琪,陳旭,屈藝;不同來源成骨細胞生物學(xué)特性的比較研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;2001年01期

4 李彬;張西正;朱旭;高皓;;應(yīng)力作用下成骨細胞的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J];武警醫(yī)學(xué);2013年12期

5 劉曉東;鄧廉夫;王君;齊進;周琦;王晉申;魏立;朱雅萍;;低氧誘導(dǎo)因子-1α在骨形成過程中對成骨細胞功能的調(diào)控[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年47期

6 饒寒敏,王智興,李群,朱雅萍,柴本甫;成骨生長肽對體外培養(yǎng)成骨細胞樣細胞的促成骨作用[J];中華創(chuàng)傷雜志;2001年11期

7 傅剛,杜靖遠,楊述華,劉維剛,劉勇,段德宇;成人成骨細胞骨保護蛋白的表達與年齡關(guān)系的研究[J];中華實驗外科雜志;2001年06期

8 許文靜;郝立波;姚琦;;缺氧狀態(tài)下體外培養(yǎng)成骨細胞血管內(nèi)皮生長因子和骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的表達及意義[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2008年01期

9 闞伯紅;臧曉怡;;骨活素的研究進展[J];中華骨科雜志;2006年01期

10 黎潤光;邵景范;魏明發(fā);;機械牽張應(yīng)力對成骨細胞的影響研究進展[J];中國矯形外科雜志;2006年06期

相關(guān)會議論文 前8條

1 李稚君;馬信龍;馬劍雄;趙秀寶;;周期性牽張載荷對成骨細胞Protein kinase Cζ通路表達的影響[A];2009第十七屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

2 錢國鋒;;轉(zhuǎn)錄因子Nrf2在PEX13基因缺失所致成骨細胞分化不良中的作用研究[A];2012年浙江省骨質(zhì)疏松與骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)年會暨《骨質(zhì)疏松癥診治進展》專題研討班論文集[C];2012年

3 吳迪;林瑋華;譚祥;魏競競;李彤;陳紅;趙丕文;;成骨細胞增殖分化的體外影響因素[A];第十一次中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2013年

4 李群;王智興;朱雅萍;;成骨生長肽對鼠胚顱蓋骨成骨細胞樣細胞影響的生化分析[A];全國老年骨質(zhì)疏松專題學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2000年

5 劉坤;李盛華;宋貴杰;;體外成骨細胞分離培養(yǎng)技術(shù)在國內(nèi)實驗骨科中的應(yīng)用[A];第11屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

6 傅德皓;楊述華;楊操;葉哲偉;王晶;聶宇;;BMP-2促進鼠胚成骨細胞VEGF表達的時間依賴性效應(yīng)[A];泛長江流域骨科新進展暨第九屆全國骨科護理研討會論文匯編[C];2007年

7 陳興燦;嚴偉民;杜繼曾;俞錦清;鄭筱祥;;地塞米松對體外培養(yǎng)成骨細胞生長的影響[A];2008年浙江省放射學(xué)年會論文匯編[C];2008年

8 王智興;張s，

本文編號：2244167