發(fā)布時(shí)間：2018-09-15 07:23

【摘要】：背景:獲取高純度、高活性的成骨細(xì)胞是進(jìn)行骨代謝研究的基礎(chǔ)。目的:探索一種簡(jiǎn)便、高效的原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)方法。方法:將新生24 h內(nèi)的SD大鼠,分離獲取顱骨的頂骨和額骨,預(yù)先采取胰酶和膠原酶消化,再進(jìn)行組織塊培養(yǎng)的方法提取成骨細(xì)胞。通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,采用堿性磷酸酶BCIP/NBT染色和茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定。結(jié)果與結(jié)論:(1)細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形、三角形、不規(guī)則多邊形,有兩至三個(gè)細(xì)胞突起;(2)透射電鏡下線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在成骨細(xì)胞中非常豐富,并且有較多細(xì)胞突起,呈現(xiàn)出典型成骨細(xì)胞特點(diǎn);(3)細(xì)胞剛接種時(shí)生長(zhǎng)緩慢,3 d后增殖加快,第7天達(dá)高峰;(4)堿性磷酸酶BCIP/NBT染色顯著陽性,茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色橘紅色;(5)采用酶消化法聯(lián)合組織塊法提取的細(xì)胞具有典型的成骨細(xì)胞特征和功能,是一種理想的原代成骨細(xì)胞分離培養(yǎng)方法。
[Abstract]:Background: the acquisition of high purity and high activity osteoblasts is the basis of bone metabolism. Objective: to explore a simple and effective method for primary osteoblast culture. Methods: the parietal and frontal bones of the skull were isolated from SD rats within 24 hours. The osteoblasts were extracted from the parietal and frontal bones by trypsin and collagenase digestion. Cell morphology was observed by inverted phase contrast microscope and transmission electron microscope. Cell growth curve was plotted by cell count. Osteoblasts were identified by alkaline phosphatase BCIP/NBT staining and alizarin red mineralized nodule staining. Results and conclusions: (1) the shape of cells was long fusiform, triangular, irregular polygon, with two to three cell processes, (2) mitochondria and endoplasmic reticulum were abundant in osteoblasts under transmission electron microscope, and there were many cell processes in osteoblasts. There were typical osteoblasts, (3) the proliferation of the cells increased after 3 days of inoculation, and reached the peak on the 7th day; (4) the alkaline phosphatase BCIP/NBT staining was significantly positive. Alizarin red calcium nodules staining orange; (5) the cells extracted by enzyme digestion combined with tissue block method have typical characteristics and functions of osteoblasts, which is an ideal method of primary osteoblast isolation and culture.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院;廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260142)~~
【分類號(hào)】：R68

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本文編號(hào)：2244167