【摘要】：骨的代謝是由成骨細胞(Osteoblast)和破骨細胞(Osteoclast)共同調(diào)節(jié)。生理或病理的條件下細胞外或細胞間會產(chǎn)生酸性的環(huán)境,酸性條件會促進破骨胞的增殖并提高其活性。RANKL是破骨細胞增殖和激活的一個重要因子,這個因子表達于成骨細胞表面。相關(guān)研究證明,成骨細胞在骨形成過程中除了發(fā)揮形成骨基質(zhì)的作用外,還有促進破骨細胞分化的功能。一些文章也證明酸性不僅增強了破骨細胞的活力,抑制了成骨細胞的分化與礦物化,同時也使的成骨細胞促進破骨細胞的進一步分化成熟。質(zhì)子感知受體GPCR可以感知脂質(zhì)分子以及質(zhì)子,所以在酸性條件下成骨細胞生理活性的改變與GPCR有一定的關(guān)系。GPCR家族中包含OGR1、GPR4、TDAG8、G2A四個受體,酸性條件下究竟哪個受體在發(fā)揮作用以及它的調(diào)控方式是一個新的研究點。同時通過對其信號通路的研究不僅在基礎(chǔ)理論方面對骨代謝途徑提供了新的理論支持,同時為骨質(zhì)疏松等骨病提供了新的治療靶位點。因此,該研究在理論和實踐方面都具有重要的意義。實驗過程中,細胞在酸性條件下分別對其用CCK法測定細胞增殖情況,用Micro chemotaxis chamber法測定成骨細胞(hFO8)細胞的遷移能力。我們發(fā)現(xiàn)酸性會抑制成骨細胞的增殖和遷移。用Real Time PCR技術(shù)檢測hFOB的成骨性子CollagenI、OPG、BMP2、ALP進行了檢測,用ALP試劑盒對細胞ALP的表達情況進行了檢測。結(jié)果顯示,酸性條件抑制成骨細胞的分化和骨化。對TGF、RANKL、M-CSF幾個重要的破骨因子也進行了 qPCR,發(fā)現(xiàn)酸性條件對破骨性因子的表達有一定的促進作用。通過對hFOB進行qPCR檢測,發(fā)現(xiàn)TDAG8和GPR4在GPCR中高表達。分別對兩個基因用質(zhì)粒過表達之后再對hFOB的成骨性因子與破骨性因子進行了檢測,我們發(fā)現(xiàn)在整個調(diào)控過程中TDAG8發(fā)揮的作用更大,GPR4作為一種輔助作用。同樣用ELISA結(jié)果測得PGE2也參與酸性條件下促進破骨細胞分化的調(diào)控。結(jié)論1.酸性條件下成骨細胞的增殖和遷移能力都受到了抑制,同時形成骨的能力減弱,而促進破骨細胞分化成熟的能力提高。2.TDAG8和GPR4都參與調(diào)控酸性條件下成骨細胞的成骨因子和破骨因子的調(diào)節(jié),分別轉(zhuǎn)染TDAG8和GPR4之后,BMP2和OPG的表達量會下降,OPG的表達量受酸性影響更顯著,M-CSF的表達情況也是如此。過表達TDAG8和GPR4之后使RANKLL的表達量顯著升高,其中TDAG8起主要作用。同時表達AG8使TGF-β1的表達量上升。TDAG8可以作為治療骨質(zhì)疏松癥的一個新的藥物靶位點。
[Abstract]:Bone metabolism is regulated by both osteoblasts and osteoclasts. Under physiological or pathological conditions, there is an acidic environment between cells or extracellular. Acidic conditions promote the proliferation and activity of osteoclasts. RANKL is an important factor in the proliferation and activation of osteoclasts, and this factor is expressed in osteoblasts. Cell surface. Studies have shown that osteoblasts not only play a role in the formation of bone matrix, but also in the differentiation of osteoclasts. Some papers have also shown that acidity not only enhances the activity of osteoclasts, inhibits the differentiation and mineralization of osteoblasts, but also promotes osteoclasts. The GPCR family contains four receptors: OGR1, GPR4, TDAG8 and G2A. Under acidic conditions, which receptor plays a role and its regulation mode is one. The study of its signaling pathway not only provides a new theoretical support for bone metabolism pathway, but also provides a new therapeutic target for osteoporosis and other bone diseases. Therefore, this study has important theoretical and practical significance. We found that acidity inhibited the proliferation and migration of osteoblasts. Collagen I, OPG, BMP2 and ALP were detected by Real Time PCR, and the expression of ALP was detected by ALP kit. The results showed that acidic conditions inhibited the differentiation and ossification of osteoblasts. Several important osteoclast factors such as TGF, RANKL and M-CSF were also detected by qPCR. It was found that acidic conditions could promote the expression of osteoclast factors to some extent. We found that TDAG8 played a more important role in the whole regulation process, and GPR4 acted as a supplementary role. PGE2 also participated in the regulation of osteoclast differentiation under acidic conditions. Conclusion 1. Both TDAG8 and GPR4 are involved in the regulation of osteogenic factors and osteoclasts in acidic conditions. After transfection of TDAG8 and GPR4, the expression of BMP2 and OPG decreases. Overexpression of TDAG8 and GPR4 significantly increased the expression of RANKLL, in which TDAG8 played a major role. Expression of AG8 increased the expression of TGF-beta 1. TDAG8 could be used as a new drug target for osteoporosis.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R68

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本文編號：2183773