【摘要】：[目的]研究NDRG2(N-Myc downstream-regulated gene 2)對(duì)人髓核細(xì)胞衰老的影響,進(jìn)而探討NDRG2在椎間盤退變中的作用。[方法]通過(guò)慢病毒過(guò)表達(dá)NDRG2基因穩(wěn)定感染髓核細(xì)胞。設(shè)立正常髓核細(xì)胞組(空白組)、紅色熒光蛋白標(biāo)記的慢病毒感染髓核細(xì)胞組(對(duì)照組)及過(guò)表達(dá)NDRG2慢病毒感染髓核細(xì)胞組(實(shí)驗(yàn)組)。Western blot檢測(cè)NDRG2蛋白表達(dá)水平,細(xì)胞衰老相關(guān)β半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-ga1)染色檢測(cè)髓核細(xì)胞衰老變化,流式細(xì)胞儀檢測(cè)髓核細(xì)胞周期變化,MTT法繪制生長(zhǎng)曲線,并分析髓核細(xì)胞的增殖情況。[結(jié)果]正常髓核細(xì)胞感染過(guò)表達(dá)NDRG2慢病毒48 h后熒光顯微鏡下觀察基因感染效率在95%以上;感染72 h后Western blot檢測(cè)示NDRG2表達(dá)明顯升高(P0.01);實(shí)驗(yàn)組SA-β-gal染色陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組和空白組(P0.01);MTT生長(zhǎng)曲線顯示慢病毒感染后髓核細(xì)胞增殖速度較對(duì)照組和空白組均減慢,潛伏期延長(zhǎng),緩慢進(jìn)入對(duì)數(shù)期;細(xì)胞周期結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組G0/G1期百分比明顯高于對(duì)照組和空白組,S期明顯低于對(duì)照組和空白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]NDRG2基因過(guò)表達(dá)的髓核細(xì)胞衰老速度明顯加快,提示NDRG2可能通過(guò)調(diào)控髓核細(xì)胞的衰老參與椎間盤退變過(guò)程,為椎間盤的退變生物學(xué)治療提供依據(jù)。
[Abstract]:[objective] to study the effect of NDRG2 (N-Myc downstream-regulated gene 2) on the aging of human nucleus pulposus cells, and to explore the role of NDRG2 in the degeneration of intervertebral disc. Methods NDRG2 gene was overexpressed by lentivirus to infect nucleus pulposus cells stably. Normal nucleus pulposus cells group (blank group), red fluorescent protein labeled lentivirus infected nucleus pulposus group (control group) and overexpression of NDRG2 lentivirus infected nucleus pulposus cell group (experimental group). Western blot was used to detect the expression of NDRG2 protein. Senescence associated 尾 -galactosidase (SA- 尾 -ga1) staining was used to detect the senescence of nucleus pulposus cells. Flow cytometry was used to detect the cell cycle changes of nucleus pulposus cells. The growth curve was plotted by flow cytometry, and the proliferation of nucleus pulposus cells was analyzed. [results] after 48 hours of overexpression of NDRG2 lentivirus in normal nucleus pulposus cells, the efficiency of gene infection was over 95% under fluorescence microscope. The positive rate of SA- 尾 -gal staining in experimental group was significantly higher than that in control group and blank group (P0.01). The proliferation rate of nucleus pulposus cells after lentivirus infection was slower and the incubation period was longer than that in control group and blank group. The results of cell cycle showed that the percentage of G0/G1 phase in the experimental group was significantly higher than that in the control group and the blank group compared with the control group and the blank group (P0.05). [conclusion] the aging rate of nucleus pulposus cells with overexpression of NDRG2 gene was significantly accelerated, suggesting that NDRG2 may participate in the degeneration of intervertebral disc by regulating the aging of nucleus pulposus cells, and provide the basis for the biological treatment of degeneration of intervertebral disc.
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院骨科;第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(項(xiàng)目編號(hào):81201633)
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2148159