本文選題：miR-765 + APE1　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景骨肉瘤(OS)是在兒童及青少年中最常見的骨腫瘤之一�；瘜W(xué)治療是骨肉瘤的主要治療方法。在骨肉瘤中,腫瘤血管生成作用與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移密切相關(guān),與化療敏感性及患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。而治療失敗的重要原因與腫瘤細(xì)胞化療藥物耐藥性的產(chǎn)生密切相關(guān)。因此,提高骨肉瘤化學(xué)治療敏感性是延長(zhǎng)患者生存期的有效途徑。脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(APE1)參與調(diào)控骨肉瘤的化療敏感性,是腫瘤細(xì)胞化療抵抗的重要調(diào)節(jié)基因。在OS中,APE1的表達(dá)通常增高,并且與骨肉瘤血管生成正相關(guān),與化療藥物敏感性、預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。MiRNAs具有抑癌或者促癌的雙重作用,通過作用靶基因參與腫瘤調(diào)控。我們通過miRNA高通量芯片技術(shù),檢測(cè)APE1野生型和穩(wěn)定敲低型的人骨肉瘤HOS細(xì)胞株的差異表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)miR-765在芯片中上調(diào)顯著(上調(diào)5倍),生物信息學(xué)預(yù)測(cè)提示miR-765具有APE1 3’UTR區(qū)的結(jié)合位點(diǎn)。在目前的研究中,我們發(fā)現(xiàn)miR-765能夠靶向結(jié)合APE1,并抑制APE1的表達(dá)及其DNA損傷修復(fù)能力,提高骨肉瘤化療敏感性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-765聯(lián)合順鉑不僅抑制APE1,還能顯著抑制血管生成相關(guān)因子VEGF,FGF2、TGFβ及MVD的水平,從而提高骨肉瘤細(xì)胞化學(xué)治療敏感性。在小鼠模型中,miR-765能夠明顯抑制移植瘤的生長(zhǎng),促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。臨床資料顯示,miR-765陽(yáng)性表達(dá)的患者,較陰性表達(dá)的能夠獲得更長(zhǎng)的生存期,而APE1陽(yáng)性表達(dá)的骨肉瘤患者則恰恰相反。綜上所述,目前的數(shù)據(jù)表明miR-765能夠靶向結(jié)合APE1,并抑制其表達(dá)及DNA損傷修復(fù)功能,增強(qiáng)順鉑在骨肉瘤細(xì)胞中的抗血管生成作用,從而提高骨肉瘤化療敏感性,為骨肉瘤研究提供了新的生物標(biāo)記和治療靶標(biāo)。研究目的1.證實(shí)APE1是miR-765下游的直接靶基因,確定二者特異性作用位點(diǎn);miR-765作用于APE1,抑制其DNA損傷修復(fù)功能,提高骨肉瘤化療敏感性。2.證實(shí)miR-765通過抑制APE1,增強(qiáng)順鉑在骨肉瘤細(xì)胞中的抗血管生成作用,提高治療敏感性。研究方法1.收集骨肉瘤患者的臨床資料、組織樣本共43例。2.運(yùn)用生物信息學(xué)分析、載體構(gòu)建、雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)(Dual luciferase report genesystem)以及Western blot驗(yàn)證APE1是miR-765下游的直接靶基因。3.運(yùn)用Western blot、CCK-8、γ-H2AX實(shí)驗(yàn)技術(shù)驗(yàn)證miR-765抑制APE1表達(dá),降低其DNA損傷修復(fù)能力,提高骨肉瘤細(xì)胞化療敏感性。4.運(yùn)用RT-PCR、Western blot實(shí)驗(yàn)技術(shù)驗(yàn)證miR-765聯(lián)合順鉑抑制APE1,VEGF,FGF2,TGFβ的表達(dá);運(yùn)用Transwell和管狀形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-765聯(lián)合順鉑對(duì)骨肉瘤細(xì)胞血管生成能力的影響。5.運(yùn)用動(dòng)物模型,檢測(cè)miR-765對(duì)移植瘤的生長(zhǎng)影響;運(yùn)用免疫組化(IHC)檢測(cè)瘤體組織APE1,VEGF,FGF2,TGFβ、CD34表達(dá)情況。6.運(yùn)用免疫組化(IHC)和原位雜交(ISH)分別檢測(cè)人骨肉瘤中APE1及miR-765表達(dá)狀況,評(píng)估兩者在骨肉瘤患者中的相關(guān)性,對(duì)患者預(yù)后的影響。研究結(jié)果1.MiR-765在骨肉瘤細(xì)胞中能夠靶向結(jié)合APE1,且與APE1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。2.MiR-765抑制APE1的DNA損傷修復(fù)能力,提高骨肉瘤順鉑治療敏感性。3.MiR-765聯(lián)合順鉑在骨肉瘤細(xì)胞中,能夠顯著抑制腫瘤血管生成相關(guān)因子的表達(dá),增強(qiáng)順鉑抗血管生成作用。4.小鼠實(shí)驗(yàn)表明,miR-765能夠抑制移植瘤的生長(zhǎng)。5.臨床數(shù)據(jù)顯示,miR-765陽(yáng)性表達(dá)的患者,較陰性表達(dá)的患者能夠獲得更長(zhǎng)的生存期,而在APE1陽(yáng)性表達(dá)的患者中,其生存期小于陰性表達(dá)的患者。結(jié)論1.發(fā)現(xiàn)在骨肉瘤中,miR-765能夠靶向結(jié)合APE1的3’UTR區(qū),在體內(nèi)、體外均抑制APE1的表達(dá),影響腫瘤細(xì)胞DNA損傷修復(fù);且miR-765通過對(duì)APE1的抑制增強(qiáng)順鉑在骨肉瘤細(xì)胞中抗血管生成作用,提高骨肉瘤化療敏感性,miRNAs調(diào)控APE1的機(jī)制研究為APE1抑制劑的研究提供了新的探索方向。2.對(duì)骨肉瘤患者而言,miR-765陽(yáng)性表達(dá)相對(duì)陰性表達(dá)的患者,能夠獲得更長(zhǎng)的生存期,可作為預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)之一。
[Abstract]:In this study , we find that miR - 765 is capable of targeting binding to APE1 , and has a negative correlation with chemosensitivity and prognosis of osteosarcoma . In the present study , we find that miR - 765 can target binding APE1 , inhibit the expression of APE1 and the repair ability of DNA damage , and improve the chemosensitivity of osteosarcoma cells . The expression of APE1 , VEGF , FGF2 and TGF 尾 in osteosarcoma cells was detected by immunohistochemistry ( IHC ) and in situ hybridization ( ISH ) .
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R738

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 戴楠;雙功能基因APE1與miRNAs相互調(diào)控介導(dǎo)骨肉瘤放療敏感性的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：2118257