本文選題：蛛網(wǎng)膜下腔出血 + 早期腦損傷��； 參考：《蘇州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的:哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)是一種進(jìn)化上相對保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,參與體內(nèi)多種生物過程,包括自噬、蛋白合成、脂質(zhì)合成、肌動蛋白動力學(xué)、神經(jīng)元形態(tài)學(xué)等。蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后腦損傷的機制甚多,小膠質(zhì)細(xì)胞的激活在其中作用顯著。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白對細(xì)胞的增殖活化有明顯的促進(jìn)作用。迄今尚沒有關(guān)于m TOR在SAH后小膠質(zhì)細(xì)胞激活中的作用研究。目前研究表明蛛網(wǎng)膜下腔出血后m TOR信號通路激活、小膠質(zhì)細(xì)胞激活。但其作用機制還有待進(jìn)一步探討。為此,在本研究中,我們第一次探討蛛網(wǎng)膜下腔出血后m TOR信號通路在不同時間的的表達(dá),并研究了抑制該信號通路能否改善蛛網(wǎng)膜下腔出血后的早期腦損傷(early brain injury,EBI)及其可能機制。研究方法:24只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為4組,每組6只,假手術(shù)組,SAH-3h組,SAH-24h組,SAH-72h組。主要探究蛛網(wǎng)膜下腔出血模型中m TOR通路的時間點表達(dá)。將72只SD大鼠分為四個組,sham組18只,SAH+溶劑組18只,SAH+雷帕霉素組18只,SAH+AZD8055組18只。本實驗采用視交叉前池注血模型:SD大鼠視交叉前腦室20秒內(nèi)注入0.3ml無肝素動脈血,從而建立實驗性蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型。在SAH+雷帕霉素組中,模型建立的第4個小時,腹腔注射雷帕霉素(150ug/kg)。SAH+AZD8055組中,同樣在建模后第4小時,AZD8055以14mg/kg劑量腹腔注射。SAH動物模型建立完畢的第24小時處死大鼠,取出大鼠額顳底皮層腦組織做標(biāo)本,采用蛋白質(zhì)印跡(western-blot)分析腦組織中m TOR信號通路表達(dá)情況,免疫熒光染色來分析小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá),干濕法測定水腫指數(shù),western-blot分析腦組織中白蛋白含量來評價出血后的血腦屏障(blood brain barrier BBB)的通透性,TUNEL與FLUORO-JADE B熒光染色測定神經(jīng)細(xì)胞的凋亡及壞死比率,相關(guān)的試劑盒來測定新鮮腦組織中細(xì)胞因子釋放。結(jié)果:通過各種之間的蛋白表達(dá)水平的比較,得出蛛網(wǎng)膜下腔出血后,m TOR及其下游P70S6K總量無明顯變化(P0.05),但其磷酸化水平顯著增高(P0.05),并在第24小時達(dá)到最高。免疫熒光結(jié)果顯示:與正常組相比,安慰劑SD大鼠皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞顯著激活(P0.01),雷帕霉素及AZD8055組SD大鼠與安慰劑組SD大鼠相比,小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)顯著降低(P0.05),雷帕霉素與AZD8055組間無明顯差別(P0.05)。ELISA結(jié)果顯示:與正常組相比,安慰劑SD大鼠皮質(zhì)TNF-α、IL-1β含量明顯增高(P0.05),雷帕霉素及AZD8055組SD大鼠與安慰劑組SD大鼠相比,小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)顯著降低(P0.05),雷帕霉素與AZD8055組間無明顯差別(P0.05)。免疫蛋白印跡結(jié)果顯示:p-m TOR,p-P70S6K,p-4EBP1在正常組低表達(dá),與正常組相比,安慰劑組樣本上上述蛋白表達(dá)水平明顯增高(P0.01),而雷帕霉素及AZD8055組與安慰劑組相比上述蛋白表達(dá)明顯減少(P0.05)。雷帕霉素、AZD8055一定程度上減輕了SAH后的早期腦損傷,包括了細(xì)胞凋亡、壞死、腦水腫以及血腦屏障破壞指標(biāo)。結(jié)論:蛛網(wǎng)膜下腔出血后,m TOR信號通路被激活,雷帕霉素、AZD8055通過抑制m TOR信號通路從來一定程度上減輕了SAH模型中早期腦損傷,這有可能是通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活來實現(xiàn)的。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of mammalian rapamycin target protein in the treatment of subarachnoid hemorrhage ( SAH ) . 騫叉箍娉曟祴瀹氭按鑲挎寚鏁，

本文編號：2111548