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二葉式主動脈瓣中miRNA-195調(diào)控瓣膜鈣化的機制研究

發(fā)布時間:2018-07-09 09:35

  本文選題:二葉式主動脈瓣 + 瓣膜鈣化 ; 參考:《南京醫(yī)科大學學報(自然科學版)》2017年09期


【摘要】:目的 :探究二葉式主動脈瓣中miRNA-195調(diào)控瓣膜鈣化的可能機制。方法 :收集35例接受主動脈瓣置換術(shù)患者狹窄的二葉式或三葉式主動脈瓣,通過PCR及Western blot分別檢測miRNA-195的表達量、果蠅母源抗皮膚生長因子(drosophila mothers against decapentaplegic 7,SMAD7)的mRNA及蛋白表達量。雙熒光素酶法預測miRNA-195的靶基因。在豬瓣膜間質(zhì)細胞中分別沉默和過表達miRNA-195,檢測SMAD7的mRNA表達水平并探究兩者的相互關系。在人類瓣膜組織上通過免疫組化染色檢測基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9蛋白水平,通過天狼星紅染色檢測膠原蛋白水平,通過Von Kossa染色比較鈣化程度差異,進而研究鈣化相關的功能改變。結(jié)果 :與狹窄的三葉式主動脈瓣相比,狹窄的二葉式主動脈瓣中miRNA-195表達降低,SMAD7的mRNA和蛋白水平升高。雙熒光素酶實驗提示SMAD7是miRNA-195的直接靶標。在豬瓣膜間質(zhì)細胞中沉默miRNA-195引起SMAD7 mRNA水平升高,過表達miRNA-195引起SMAD7 mRNA水平降低。狹窄鈣化的二葉式主動脈瓣組織中MMP-2、MMP-9及膠原的表達較狹窄鈣化的三葉式主動脈瓣升高。結(jié)論:在二葉式主動脈瓣中,下調(diào)的miRNA-195促進了SMAD7表達,進而促進細胞外基質(zhì)的纖維化并最終促進其鈣化。
[Abstract]:Aim: to explore the possible mechanism of miRNA-195 regulating valve calcification in two-leaf aortic valve. Methods: the expression of miRNA-195 and the expression of (drosophila mothers against decapentaplegic 7 SMAD7 were detected by PCR and Western blot in 35 patients with stenosis of aortic valve. The target gene of miRNA-195 was predicted by double luciferase method. MiRNA-195 was silenced and overexpressed in porcine valvular interstitial cells to detect the mRNA expression of SMAD7 and to explore the relationship between them. The levels of matrix metalloproteinase (MMP) -2MMP-9, collagen and calcification were detected by immunohistochemical staining, Sirius red staining and Von Kossa staining respectively. Furthermore, the functional changes associated with calcification were studied. Results: the expression of miRNA-195 in the stenosis two-leaf aortic valve decreased the mRNA and protein levels of SMAD7 compared with the stenosis trefoil aortic valve. Double luciferase assay suggested that SMAD 7 was a direct target for miRNA-195. Silencing miRNA-195 increased the level of SMAD7 mRNA in porcine valve interstitial cells and decreased the level of SMAD7 mRNA induced by overexpression of miRNA-195. The expression of MMP-2, MMP-9 and collagen in two-lobe aortic valve with stenosis calcification was higher than that in trefoil aortic valve with narrow calcification. Conclusion: in two-leaf aortic valve, down-regulated miRNA-195 promotes the expression of SMAD7, thus promotes the fibrosis of extracellular matrix and ultimately promotes its calcification.
【作者單位】: 南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院心臟大血管外科;
【基金】:江蘇省自然科學基金(BK20151590)
【分類號】:R654.2

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本文編號:2108932

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