發(fā)布時(shí)間：2018-06-24 07:28

  本文選題：體外循環(huán) + 缺血再灌注損傷　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的缺血-再灌注損傷(ischemia reperfusion injury,I/R)是指部分組織細(xì)胞經(jīng)歷了此階段,恢復(fù)血流和氧供后,組織損傷卻更為加重,發(fā)生組織結(jié)構(gòu)破壞和功能代謝障礙的不可逆損傷現(xiàn)象,但發(fā)病機(jī)制尚不清楚。組蛋白去乙�；�(Histone deacetylase,HDACs)參與IR發(fā)病過程。HDACs可將基因的表達(dá)激活,調(diào)控染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和基因表達(dá),使組蛋白去乙�；�,去乙酰化則在轉(zhuǎn)錄阻遏過程中起作用,不同亞型的HDACs發(fā)揮不同的功能作用。曲古霉素A(Trichostatin A,TSA)作為HDACs的抑制劑,是被發(fā)現(xiàn)的第1個(gè)能抑制HDAC活性以及已知最為有效的化合物。本實(shí)驗(yàn)探究HDAC3在細(xì)胞缺血再灌注損傷中的作用,TSA通過調(diào)控干預(yù)H9C2心肌細(xì)胞IR損傷中的表達(dá),并進(jìn)行HDAC3部分機(jī)制研究,為臨床防治再灌注損傷提供新思路和新的研究途徑。方法選取SD大鼠H9C2細(xì)胞株進(jìn)行研究,置于正常培養(yǎng)箱中,選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,采用EDTA胰酶液制成細(xì)胞懸液后,進(jìn)行細(xì)胞傳代和接種。本實(shí)驗(yàn)分為以下3組:(1)正常對(duì)照組、(2)缺血/再灌注(I/R)組、(3)缺血/再灌注(I/R)+TSA組;參閱相關(guān)文獻(xiàn),模擬心肌細(xì)胞I/R過程,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。根據(jù)以上分組,每組各設(shè)6個(gè)復(fù)孔。將H9C2心肌細(xì)胞以1×104/孔的密度接種于96孔板,待細(xì)胞貼壁3 h后吸出培養(yǎng)液,正常對(duì)照組、I/R組、I/R+TSA組每孔各加入200μL DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液,各組細(xì)胞經(jīng)處理后繼續(xù)培養(yǎng)。MTT法檢測(cè)H9C2細(xì)胞增殖活力;檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)水平;Western Blotting法測(cè)定H9C2細(xì)胞內(nèi)HDAC3蛋白表達(dá)水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)H9C2細(xì)胞HDAC3 mRNA表達(dá)情況。結(jié)果MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組相比較,I/R組、I/R+TSA組抑制率均顯著提高,并且I/R顯著高于I/R+TSA組;I/R組LDH活性明顯高于正常對(duì)照組,I/R+TSA組顯著低于I/R組;Western blotting檢測(cè)顯示I/R組、I/R+TSA組HDAC3蛋白表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組,I/R+TSA組顯著低于I/R組;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)組、I/R+TSA組HDAC3的mRNA表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組,I/R+TSA組顯著低于I/R組。結(jié)論通過檢測(cè)心肌細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞外LDH含量證實(shí)了缺血再灌注對(duì)心肌細(xì)胞活力的影響。與正常對(duì)照組比較,I/R組、I/R+TSA組中HDAC3 mRNA以及蛋白表達(dá)明顯增加。抑制組蛋白去乙�；负�,可以減輕缺血再灌注對(duì)心肌細(xì)胞的損傷,進(jìn)一步說(shuō)明HDAC3表達(dá)上調(diào)在H9C2細(xì)胞缺血再灌注損傷中起重要影響,為臨床今后研究缺血再灌注損傷研究和處理提供新的思路。
[Abstract]:Objective ischemia reperfusion injury (ischemia reperfusion injury, I/R) means that some tissue cells have experienced this stage, after the recovery of blood flow and oxygen supply, the tissue damage is more aggravated, the damage of tissue structure and the dysfunction of metabolic disorder, but the pathogenesis is not clear. Histone deacetylase (Histone deacetylase). HDACs) in the pathogenesis of IR,.HDACs can activate the expression of gene, regulate chromatin structure and gene expression, make histone deacetylation, deacetylation play a role in the process of transcription repression, and different subtypes of HDACs play different functional roles. As the inhibitor of HDACs, as the inhibitor of Trichostatin A, TSA (TSA) is the first found. To inhibit HDAC activity and the known most effective compounds. This study explored the role of HDAC3 in cell ischemia-reperfusion injury, TSA by regulating the expression of IR in H9C2 cardiomyocytes, and conducting part of the mechanism of HDAC3 to provide new ideas and new approaches for the clinical prevention and treatment of reperfusion injury. Method selected H9 of SD rats. The C2 cell line was studied in the normal incubator, selecting the logarithmic growth stage cells and using the EDTA trypsin liquid to make cell suspension to carry out cell subculture and inoculation. The experiment was divided into 3 groups: (1) normal control group, (2) ischemia / reperfusion (I/R) group and (3) +TSA group with blood / reperfusion (I/R); the related literature was used to simulate the I/R process of cardiac myocytes. According to the above group, 6 complex holes were set in each group. The density of H9C2 cardiac myocytes was inoculated to 96 orifice with the density of 1 x 104/ holes. After the cell adherence was 3 h, the culture fluid was sucked out, the normal control group, the I/R group, and the I/R+TSA group were added to 200 uh L DMEM cell culture solution, and the cells of each group continued to train.MTT method to detect the proliferation activity of H9C2 cells after treatment. The level of lactate dehydrogenase (LDH) in the culture medium was detected, the expression level of HDAC3 protein in H9C2 cells was measured by Western Blotting method, and the mRNA expression of HDAC3 in H9C2 cells was detected by real-time quantitative fluorescence quantitative PCR. The results of MTT assay showed that the inhibitory rate of I/R+TSA group was significantly higher than that in the normal control group, and the inhibition rate of I/R+TSA group was significantly higher than that of the normal group. The activity of LDH in group I/R was significantly higher than that in normal control group, and in group I/R+TSA was significantly lower than that in group I/R; Western blotting detection showed that the expression of HDAC3 protein in group I/R+TSA was significantly higher than that of the normal control group, and the I/R+TSA group was significantly lower than that of the I/R group; the real-time fluorescent quantitative PCR test group was significantly higher than the normal control group, and the group of I/R+TSA was significantly lower than the normal control group. In group I/R. Conclusion by detecting the proliferative activity of cardiac myocytes, the effect of ischemic reperfusion on the viability of myocardial cells was confirmed by the content of extracellular LDH. Compared with the normal control group, the expression of HDAC3 mRNA and protein in group I/R+TSA was significantly increased. After the inhibition of histone deacetylase, the damage of myocardial cells could be reduced by ischemia and reperfusion. This further illustrates that up regulation of HDAC3 expression plays an important role in H9C2 cell ischemia-reperfusion injury and provides a new idea for the study and treatment of ischemia-reperfusion injury in the future.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R654

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本文編號(hào)：2060607