本文選題：胎盤間充質(zhì)干細胞 + CD200�。� 參考：《寧夏醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的研究兩種來源的人胎盤間充質(zhì)干細胞CD200的表達差異在小鼠皮膚移植免疫調(diào)節(jié)中的作用及作用機制,為臨床上選擇更好的抑制免疫排斥的干細胞提供一定理論依據(jù)。方法分離兩種來源細胞;流式細胞術(shù)檢測間充質(zhì)干細胞表面標志分子等的表達情況;流式細胞抗體中和高表達CD200分子的細胞、攜帶CD200基因的腺病毒載體及腺病毒空載體分別轉(zhuǎn)染低表達CD200分子的細胞,將等量PBS及上述處理過的細胞通過尾靜脈注射入將ICR乳鼠皮膚移植至C57BL/6背部建立的皮膚移植免疫排斥模型小鼠體內(nèi),統(tǒng)計各組皮膚存活時間;術(shù)后第7天,HE染色法觀察小鼠移植部位炎性細胞浸潤情況;RT-PCR法檢測小鼠脾臟中IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-10基因的相對表達量;眼眶靜脈取血,檢測各組小鼠血液中白細胞的含量;ELISA法檢測血液中相應(yīng)免疫因子的含量。結(jié)果胎兒側(cè)來源細胞CD200陽性率明顯高于母體側(cè)。與PBS組比較:m PMSC組和f PMSC組移植皮膚存活時間均明顯延長;與f PMSC+anti-CD200組比較:f PMSC組移植皮膚存活時間明顯延長;與m PMSC+腺病毒空載體組比較:m PMSC+CD200腺病毒組移植皮膚存活時間明顯延長。HE結(jié)果顯示:細胞移植組炎性細胞的浸潤數(shù)量明顯少于PBS組。RT-PCR結(jié)果顯示:與PBS組比較:m PMSC組IL-17、IFN-γ、TNF-α的相對表達量,f PMSC組TNF-α的相對表達量明顯降低,f PMSC組IL-10的相對表達量明顯升高;與m PMSC組比較:f PMSC組IFN-γ、TNF-α的相對表達量均明顯降低;與f PMSC組比較:f PMSC+Anti-CD200組IL-17、TNF-α的相對表達量,f PMSC+Anti-CD200組IFN-γ的相對表達量均明顯升高;與m PMSC+CD200腺病毒載體轉(zhuǎn)染組比較:m PMSC+腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組TNF-α、IFN-γ的相對表達量均明顯升高,m PMSC+腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組IL-17的相對表達量明顯升高,m PMSC+腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組IL-10的相對表達量明顯降低。ELISA結(jié)果與RT-PCR結(jié)果相符。結(jié)論f PMSC抑制小鼠皮膚移植免疫排斥作用優(yōu)于m PMSC;與其更強的抑制免疫細胞的增殖、分化以及成熟,從而更有效的調(diào)節(jié)免疫因子IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-10等的分泌有關(guān);f PMSC更適于臨床上作為抑制皮膚移植免疫排斥的種子細胞。
[Abstract]:Objective to study the effect and mechanism of CD200 expression of two kinds of human placental mesenchymal stem cells in the immunomodulation of mouse skin transplantation, and to provide a theoretical basis for clinical selection of better stem cells that inhibit immune rejection. Methods two kinds of derived cells were isolated, the expression of surface markers of mesenchymal stem cells was detected by flow cytometry, and the cells with high expression of CD200 molecules were detected by flow cytometry. Adenovirus vector carrying CD200 gene and empty adenovirus vector were transfected into cells with low expression of CD200 molecule, respectively. The same amount of PBS and the above treated cells were injected into the skin of ICR mice through caudal vein and transplanted into the C57BL / 6 mice. The skin survival time of each group was counted. On the 7th day after operation, the infiltration of inflammatory cells was observed by HE staining method and the relative expression of IL-17, IFN- 緯, TNF- 偽, IL-10 gene in the spleen of mice was detected by RT-PCR, and blood was collected from orbital vein. The content of WBC in blood of each group was determined by Elisa. Results the positive rate of CD200 in fetal side was significantly higher than that in maternal side. Compared with the PBS group, the survival time of the skin grafts in the two groups were significantly prolonged, and the survival time of the skin grafts in the FPMSC anti-CD200 group was significantly longer than that in the fPMSC anti-CD200 group. Compared with the empty vector group of mPMSC adenovirus, the survival time of skin grafts in the adenovirus group was significantly prolonged. The results showed that the infiltration of inflammatory cells in the cell transplantation group was significantly less than that in the PBS group. RT-PCR results showed that: compared with the PBS group, the survival time of the 10% m PMSC was significantly longer. The relative expression of TNF- 偽 in fPMSC group was significantly lower than that in fPMSC group. Compared with mPMSC group, the relative expression of IFN- 緯 TNF- 偽 and IL-17 TNF- 偽 in FPMSC Anti-CD200 group and FPMSC Anti-CD200 group and IFN- 緯 expression in fPMSC Anti-CD200 group were significantly lower than those in mPMSC group, and the relative expression of IFN- 緯 in fPMSC Anti-CD200 group was significantly higher than that in fPMSC group. Compared with the mPMSC CD200 adenovirus vector transfection group, the relative expression of TNF- 偽 ~ + IFN- 緯 in the empty adenovirus vector transfection group was significantly higher than that in the mPMSC adenovirus empty vector transfection group. The relative expression of IL-17 in the mPMSC adenovirus empty vector transfection group was significantly higher than that in the mPMSC adenovirus empty vector transfection group. The relative expression of IL-10 was significantly decreased. The results of Elisa were consistent with that of RT-PCR. Conclusion the immunosuppressive effect of fPMSC on skin graft rejection in mice is better than that on mPMSC.Conclusion fPMSC can inhibit the proliferation, differentiation and maturation of immune cells more strongly than that of mPMSCC. Therefore, it is more effective to regulate the secretion of IL-17, IFN- 緯, TNF- 偽, IL-10 and so on, which is more suitable for clinical application as seed cells for inhibiting skin transplantation immune rejection.
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R644

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本文編號：2033285