本文選題：端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶 + RNA干擾技術(shù)　； 參考：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的：利用星型膠質(zhì)細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄酶基因的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染星型膠質(zhì)細(xì)胞及作用于大鼠脊髓損傷區(qū),觀察其對(duì)星型膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及損傷區(qū)膠質(zhì)瘢痕的形成。方法：體外培養(yǎng)大鼠脊髓源星型膠質(zhì)細(xì)胞,用逆轉(zhuǎn)錄酶基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染星型膠質(zhì)細(xì)胞；取60只SD大鼠,隨機(jī)分成4組：分別為實(shí)驗(yàn)組；陰性對(duì)照組；模型組；正常組。利用改良Allen's重物墜落法建立脊髓損傷動(dòng)物模型,分別于造模成功后的3d、1w、2w、4w、6w,5個(gè)時(shí)間點(diǎn)取脊髓標(biāo)本,利用免疫印跡(western-blot)法檢鋇GFAP、PCR-ELISA法檢測(cè)端粒酶的表達(dá)及免疫組化技術(shù)觀察膠質(zhì)瘢痕的形成。結(jié)果：培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)鑒定為星型膠質(zhì)細(xì)胞,TERT基因慢病毒載體對(duì)星型膠質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率達(dá)85%-90%；且轉(zhuǎn)染后生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)出現(xiàn)明顯改變,在轉(zhuǎn)染后的24-48小時(shí)細(xì)胞凋亡達(dá)50%-60%。陰性對(duì)照組及空白組生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)無(wú)明顯改變。對(duì)脊髓損傷區(qū)瘢痕形成的影響,不同治療方式其BBB評(píng)分結(jié)果存在差異(P0.01),且各對(duì)照組與干擾組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。干擾組大鼠損傷脊髓GFAP表達(dá)低于其余各組,且逐漸減少,與陰性對(duì)照組及空白組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001),陰性及空白對(duì)照則增多,兩者間無(wú)差異(P0.05)；端粒酶的表達(dá)在干擾組中降低,與其他各組比較均有統(tǒng)計(jì)差異(P0.001)。標(biāo)記NF-200熒光的,TERT基因慢病毒載體干擾組及正常組其熒光表達(dá)明顯高于陰性對(duì)照組及空白組。結(jié)論：星型膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)可獲成功,靶向TERT基因的慢病毒載體體外轉(zhuǎn)染星型膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)其生長(zhǎng)態(tài)勢(shì)有明顯影響,并可加速凋亡。作用于大鼠脊髓損傷區(qū)的TERT慢病毒載體對(duì)脊髓損傷的修復(fù)有促進(jìn)作用,可以減少損傷區(qū)膠質(zhì)瘢痕的形成,為脊髓損傷的治療研究提供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of galactocyte reverse transcriptase gene lentivirus vector on the growth of astrocytes and the formation of glial scar in the injured area of spinal cord in rats. Methods: rat spinal cord astrocytes were cultured in vitro and transfected with lentivirus vector of reverse transcriptase gene. Sixty SD rats were randomly divided into four groups: experimental group, negative control group, model group and normal group. An animal model of spinal cord injury was established by modified Allen's weight fall method. The spinal cord specimens were collected at 5 time points at 3 days, 1 week, 2 weeks, 4 weeks and 6 weeks after the establishment of the model. The expression of telomerase and the formation of glial scar were detected by Western blot- blot assay with PCR-ELISA. Results: the cultured cells were identified as stellate glial cell tert gene lentivirus vector transfection rate of 85-90, and after transfection, the growth trend was obviously changed, after 24-48 hours after transfection, the apoptosis reached 50-60%. The growth state of negative control group and blank group had no obvious change. The effect of different treatment methods on scar formation in spinal cord injury area was significantly different (P 0.01), and there was significant difference between the control group and the interference group (P 0.001). The expression of GFAP in the injured spinal cord in the interference group was lower than that in the other groups, and gradually decreased. Compared with the negative control group and the blank group, the expression of GFAP in the injured spinal cord was significantly lower than that in the negative control group and the blank control group, but there was no difference between the two groups, and the expression of telomerase was decreased in the interference group. Compared with other groups, there was statistical difference (P 0.001). The fluorescence expression of NF-200 labeled lentivirus vector interference group and normal group was significantly higher than that of negative control group and blank group. Conclusion: the cultured astrocytes can be successfully cultured in vitro. The lentivirus vector targeting TERT gene has a significant effect on the growth of astrocytes and can accelerate the apoptosis of astrocytes. The TERT lentivirus vector acting on the spinal cord injury area can promote the repair of spinal cord injury, reduce the formation of glial scar in the injured area, and provide further experimental evidence for the treatment of spinal cord injury.
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R651.2

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本文編號(hào)：1958210