本文選題：生長(zhǎng)板 + 軟骨細(xì)胞��； 參考：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：目的： 1.探討不同強(qiáng)度下張應(yīng)力對(duì)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的作用,對(duì)增值和凋亡的影響。并初步研究周期性張應(yīng)力對(duì)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞Hippo信號(hào)通路的影響。 2.檢驗(yàn)大鼠跑臺(tái)裝置造大鼠骨關(guān)節(jié)炎模型,同時(shí)于對(duì)照組給予口服環(huán)孢素A觀察藥物干預(yù)組能否改善骨關(guān)節(jié)炎病變的程度。檢測(cè)凋亡相關(guān)基因及蛋白的變化 3.建立大鼠運(yùn)動(dòng)動(dòng)物模型,觀察不同強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)量對(duì)生長(zhǎng)板軟骨的影響。 方法： 1.取大鼠生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的分離培養(yǎng),采用四點(diǎn)彎曲張力儀給予生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞不同強(qiáng)度應(yīng)力刺激。用Annexxin V-FITC/PI染色免疫熒光觀察細(xì)胞凋亡,并行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。行Real-time PCR和Western blot檢測(cè)增殖和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)和蛋白的變化。 2.采用大鼠跑臺(tái)建立骨關(guān)節(jié)炎模型并同時(shí)設(shè)組給予免疫抑制劑CSA干預(yù),用MR和microCT檢測(cè)和評(píng)估骨關(guān)節(jié)炎模型,HE切片觀察骨關(guān)節(jié)炎改變,Real-time PCR檢測(cè)骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因的表達(dá),Western blot檢測(cè)骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)蛋白的表達(dá)。 3.采用大鼠跑臺(tái)建立大鼠運(yùn)動(dòng)增殖模型,用microCT檢測(cè)運(yùn)動(dòng)模型并用HE切片觀察軟骨增殖改變。行.Real-time PCR和Western blot檢測(cè)增殖相關(guān)基因的表達(dá)和蛋白的變化。 結(jié)果 1.在較低的力學(xué)強(qiáng)度(2000μ)下生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞軟骨細(xì)胞表達(dá)COL2基因以及COL2和SOX9蛋白表達(dá)量明顯增加,而RUNX2基因和蛋白表達(dá)增加不明顯。中等力學(xué)強(qiáng)度時(shí)(3000μ、4000μ),生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞RUNX基因和蛋白的表達(dá)量明顯增加,而COL2基因以及COL2和SOX9蛋白表達(dá)量較未刺激細(xì)胞相比減少。在很高的力學(xué)強(qiáng)度刺激時(shí)(5000μ、6000μ)細(xì)胞MMP13及caspase9的基因表達(dá)上調(diào),同時(shí)活化的caspase9蛋白表達(dá)量也增加。起保護(hù)作用的BCL2蛋白表達(dá)明顯減少。隨著應(yīng)力刺激強(qiáng)度的不斷增加,生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞凋亡不斷增加。同時(shí)檢測(cè)出在增殖和凋亡時(shí)YAP基因和蛋白的高表達(dá)。 2.高強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)(大于30km)模型動(dòng)物可檢測(cè)出影像學(xué)早期的骨關(guān)節(jié)炎改變,HE切片測(cè)量軟骨厚度減少,CASPASE9、MMP13、COL2、SOX9基因上調(diào),活化CASPASE9蛋白表達(dá)增加,COL2、SOX9以及BCL2蛋白表達(dá)減少。CSA可減輕OA影像學(xué)表現(xiàn),減輕骨關(guān)節(jié)炎程度。同時(shí)可降低凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。 3.運(yùn)動(dòng)可以增加Ki67基因的表達(dá)量以及PCNA的基因和蛋白的表達(dá)量,并同時(shí)上調(diào)SOX9基因的表達(dá)和增加SOX9和COL2蛋白的表達(dá)量, 結(jié)論 1.較低的力學(xué)強(qiáng)度(2000μ)下生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞分化主要以軟骨增殖趨勢(shì)為主。而中等力學(xué)強(qiáng)度時(shí)(3000μ、4000μ),生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞主要以成骨分化趨勢(shì)為主。很高的力學(xué)強(qiáng)度刺激時(shí)(5000μ、6000μ)細(xì)胞凋亡明顯增加。生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的增殖和凋亡可能與YAP的表達(dá)相關(guān)。 2.高強(qiáng)度的跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)(大于30km)可通過(guò)增加關(guān)節(jié)軟骨機(jī)械應(yīng)力導(dǎo)致大鼠OA的發(fā)生,骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生與軟骨細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。CSA對(duì)細(xì)胞凋亡有抑制作用,可降低凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá),減輕骨關(guān)節(jié)炎程度。 3.運(yùn)動(dòng)可以促進(jìn)生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞的增殖,并且在適當(dāng)?shù)倪\(yùn)動(dòng)強(qiáng)度下,隨著運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的增加,促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖的作用也在增加。
[Abstract]:Objective:
1. to investigate the effect of tensile stress on growth plate chondrocytes at different intensities, to influence the increment and apoptosis, and to investigate the effect of periodic tensile stress on the Hippo signaling pathway of growth plate chondrocytes.
2. the rat model of rat osteoarthritis was built by the rat running device. At the same time, the control group was given oral cyclosporine A to observe whether the drug intervention group could improve the degree of osteoarthritis. The changes of apoptosis related genes and proteins were detected.
3. a rat model of animal movement was established to observe the effect of different intensity of exercise on growth plate cartilage.
Method錛，

本文編號(hào)：1958015