本文選題：基質(zhì)血管成分細(xì)胞 + 重組人BMP-　； 參考：《中國修復(fù)重建外科雜志》2017年07期

【摘要】：目的將重組人BMP-2(recombinant human BMP-2,rh BMP-2)緩釋作用于新鮮分離的大鼠基質(zhì)血管成分細(xì)胞(stromal vascular fraction cells,SVFs),移植到大鼠腰椎橫突后外側(cè),觀察其促進(jìn)脊柱融合的效果。方法取健康4月齡SD大鼠雙側(cè)腹股溝區(qū)皮下脂肪,采用Ⅰ型膠原酶消化法提取SVFs。通過仿生磷灰石涂層方法,將rh BMP-2與β-磷酸三鈣(β-tricalcium phosphate,β-TCP)通過共價(jià)鍵結(jié)合制成緩釋載體,通過BCA法測(cè)定其緩釋效應(yīng)。將32只大鼠隨機(jī)分成4組,每組8只。采用L_4、L_5橫突去皮質(zhì)化方法制備大鼠腰椎后外側(cè)融合模型,分別于A、B、C、D組植入PBS+脫鈣骨基質(zhì)(decalcified bone matrix,DBX)、rh BMP-2/β-TCP緩釋載體+DBX、SVFs+DBX和SVFs+rh BMP-2/β-TCP緩釋載體+DBX。術(shù)后8周獲取腰椎融合標(biāo)本,進(jìn)行手法判斷和X線片觀察評(píng)價(jià)脊柱融合情況,以及micro-CT評(píng)價(jià)脊柱融合情況,并分析骨密度(bone mineral density,BMD)及骨體積分?jǐn)?shù);行HE染色、Masson三色組織學(xué)染色,以及免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)骨鈣蛋白(osteocalcin,OCN)。結(jié)果 2周時(shí)rh BMP-2/β-TCP緩釋載體的rh BMP-2體外累計(jì)釋放量為40%左右,起到緩慢釋放效果;而未經(jīng)仿生磷灰石涂層的對(duì)照組2周時(shí)幾乎停止釋放rh BMP-2。手法判斷、X線片和micro-CT評(píng)估一致,顯示D組成骨能力最強(qiáng),達(dá)100%融合(8/8),之后依次為B組(75%、6/8)、C組(37.5%、3/8)、A組(12.5%、1/8)。Micro-CT分析示,D組BMD和骨體積分?jǐn)?shù)均顯著高于其余3組,B組顯著高于A、C組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HE、Masson三色染色和OCN免疫組織化學(xué)染色示,D組有大量軟骨細(xì)胞連接,伴有骨基質(zhì)沉積、有活躍的成骨過程,類似長骨的礦化過程;B組的骨形成相對(duì)D組較弱;A、C組缺乏有效的新骨形成。結(jié)論新鮮分離的SVFs在rh BMP-2緩釋作用下,顯示出良好的骨生成能力,可有效促進(jìn)脊柱融合,為臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of sustained release of recombinant human BMP-2(recombinant human BMP-2rh BMP-2 on newly isolated rat stromal vascular fraction cells (SVFsS) and to observe the effect of promoting spinal fusion by transplanting the recombinant human BMP-2rh BMP-2 to the posterolateral side of the lumbar vertebrae. Methods the subcutaneous fat of bilateral inguinal region of 4 month old SD rats was extracted by type I collagenase digestion. Rh BMP-2 and 尾 -tricalcium phosphate (尾 -TCPA) were covalently bonded to prepare slow-release carrier by bionic apatite coating method. The slow-release effect of rh BMP-2 was determined by BCA method. Thirty-two rats were randomly divided into 4 groups with 8 rats in each group. The posterolateral fusion model of lumbar vertebrae in rats was established by decorifying L4 / L5 transverse process. PBS decalcified bone BMP-2/ 尾 -TCP DBX and SVFs BMP-2/ 尾 -TCP sustained-release carriers were implanted into PBS decalcified bone matrix group. Lumbar fusion specimens were obtained 8 weeks after operation. The spinal fusion was evaluated by manipulation, X-ray observation and micro-CT. Bone mineral density (BMD) and bone volume fraction (BMD) were analyzed. Osteocalcinin OCNA was detected by immunohistochemical staining. Results the accumulative release of rh BMP-2/ 尾 -TCP in vitro was about 40% at 2 weeks, which showed a slow release effect, while the control group without bionic apatite coating almost stopped releasing rh BMP-2 at 2 weeks. The results showed that the osteogenic ability of group D was the highest, with 100% fusion rate of 8 / 8%, followed by group B (group B) with 37.5% / 8% trochanter than group C (n = 37.5%). Micro-CT analysis showed that the BMD and bone volume fraction in group D were significantly higher than those in group B and group A (P < 0.05), and the bone volume fraction in group B was significantly higher than that in group A (P < 0.05). The bone mass fraction in group D was significantly higher than that in group A (P < 0.05), and the bone volume fraction in group B was significantly higher than that in group A. The differences were statistically significant (P 0.05) and OCN immunohistochemical staining showed that there were a large number of chondrocyte junctions, bone matrix deposition and active osteogenesis in group D. The formation of bone in group B was less effective than that in group D in mineralization process similar to long bone. Conclusion the newly isolated SVFs showed good bone-forming ability under the sustained release of Rh BMP-2, which could effectively promote spinal fusion and provide theoretical basis for clinical application.
【作者單位】： 上海健康醫(yī)學(xué)院附屬周浦醫(yī)院骨科;上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院骨傷科;
【基金】：上海市浦東新區(qū)衛(wèi)生系統(tǒng)學(xué)科帶頭人培養(yǎng)計(jì)劃(PWRd2015-02) 上海健康醫(yī)學(xué)院種子基金項(xiàng)目(HMSF-16-21-025) 上海市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研課題面上項(xiàng)目(201440387) 上海市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)�？平ㄔO(shè)項(xiàng)目(ZK2015A14)~~
【分類號(hào)】：R68

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