本文選題：顱腦損傷 + CAP1�。� 參考：《南通大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的通過構(gòu)建大鼠顱腦損傷模型以及原代星形膠質(zhì)細(xì)胞體外增殖模型,研究環(huán)化酶相關(guān)蛋白1(Cyclase-associated protein 1,CAP1)在顱腦損傷后的表達(dá)和分布變化,探討其對細(xì)胞增殖的作用以及潛在的機(jī)制,從而為創(chuàng)傷性顱腦損傷的臨床治療尋找新途徑。方法1、建立大鼠顱腦損傷模型,提取正常組及損傷組大鼠大腦皮層mRNA和蛋白。運(yùn)用RT-PCR、Western Blot和免疫組化方法檢測CAP1的表達(dá)變化;運(yùn)用雙重免疫熒光方法檢測顱腦損傷后CAP1在不同細(xì)胞以及與Ki-67的共定位情況。初步明確CAP1的表達(dá)變化與顱腦損傷的相關(guān)性。2、體外培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞,構(gòu)建LPS誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞炎性活化模型,用Western Blot檢測CAP1、PCNA等相關(guān)蛋白在刺激的不同時間點(diǎn)的表達(dá)變化,明確CAP1與星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的相關(guān)性。3、利用特異性分子小干擾RNA,干擾星形膠質(zhì)細(xì)胞CAP1的表達(dá),并構(gòu)建炎性活化模型,通過細(xì)胞增殖能力檢測和細(xì)胞流式分析,進(jìn)一步明確CAP1的表達(dá)對顱腦損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果1、大鼠創(chuàng)傷性顱腦損傷模型中,RT-PCR與Western Blot結(jié)果顯示損傷12h后大腦皮層中CAP1的表達(dá)開始上調(diào),并逐漸升高,7d達(dá)到高峰;免疫組化檢測結(jié)果與之相一致,CAP1在損傷組織中表達(dá)量增加。免疫熒光雙標(biāo)記分析結(jié)果顯示:CAP1與星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞存在共定位,且損傷后CAP1在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。同時,CAP1與Ki-67表達(dá)存在時間上的一致性,且在星形膠質(zhì)細(xì)胞存在共定位。2、體外研究中,運(yùn)用LPS刺激原代星形膠質(zhì)細(xì)胞,在不同的時間點(diǎn)檢測PCNA及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,發(fā)現(xiàn)隨著作用時間的延長,其表達(dá)量也逐漸升高,在此過程中,CAP1的表達(dá)量也逐漸升高。3、在干預(yù)CAP1的表達(dá)后的LPS誘導(dǎo)模型中,干擾組細(xì)胞生長受到抑制,細(xì)胞周期出現(xiàn)阻滯。結(jié)論創(chuàng)傷性腦損傷后CAP1的表達(dá)上調(diào),主要表達(dá)在星形膠質(zhì)細(xì)胞中。在顱腦損傷過程中,CAP1可能通過調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞中的細(xì)胞周期的激活,誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,從而參與顱腦損傷的過程。
[Abstract]:Objective to study the expression and distribution of cyclase associated protein (1(Cyclase-associated protein 1) and its potential mechanism after brain injury in rat brain injury model and primary astrocyte proliferation model in vitro. So as to find a new way for the clinical treatment of traumatic brain injury. Methods 1. The cerebral cortex mRNA and protein were extracted from the normal group and the injured group. The expression of CAP1 was detected by RT-PCR Western Blot and immunohistochemistry, and the expression of CAP1 in different cells and colocalization with Ki-67 was detected by double immunofluorescence method. The relationship between the expression of CAP1 and brain injury was preliminarily determined. The astrocytes were cultured in vitro, and the inflammatory activation model of astrocytes induced by LPS was established. Western Blot was used to detect the expression of CAP1 and other related proteins at different time points of stimulation. The correlation between CAP1 and astrocyte proliferation was determined. The expression of CAP1 in astrocytes was interfered by specific molecular interference RNAs, and the inflammatory activation model was constructed. The effect of CAP1 expression on astrocyte proliferation after craniocerebral injury was further determined by cell proliferation test and cell flow analysis. Results 1. The results of RT-PCR and Western Blot showed that the expression of CAP1 in cerebral cortex began to up-regulate 12 hours after traumatic brain injury, and gradually increased to the peak at 7 days. The expression of CAP1 was increased in injured tissues. The results of immunofluorescence double labeling analysis showed that there was a co-localization of CAP1 with astrocytes, and the expression of CAP1 was up-regulated in astrocytes after injury. At the same time, the expression of CAP1 was consistent with that of Ki-67, and there was colocalization of .2in astrocytes. In vitro, LPS was used to stimulate primary astrocytes, and the expression of PCNA and cyclin were detected at different time points. It was found that the expression of CAP1 increased gradually with the prolongation of the action time, and the expression of CAP1 increased gradually. In the model of LPS induced by intervention of CAP1 expression, the cell growth was inhibited and cell cycle was blocked in the interference group. Conclusion the expression of CAP1 is up-regulated in astrocytes after traumatic brain injury. In the process of brain injury, CAP1 may be involved in the process of brain injury by regulating the activation of cell cycle in astrocytes and inducing the proliferation of astrocytes.
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.15

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本文編號：1882343