本文選題：人參皂苷Rb1 + 骨關(guān)節(jié)炎　； 參考：《重慶醫(yī)科大學》2015年博士論文

【摘要】：第一部分細胞實驗實驗一IL-1p對軟骨肉瘤細胞SW1353Ⅱ型膠原代謝的影響及人參皂苷Rbl對Ⅱ型膠原的保護作用目的：觀察IL-1p及Rbl對軟骨細胞Ⅱ型膠原代謝的影響及人參皂苷Rb1 (GRb1)對軟骨細胞的保護作用。篩選最佳GRb1藥物濃度。方法：研究對象為SW1353細胞。實驗分為空白對照組、IL-1β組、人參皂苷Rb1低、中、高劑量組(20、40、80μM)。(1)用IL-1p干預SW1353細胞,應用Western Blot (WB)方法檢測空白對照組及IL-1p組CⅡ、MMP-13的表達。(2)設定3個GRb1藥物濃度(20、40、80μM),應用Western Blot、ELISA、消化法等方法,檢測不同濃度GRb1對IL-1p誘導后的SW1353細胞CⅡ、MMP-13、PⅡNP、 Hyp、CTX-II表達的影響,以篩選最佳藥物濃度。結(jié)果：與空白對照組比較,IL-1β組CⅡ表達水平明顯降低,MMP-13表達水平明顯升高。GRb1能顯著下調(diào)IL-1β刺激后的MMP-13、CTX-Ⅱ的高表達,上調(diào)IL-1β刺激后CⅡ、PIINP及Hyp低表達,且成劑量依賴性。結(jié)論：GRbl對IL-1β誘導后的SW1353細胞Ⅱ型膠原代謝有保護作用。濃度為80μM的GRb1可作為細胞干預的最佳濃度。實驗二人參皂苷Rb1對IL-1β誘導后的Notch通路的影響目的：觀察人參皂苷Rb1對IL-1β誘導后的Notch信號通路關(guān)鍵因子表達的影響。方法：以最佳GRb1濃度干預IL-1β處理后的SW1353細胞,應用WB方法檢測Notch信號通路關(guān)鍵因子Notchl及JAG1的表達；應用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(q-PCR)方法檢測Notch信號通路關(guān)鍵因子Notchl及JAG1 mRNA的表達。結(jié)果：與IL-1β組相比,GRb1能顯著下調(diào)IL-1β誘導的Notch1及JAG1的高表達。結(jié)論：GRb1能下調(diào)Notch1及JAG1的水平,調(diào)控Notch信號通路。實驗三人參皂苷Rb1調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-13防治骨關(guān)節(jié)炎的機制研究目的：通過觀察人參皂苷Rb1以及Notch信號通路特異性抑制劑DAPT對IL-1β誘導后的MMP-13、Notch1、JAG1蛋白和mRNA表達的影響,探討人參皂苷Rb1通過Notch信號通路調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-13防治骨關(guān)節(jié)炎的機制。方法：以最佳GRb1濃度及Notch信號通路特異性抑制劑DAPT干預IL-1p處理后的SW1353細胞,采用q-PCR法檢測MMP-13.Notch1及JAG1 mRNA表達,采用WB方法檢測CⅡ、MMP-13、Notch1及JAG1的表達。結(jié)果：與IL-1β組相比,GRb1組CⅡ表達水平明顯上調(diào)；MMP-13. Notch1及JAG1表達水平明顯下降。與DAPT組相比,GRb1組CⅡ、 Notchl及JAG1表達水平較高,MMP-13表達水平較低。結(jié)論：GRb1能抑制IL-1p誘導的SW1353細胞CⅡ的低表達及MMP-13、Notch1、JAG1的高表達。GRb1對OA病程中活化的Notch信號通路有一定程度的抑制作用。GRb1對骨關(guān)節(jié)炎的保護作用可能與GRb1通過調(diào)控Notch信號通路抑制MMP-13的表達相關(guān)。第二部分動物實驗實驗四人參皂苷Rbl對膝骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠的軟骨保護作用及機制研究目的：研究人參皂苷Rbl對大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎模型的軟骨組織中CⅡ、MMP-13、Notch1及JAG1表達的影響,探討人參皂苷Rbl對關(guān)節(jié)軟骨的保護作用及其機制。方法：成年SD雄性大鼠40只,隨機選取10只作為正常對照組,其余采用國際公認的Hulth法建立大鼠右膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)動物模型,并隨機分為模型對照組、GRbl組、DAPT組,每組各10只。造模后4周,模型對照組予以生理鹽水(0.3 mL,0.9%)膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,其余兩組分別予以GRb1 (0.3 mL,80 μM), DAPT (0.3 mL,10 μM)右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射,1次/周,共6周。免疫組織化學法及Western blot方法檢測各組軟骨組織中CⅡ、MMP-13、Notch1及JAG1的表達。ELISA法、消化法檢測大鼠血清中PIINP、Hyp以及CTX-Ⅱ的表達。結(jié)果：(1)HE染色結(jié)果顯示：正常組關(guān)節(jié)軟骨表面光滑,各層細胞形狀及排列整齊,潮線清晰。與正常組相比,模型組關(guān)節(jié)軟骨Mankin's評分升高,HE染色軟骨層次破壞,軟骨層變薄,軟骨表層毛糙甚則潰瘍形成。與模型組相比,其余各處理組軟骨組織Mankin's評分不同程度降低,軟骨結(jié)構(gòu)紊亂有明顯改善。(2)與正常組相比,模型組血清中PⅡNP、Hyp表達降低,CTX-II表達明顯升高。與模型組相比,DAPT組及GRb1組血清中PIINP、Hyp表達明顯升高,CTX-Ⅱ表達降低。與DAPT組相比,GRb1組血清中PIINP、Hyp表達升高,CTX-Ⅱ表達降低。(3)免疫組化法檢測結(jié)果顯示：正常關(guān)節(jié)軟骨組織中,CⅡ陽性表達較多,MMP-13、Notch1及JAG1陽性表達較少。與正常組相比,模型組CⅡ陽性表達明顯減少,而MMP-13、Notch1及JAG1陽性表達明顯增加。與模型組相比,GRb1及DAPT組CⅡ陽性表達較多,MMP-13、Notch1及JAG1陽性表達較少。與DAPT組相比,GRb1組CⅡ、Notch1及JAG1陽性表達較多,MMP-13陽性表達較少。(4)WB檢測結(jié)果顯示：與正常組相比,GRb1組CⅡ表達較少,MMP-13、Notch1及JAG1表達增加；與模型組相比,GRb1組CⅡ表達明顯增加,MMP-13、Notchl及JAG1表達顯著減少；與DAPT組相比,GRb1組CII、Notchl及JAG1表達增加,MMP-13表達減少。結(jié)論：GRb1對大鼠膝OA模型的軟骨組織Mankin's評分及結(jié)構(gòu)損傷有明顯的改善。GRb1能上調(diào)大鼠膝OA軟骨組織中CⅡ的低表達,下調(diào)MMP-13、Notch1、JAG1的高表達。
[Abstract]:The effects of IL - 1p and Rbl on type 鈪，

本文編號：1874036