本文選題：瘢痕疙瘩 + CYLD��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：第一部分CYLD在瘢痕疙瘩及正常皮膚組織中的表達及意義目的：探討腫瘤抑制基因CYLD在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮膚及正常瘢痕成纖維細胞中是否存在異常表達,以期能為瘢痕疙瘩的治療找到一個新的作用位點。方法：收集臨床手術(shù)切除的皮膚標(biāo)本72例,分為正常皮膚組(A組)、正常瘢痕組(B組)、瘢痕疙瘩組(C組)、增生性瘢痕組(D組)。免疫組織化學(xué)技術(shù)(SP法)和Western-blot檢測各組CYLD的表達情況并對結(jié)果進行差異比較；另收集瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及周圍正常皮膚組織,采用組織塊貼壁法進行原代成纖維細胞培養(yǎng),Western-blot檢測CYLD基因在三種成纖維細胞中的表達情況。結(jié)果：①免疫組化結(jié)果表明CYLD蛋白在A組(0.776±0.150)與B組(0.706±0.065)中的陽性表達明顯高于C組(0.173±0.070)與D組(0.213±0.107)；C組、D組分別于A組比較(P值均為0.00,P0.05),C組、D組分別與B組比較(P值均為0.00,P0.05)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義；②Western-blot結(jié)果顯示CYLD蛋白在正常皮膚(0.550±0.024)與正常瘢痕組織(0.442±0.075)中的表達明顯高于瘢痕疙瘩(0.068±0.013)與增生性瘢痕(0.178±0.026)；③CYLD蛋白在正常成纖維細胞(0.564±0.037)中的表達同樣明顯高于瘢痕疙瘩(0.240±0.022)與增生性瘢痕成纖維細胞(0.256±0.038)。結(jié)論：CYLD在瘢痕疙瘩組織及細胞中的表達均低于正常皮膚與正常瘢痕,表明CYLD基因的低表達可能與瘢痕疙瘩的形成具有一定的關(guān)系。第二部分曲古抑菌素A和三羥基異黃酮對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖及CYLD基因表達的影響目的：研究乙�；敢种苿┣乓志谹(TrichostatinA, TSA)和三羥基異黃酮(three hydroxy isoflavone, Genistein)對體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩成纖維細胞(Keloid fibroblasts, KFb)的增殖、凋亡及對腫瘤抑制基因CYLD表達的影響。方法：采用組織塊法原代培養(yǎng)人瘢痕疙瘩成纖維細胞,用不同濃度的Genistein和TSA作用于KFb,通過MTT實驗計算藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)及最佳干預(yù)時間。實驗分為四組,TSA組(T組)：添加含IC50 TSA的培養(yǎng)液處理；Genistein組(G組)：添加含IC50 Genistein的培養(yǎng)液處理;TSA+Genistein組(T+G組)：添加含IC50的TSA與Genistein的培養(yǎng)液處理;空白對照組：只加入等量的培養(yǎng)基。錐蟲藍拒染法觀察藥物對KFb生長的影響；流式細胞儀檢測各干預(yù)及對照組成纖維細胞的周期及凋亡；實時熒光定量PCR檢測藥物干預(yù)后各組細胞CYLD基因mRNA的表達情況；Western-blot檢測藥物干預(yù)后各組細胞CYLD蛋白的表達情況。結(jié)果：①根據(jù)MTT結(jié)果選擇600nmol/L的TSA和100μmol/L的Genistein做為后續(xù)實驗的最佳干預(yù)劑量；②流式細胞術(shù)結(jié)果表明,Genistein組、TSA組、TSA+Genistein組中G2/M期細胞所占百分比分別為(10.82±0.31)%、(11.11±0.58)%、(17.60±0.62)%,高于對照組的(7.11±0.58)%,(F=198.714,P=0.000)；G0/G1期細胞所占百分比分別為(59.25±1.23)%、(60.26±0.74)%、(48.69±1.55)%,低于對照組的(74.21±2.40)%, (F=-128.458,P=0.000)。Genistein組、TSA組、TSA+Genistein組細胞凋亡率分別為(31.40±4.07)%、(32.90±3.87)%、(61.09±0.55)%,與對照組(4.31±2.12)%比較,差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(F=177.439,P=0.000)。③熒光定量PCR結(jié)果顯示CYLDmRNA在TSA組(1.16±0.16)、Genistein組(1.00±0.09)、TSA+Genistein組(1.45±0.09)中的表達較對照組(0.47±0.10)明顯升高(F=36.373,P=0.000)。④Western blot結(jié)果表明CYLD蛋白在TSA組(0.53±0.04)、Genistein組(0.52±0.03)、TSA+Genistein組(0.87±0.05)中的表達明顯高于對照組(0.26±0.02),(F=132.629,P=0.000)。結(jié)論：曲古抑菌素A與三羥基異黃酮在單獨或聯(lián)合作用下均可促進瘢痕成纖維細胞的凋亡并抑制其增殖,作用機制可能與曲古抑菌素A和三羥基異黃酮對腫瘤抑制基因CYLD表達的上調(diào)有關(guān)。
[Abstract]:Part 1: the expression and significance of CYLD in keloid and normal skin tissue: To investigate whether the tumor suppressor gene CYLD has abnormal expression in keloid, hypertrophic scar, normal skin and normal scar fibroblasts in order to find a new action site for the treatment of keloid. 72 cases of surgical excised skin were divided into normal skin group (group A), normal scar group (group B), keloid group (group C), hypertrophic scar group (group D). Immunohistochemical technique (SP) and Western-blot were used to detect the expression of CYLD in each group and to compare the results, and to collect keloid, hypertrophic scar and normal skin. Tissue, tissue block adherence was used to culture the primary fibroblasts, and the expression of CYLD gene in three fibroblasts was detected by Western-blot. Results: (1) the immunohistochemical results showed that the positive expression of CYLD protein in group A (0.776 + 0.150) and B group (0.706 + 0.065) was significantly higher than that in group C (0.173 + 0.070) and D group (0.213 + 0.107); C Group D was compared in group A (P value was 0, P0.05), C group and D group were compared with B group (P value 0, P0.05), respectively. (2) Western-blot results showed that the expression of CYLD protein in normal skin (0.550 + 0.024) and normal scar tissue (0.442 + 0.075) was significantly higher than keloid (0.068 + 0.013) and proliferative The expression of CYLD protein in normal fibroblasts (0.564 + 0.037) was also significantly higher than that of keloid (0.240 + 0.022) and hypertrophic scar fibroblasts (0.256 + 0.038). Conclusion: the expression of CYLD in keloid tissues and cells is lower than normal skin and normal cicatricial scar, indicating that the low expression of CYLD gene can be expressed. It has a certain relationship with the formation of keloid. Second the effect of the second part of flexiostin and three hydroxyl isoflavones on the proliferation and CYLD gene expression of keloid fibroblasts: the study of acetyltransferase inhibitor, TrichostatinA, TSA, and three hydroxyisoHuang Tong (three hydroxy isoflavone, Genistein). The effects of Keloid fibroblasts (KFb) on the proliferation, apoptosis and the expression of tumor suppressor gene CYLD. Methods: the human keloid fibroblasts were cultured by tissue block method, the Genistein and TSA concentrations were used in KFb, and the median inhibitory concentration (IC50) of the drug was calculated through the MTT test. The best intervention time. The experiment was divided into four groups, group TSA (group T): adding culture solution containing IC50 TSA; Genistein group (group G): adding culture solution containing IC50 Genistein; TSA+Genistein group (T+G group): adding IC50 TSA and culture solution; blank control group: only the same amount of culture medium. Trypanosomiasis exclusion method Observe the effect of drug on the growth of KFb; flow cytometry to detect the cycle and apoptosis of the cells of each intervention and control; real-time fluorescence quantitative PCR to detect the expression of CYLD gene mRNA in each group after drug intervention; Western-blot detection of the expression of CYLD protein in each group after drug intervention. Results: (1) according to the results of MTT selection TSA of 600nmol/L and Genistein of 100 mu mol/L were the best intervention doses for subsequent experiments; the results of flow cytometry showed that the percentage of G2/M phase cells in group Genistein, TSA and TSA+Genistein was (10.82 + 0.31)%, (11.11 + 0.58)%, (17.60 + 0.62)%, higher than that of the control group (7.11 + 0.58)%, (F=198.714, P=0.000); G0/G1 period. The percentage of cells was (59.25 + 1.23)%, (60.26 + 0.74)%, (48.69 + 1.55)%, lower than that of the control group (74.21 + 2.40)%, (F=-128.458, P=0.000).Genistein, TSA, group TSA, and group TSA+Genistein, respectively (31.40 + 4.07)%, (32.90 + 3.87)%, (61.09 +%)%, compared with the control group. F=177.439 (P=0.000). (3) the results of fluorescence quantitative PCR showed that CYLDmRNA was in group TSA (1.16 + 0.16), Genistein group (1 + 0.09), and TSA+Genistein group (1.45 + 0.09) significantly increased (0.47 + 0.10) (F=36.373, P=0.000). (4) Western blot fruit showed that CYLD protein was (0.53 + 0.04) and 0.52 + 0.03 (0.53 + 0.03). The expression in group n (0.87 + 0.05) was significantly higher than that in the control group (0.26 + 0.02) (0.26 + 0.02), (F=132.629, P=0.000). Conclusion: the apoptosis of cicatricial fibroblasts and the inhibition of the proliferation of cicatricial fibroblasts can be promoted by the single or combined effect of trihydroxyisoflavone A and three hydroxyl isoflavones. The mechanism may be related to the tumor suppressor gene CYLD of the triad and three hydroxyl isoflavones. The up-regulated expression of the expression is related.

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R622

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1 文伍;瘢痕疙瘩該如何治療[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

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3 皮膚科 黎勝強;瘢痕疙瘩的防治[N];家庭醫(yī)生報;2003年

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5 水天;同息通治療瘢痕疙瘩的療效觀察[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

6 中國醫(yī)科院整形外科醫(yī)院 王連召;瘢痕疙瘩不能一切了之[N];健康報;2008年

7 武警總醫(yī)院 白曉東 陶海;瘢痕疙瘩綜合治療不復(fù)發(fā)[N];衛(wèi)生與生活報;2008年

8 胡獻國（副主任醫(yī)師）;巧除瘢痕疙瘩[N];上海中醫(yī)藥報;2003年

9 趙晴晴;瘢痕疙瘩咋治療？[N];健康時報;2004年

10 河北 主治醫(yī)師 胡松;祛除瘢痕疙瘩外治方[N];家庭醫(yī)生報;2005年

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1 毛運春;前胸部瘢痕疙瘩微循環(huán)與膠原表達研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

2 羅勇;瘢痕疙瘩差異表達基因的篩選及標(biāo)志蛋白的分析[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

3 陳曉棟;纖維化相關(guān)細胞因子受體在瘢痕疙瘩中表達的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

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5 夏煒;瘢痕疙瘩與正常皮膚成纖維細胞中結(jié)締組織生長因子差異表達及調(diào)控機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

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本文編號：1834027