本文選題：高原 + 燒傷��； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景及目的意義平、戰(zhàn)時(shí)軍事作業(yè)與日常生活中常發(fā)生燒(創(chuàng))傷,嚴(yán)重?zé)齻l(fā)生的燒傷休克,以及嚴(yán)重創(chuàng)傷導(dǎo)致的失血性休克,均可導(dǎo)致嚴(yán)重的心肌缺氧損害。大量的臨床實(shí)踐表明,與平原比較,高原低氧環(huán)境下燒傷休克和創(chuàng)傷失血性休克所致心臟等重要臟器缺氧性損害明顯加重。心臟作為循環(huán)動(dòng)力器官,嚴(yán)重的心臟損傷將進(jìn)一步減少機(jī)體氧供,加重全身其他組織器官損傷,增加嚴(yán)重創(chuàng)傷和燒傷休克死亡率與總體死亡率[1,2],嚴(yán)重影響進(jìn)駐高原地區(qū)部隊(duì)的戰(zhàn)斗力和人民群眾的身體健康。因此,探討高原低氧條件下缺氧性器官損傷特別是心臟損傷這一重大科學(xué)問(wèn)題,對(duì)保障進(jìn)駐高原地區(qū)居民和部隊(duì)的健康和戰(zhàn)斗力,乃至實(shí)現(xiàn)我國(guó)新時(shí)期的國(guó)防戰(zhàn)略目標(biāo)均具有重大意義。高原低氧條件下缺氧性心肌損害的發(fā)生規(guī)律與調(diào)控機(jī)制尚不清楚。在生理?xiàng)l件下,自噬指細(xì)胞經(jīng)溶酶體系統(tǒng)降解長(zhǎng)壽命蛋白與老化受損的細(xì)胞器以維持細(xì)胞正常功能的一種現(xiàn)象,整個(gè)自噬過(guò)程稱(chēng)為自噬流,當(dāng)自噬流通暢可為組織細(xì)胞供能和解毒,以保障細(xì)胞新陳代謝等生命活動(dòng)的順利完成。因而,完整的自噬過(guò)程對(duì)細(xì)胞在缺血缺氧等應(yīng)激條件下維持正常的生理功能至關(guān)重要。然而,許多病理因素可引起細(xì)胞自噬流受損,并由此導(dǎo)致細(xì)胞死亡與功能障礙[3,4]。既往發(fā)現(xiàn),低氧等應(yīng)激可損傷細(xì)胞自噬過(guò)程,并進(jìn)一步促進(jìn)、放大凋亡和壞死等病理?yè)p害[5]。既往研究發(fā)現(xiàn),單純燒傷因休克缺氧可引起心肌自噬體增多,是心肌損傷和功能降低的重要因素[6]。由此提示,高原低氧條件下心肌缺氧可能通過(guò)損傷細(xì)胞自噬流加重心肌損害。但是,高原環(huán)境下缺氧心肌自噬流受損的機(jī)制尚不清楚,本課題對(duì)此開(kāi)展了研究。缺氧心肌細(xì)胞中介導(dǎo)自噬流受損的因素尚不清楚。已有研究表明溶酶體的酸化在介導(dǎo)自噬體與溶酶體融合、激活溶酶體酶并促進(jìn)底物降解中發(fā)揮重要作用,是調(diào)控自噬流的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。氯化銨或氯喹可中和溶酶體的酸化,顯著阻止自噬體與溶酶體的融合,損害自噬流[7]。在溶酶體酸化過(guò)程中,離子通道和質(zhì)子泵對(duì)維持溶酶體腔內(nèi)的酸性環(huán)境起重要作用。其中,V-ATPase是一種p H敏感的質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,通過(guò)不可逆地水解ATP驅(qū)動(dòng)胞漿內(nèi)的H+進(jìn)入溶酶體,使其酸化,因此,V-ATPase是調(diào)控溶酶體酸化的關(guān)鍵途徑。但迄今為止,這種調(diào)控機(jī)制仍未完全闡明[8]。我們認(rèn)為,自噬流受損是介導(dǎo)高原低氧環(huán)境下缺氧心肌損傷的重要因素,抑制溶酶體膜上的質(zhì)子泵V-ATPase能抑制溶酶體的有效酸化。綜上,我們推測(cè)嚴(yán)重?zé)齻鹑苊阁wV-ATPase活性下降是高原低氧環(huán)境下缺氧心肌自噬流受損的關(guān)鍵分子機(jī)制。為證實(shí)上述假設(shè),本研究模擬高原低氧環(huán)境,制備高原低氧、嚴(yán)重?zé)齻约案咴脱鯊?fù)合嚴(yán)重?zé)齻Ｐ?從整體動(dòng)物層次明確心肌溶酶體V-ATPase活性下降在缺氧引起自噬流受損中的重要作用。通過(guò)研究,可望證實(shí)“高原燒傷-溶酶體V-ATPase活性下降-自噬流受損-心肌損害”這一新途徑在高原低氧環(huán)境下缺氧心肌自噬流受損中的關(guān)鍵作用,進(jìn)一步深化缺氧對(duì)重要器官損傷機(jī)制的認(rèn)識(shí),為高原低氧環(huán)境下缺氧心肌損傷乃至全身組織器官損傷的臨床防治,提供重要的理論依據(jù)。材料和方法1.平原和高原低氧嚴(yán)重?zé)齻Ｐ偷闹苽淦皆瓲C傷模型制備:取10只SD大鼠,背部脫毛后,常氧環(huán)境下采用88.8℃水浴35 s處理,造成背部約40%TBSA燙傷,制備平原燒傷模型(以下簡(jiǎn)稱(chēng)燒傷);高原燙傷模型制備:將10只SD大鼠置于高原5000 m低氧環(huán)境下對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)處理12 h,于高原3000 m條件下采用88.8℃水浴35 s處理,造成背部約40%TBSA燙傷,然后迅即置于5000 m環(huán)境下觀察,制備高原低氧復(fù)合嚴(yán)重?zé)齻Ｐ?以下簡(jiǎn)稱(chēng)高原燒傷)。傷后24 h,各組大鼠取全層皮膚組織做病理切片,光學(xué)顯微鏡下觀察組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。2.大鼠心肌損害、心肌自噬流及溶酶體V-ATPase活性檢測(cè)大鼠血清心肌酶譜及肌鈣蛋白T(c Tn T)采用試劑盒法;大鼠心肌自噬相關(guān)蛋白LC3和P62表達(dá)采用WB法。溶酶體V-ATPase活性檢測(cè)采用酶偶聯(lián)分析法。3.干預(yù)V-ATPase活性后V-ATPase、自噬流及心肌損害指標(biāo)觀測(cè)使用V-ATPase的激活劑(ATP)和抑制劑(巴弗洛霉素)后,采用電化學(xué)法發(fā)光免疫法檢測(cè)c Tn T,速率法檢測(cè)心肌酶譜,采用WB法檢測(cè)大鼠心肌自噬相關(guān)蛋白LC3和P62表達(dá),采用酶偶聯(lián)分析法檢測(cè)溶酶體V-ATPase活性。4.高原低氧環(huán)境嚴(yán)重?zé)齻?大鼠心肌損害及自噬流的檢測(cè)高原燒傷大鼠在5000 m環(huán)境觀察24 h后,取血分離血清,采用電化學(xué)法發(fā)光免疫法檢測(cè)c Tn T,速率法檢測(cè)心肌酶譜心肌肌鈣蛋白T含量;取大鼠心臟組織提蛋白,利用WB技術(shù)檢測(cè)心肌LC3和P62的表達(dá)。結(jié)果1.平原和高原嚴(yán)重?zé)齻Ｐ偷慕⒃诔Ｑ鹾湍M高原5000 m環(huán)境嚴(yán)重?zé)齻?4 h,大鼠皮膚組織疏松,結(jié)構(gòu)紊亂,基底膜斷裂失去連續(xù)性,真皮乳頭層水腫,網(wǎng)狀層膠原纖維斷裂,毛囊破壞,方向改變,皮下組織腫脹壞死,肌纖維斷裂,均為三度燒傷的典型表現(xiàn),說(shuō)明模型建立成功。2.常氧環(huán)境嚴(yán)重?zé)齻笮募p害情況、心肌組織自噬流改變及V-ATPase活性的變化正常對(duì)照組血清中的c Tn T、AST、LDH、α-HBDH、CK、CK-MB含量分別為(2.2±0.4)μg/L、(100.7±5.1)IU/L、(484.3±76.5)IU/L、(183.9±24.3)IU/L、(340.5±41.9)IU/L、(485.9±45.6)IU/L,燒傷組血清中上述指標(biāo)含量均明顯升高,分別為(4.3±0.38)μg/L、(1112.0±51.6)IU/L、(2174.0±201.3)IU/L、(833.1±52.8)IU/L、(1304.0±184.3)IU/L、(1004.0±54.0)IU/L(P值均小于0.05)。與正常對(duì)照組比較,燒傷大鼠心肌組織LC3、P62表達(dá)水平明顯升高。與正常對(duì)照組心肌組織溶酶體V-ATPase活性的(6.17±0.22)μmol/protein(mg)/h比較,燒傷組大鼠V-ATPase活性明顯下降,為(2.44±0.33)μmol/protein(mg)/h(P0.05)。3.調(diào)控V-ATPase活性對(duì)常氧環(huán)境燒傷大鼠V-ATPase、自噬流及心肌損害指標(biāo)的影響正常對(duì)照組V-ATPase活性為(4.15±0.47)μmol/protein(mg)/h,巴弗洛霉素處理后大鼠V-ATPase活性下降至(1.93±0.56)μmol/protein(mg)/h(P0.05);與燒傷組大鼠的(2.03±0.67)μmol/protein(mg)/h比較,ATP組大鼠V-ATPase活性明顯上升,為(2.87±0.70)μmol/protein(mg)/h(P0.05)。與正常對(duì)照組比較,巴弗洛霉素處理后大鼠自噬流受損;與燒傷組大鼠比較,燒傷后ATP處理則可使大鼠自噬流受損程度明顯減輕。與正常對(duì)照組比較,巴弗洛霉素組大鼠血清中的c Tn T、AST、LDH、α-HBDH、CK、CK-MB含量均明顯升高(P值均小于0.05);與燒傷組比較,ATP組大鼠血清中的上述指標(biāo)含量顯著下降(P值均小于0.05)。4.高原低氧環(huán)境嚴(yán)重?zé)齻麑?duì)心肌損害和心肌自噬流的影響高原低氧組(簡(jiǎn)稱(chēng)高原組)血清心肌損傷指標(biāo)c Tn T、AST、LDH、α-HBDH、CK、CK-MB含量均顯著高于平原正常對(duì)照組(P值均小于0.05),高原燒傷組大鼠血清心肌損傷指標(biāo)也顯著高于常氧燒傷組(P值均小于0.05)。提示高原低氧環(huán)境下嚴(yán)重?zé)齻^常氧環(huán)境燒傷心肌損害更為嚴(yán)重。正常對(duì)照、高原組、燒傷組、高原燒傷組大鼠自噬相關(guān)蛋白LC3和P62的表達(dá)依次呈上升趨勢(shì),高原組大鼠LC3和P62表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組,高原燒傷組大鼠LC3和P62顯著高于平原燒傷組,提示高原低氧環(huán)境下嚴(yán)重?zé)齻^常氧環(huán)境燒傷心肌自噬流受損更為嚴(yán)重。結(jié)論1.成功構(gòu)建了高原大鼠全層皮膚三度燙傷模型,組織學(xué)檢查證實(shí)為典型三度燙傷,說(shuō)明建模成功。2.常氧環(huán)境嚴(yán)重?zé)齻?4 h可導(dǎo)致心肌顯著受損和自噬流障礙。嚴(yán)重?zé)齻ㄟ^(guò)抑制心肌溶酶體V-ATPase活性導(dǎo)致心肌自噬流受損是心肌損害的重要機(jī)制之一。3.無(wú)論是高原低氧環(huán)境還是常氧環(huán)境,燒傷大鼠均發(fā)生心肌損害和自噬流受損,自噬體累積,但高原低氧環(huán)境嚴(yán)重?zé)齻^常氧環(huán)境嚴(yán)重?zé)齻募p害和自噬流受損更為嚴(yán)重。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R644

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1748503