本文選題：脊髓損傷　切入點(diǎn)：SOCS3　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：[背景]脊髓損傷(SCI)是神經(jīng)外科常見的危急癥之一,為國際醫(yī)學(xué)難題,近年來隨著交通運(yùn)輸及建筑業(yè)的發(fā)展,脊髓損傷的發(fā)病率亦呈逐年增高的趨勢。脊髓損傷具有高致殘率和低治愈率的特點(diǎn),SCI損傷后往往遺留截癱、大小便失禁、行走困難等神經(jīng)功能障礙,因此也喪失勞動能力,甚至喪失生活自理能力,不但給患者本人帶來巨大的痛苦,同時也給家庭社會帶來巨大的負(fù)擔(dān)。神經(jīng)再生困難是困擾醫(yī)學(xué)界的難題之一,有必要深入研究SCI后神經(jīng)再生。研究表明SCI損傷區(qū)域局部極為不利的微環(huán)境和膠質(zhì)疤痕是神經(jīng)再生的主要障礙。神經(jīng)營養(yǎng)因子在神經(jīng)再生和修復(fù)過程中一直扮演著舉足輕重的重要作用,神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT-3)是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族重要成員之一,脊髓損傷后損傷區(qū)域自身分泌的營養(yǎng)因子不足,而且同時存在抑制神經(jīng)營養(yǎng)因子發(fā)揮作用的因素, 細(xì)胞因子抑制蛋白3(SOCS3)是抑制內(nèi)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的關(guān)鍵分子之一,從而導(dǎo)致軸突再生困難。單一的治療方式促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)作用有限,聯(lián)合治療是可能促進(jìn)神經(jīng)再生的策略,應(yīng)用細(xì)胞移植不斷的供給外源性神經(jīng)營養(yǎng)因子改善損傷區(qū)域局部極為不利的微環(huán)境,同時應(yīng)用基因沉默技術(shù)抑制阻礙神經(jīng)營養(yǎng)因子發(fā)揮作用的因素,即聯(lián)合內(nèi)源性和外源性神經(jīng)營養(yǎng)因子治療脊髓損傷,有可能治療脊髓損傷促進(jìn)神經(jīng)再生。[目的]聯(lián)合siRNA技術(shù)抑制阻礙神經(jīng)營養(yǎng)因子發(fā)揮作用的因素和利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)來改善損傷區(qū)域的微環(huán)境,以此來達(dá)到促進(jìn)神經(jīng)再生修復(fù)的目的。[方法]①用貼壁法體外培養(yǎng)人體來源的臍帶間充質(zhì)細(xì)胞(HUMSC),同時進(jìn)行分離,提純和鑒定。②構(gòu)建NT-3基因真核表達(dá)載體,利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將其轉(zhuǎn)入HUMSC,構(gòu)建NT-3- HUMSC細(xì)胞,體外檢測其存活情況及NT-3表達(dá)情況。③查閱文獻(xiàn)篩選作用于SOCS3的特異性靶點(diǎn),進(jìn)行序列同源性分析,設(shè)立陰性對照,設(shè)計(jì)并合成siRNA,同時在體外檢測功能。④建立SD大鼠脊髓損傷模型分為為：Ⅰ.假手術(shù)組10只；Ⅱ.T12全脊髓橫斷損傷模型40只,隨機(jī)分為4組,分別；生理鹽水治療組10只；siRNA + NT-3-HUMSCs治療組10只；NT-3-HUMSCs治療組10只；siRNA治療組10只。對于假手術(shù)組,僅打開椎板,暴露脊髓,但不損傷脊髓。其他試驗(yàn)組術(shù)后6周橫斷損傷局部注射siRNA,7周后再次移植NT-3-HUMSCs、HUMSCs或NT-3。以上各組造模成功后,分別存活1,2月和3月進(jìn)行運(yùn)動功能評價和神經(jīng)電生理監(jiān)測。⑤對SD大鼠進(jìn)行灌注固定和取材,觀察局部膠質(zhì)疤痕降解情況和軸突再生情況,同時運(yùn)用RT-PCR和Western blot檢測NT-3蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖[結(jié)果]1)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)經(jīng)構(gòu)建的NT-3-HUMSCs表達(dá)神經(jīng)營養(yǎng)因子3較HUMSCs明顯增多且NT-3能夠促進(jìn)誘導(dǎo)人臍帶基質(zhì)細(xì)胞朝神經(jīng)元方向分化。2) SOCS3-siRNA+NT-3-HUMSCs聯(lián)合治療SD大鼠脊髓損傷組BBB評分明顯高于NT-3-HUMSCs和SOCS3-siRNA和假手術(shù)組。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)3) SOCS3-siRNA+NT-3-HUMSCs聯(lián)合治療SD大鼠脊髓損傷組爬網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)表明神經(jīng)功能恢復(fù)明顯高于NT-3-HUMSCs和SOCS3-siRNA和假手術(shù)組。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4) siRNA + NT-3-HUMSCs治療組較生理鹽水治療組橫斷脊髓空洞明顯縮小(p0.05),差異顯著5)追蹤結(jié)果表明iRNA+NT-3-HUMSCs治療組較生理鹽水治療組神經(jīng)軸突生長明顯。6)神經(jīng)電生理檢測損傷12周后治療組P40潛伏期較假手術(shù)組縮短,siRNA + NT-3-HUMSCs治療組較生理鹽水治療組比較潛伏期縮短明顯,波幅升高明顯,差異有顯著意義(p0.05)。[結(jié)論]NT-3-HUMSCs聯(lián)合基因沉默SOCS3可以改善外源性NT-3表達(dá)及SOCS3抑制作用增加內(nèi)源性NT-3利用,改善局部微環(huán)境,從而達(dá)到促進(jìn)損傷神經(jīng)修復(fù)
[Abstract]:Neurotrophic factor - 3 ( NT - 3 ) plays an important role in promoting nerve regeneration .
2.T12 spinal cord transection injury model 40 rats were randomly divided into 4 groups , respectively ;
10 rats were treated with physiological saline ;
10 cases of siRNA + NT - 3 - HUMSCs treatment group ;
NT - 3 - HUMSCs treated group was 10 ;
The results showed that the expression of NT - 3 - HUMSCs and NT - 3 - HUMSCs could improve the expression of NT - 3 - HUMSCs .

【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2

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8 鄭穎t，

本文編號：1706737