本文選題：干細(xì)胞　切入點：腺病毒科　出處：《中國組織工程研究》2017年09期

【摘要】：背景:腺病毒載體和慢病毒載體均是較好的組織工程基因載體,兩者在介導(dǎo)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的差異尚待探究。目的:比較腺病毒和慢病毒載體介導(dǎo)EGFP/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、持續(xù)時間及外源基因表達(dá)差異。方法:將第5代兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分3組培養(yǎng),A組以腺病毒載體介導(dǎo)EGFP/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Ad-EGFP/BMP-2)轉(zhuǎn)染細(xì)胞,B組以慢病毒載體介導(dǎo)EGFP/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Lenti-EGFP/BMP-2)轉(zhuǎn)染細(xì)胞,C組為未進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24 h、48 h、72 h、1周、3周,檢測EGFP基因表達(dá);轉(zhuǎn)染72 h后,免疫組織化學(xué)觀察細(xì)胞骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的表達(dá);轉(zhuǎn)染后72 h、1周、3周,Western blot檢測骨形態(tài)發(fā)生蛋白2蛋白表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:(1)轉(zhuǎn)染24 h后,A、B組可見EGFP表達(dá),A組明顯強于B組;轉(zhuǎn)染48 h后,A、B組熒光進(jìn)一步增強;轉(zhuǎn)染72 h后,A組熒光強度近高峰,B組熒光持續(xù)增強。轉(zhuǎn)染1周后,A組熒光強度開始下降,B組熒光強度仍然增強。轉(zhuǎn)染3周后,A組熒光強度明顯下降甚至消失,B組熒光強度有所下降,但仍然保持一定的表達(dá)。C組在各時間點均無EGFP表達(dá);(2)A、B組胞漿均呈骨形態(tài)發(fā)生蛋白2陽性表達(dá),C組呈陰性表達(dá);(3)轉(zhuǎn)染72 h后,A組骨形態(tài)發(fā)生蛋白2蛋白表達(dá)量強于B組;轉(zhuǎn)染1周后,A組表達(dá)下降,B組表達(dá)增強并強于A組;轉(zhuǎn)染3周后,A組表達(dá)微弱,B組持續(xù)表達(dá)且明顯強于A組;(4)結(jié)果表明,相對腺病毒載體,慢病毒載體介導(dǎo)EGFP/骨形態(tài)發(fā)生蛋白2基因轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在表達(dá)持續(xù)時間上具有一定的優(yōu)勢。
[Abstract]:Background: adenovirus vector and lentivirus vector are good tissue engineering gene vectors. The difference between them in bone morphogenetic protein-2 mediated transfection of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells remains to be explored.Aim: to compare the transduction efficiency, duration and foreign gene expression of EGFP/ bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) mediated by adenovirus and lentivirus vector in rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in vitro.The expression of EGFP gene was detected at 24 h, 48 h and 72 h after transfection, and the expression of bone morphogenetic protein-2 (BMP 2) was observed by immunohistochemistry after 72 h transfection, and the expression of bone morphogenetic protein 2 (BMP 2) was detected by Western blot at 1 week and 3 weeks after transfection.Results and conclusion 24 h after transfection, EGFP expression in group A was significantly higher than that in group B, fluorescence in group A was further enhanced 48 h after transfection, fluorescence intensity of group A was near peak after 72 hours of transfection.One week after transfection, the fluorescence intensity of group A began to decrease and that of group B was still enhanced.After 3 weeks of transfection, the fluorescence intensity of group A was significantly decreased or even decreased in group B.But there was no EGFP expression in group C at all time points. The expression of bone morphogenetic protein 2 in cytoplasm of group C was negative. The expression of bone morphogenetic protein-2 in group C was higher than that in group B 72 h after transfection. The expression of bone morphogenetic protein 2 in group A was higher than that in group B at 72 h after transfection, the expression of bone morphogenetic protein 2 in group A was higher than that in group B.After 1 week of transfection, the expression of down-expression in group A was enhanced and stronger than that in group A, and the expression of weakly expressed in group A was significantly stronger than that in group A after 3 weeks of transfection. The results showed that the expression of adenovirus vector was higher than that of group A.Lentivirus vector mediated EGFP/ bone morphogenetic protein-2 gene transfection into rabbit bone marrow mesenchymal stem cells has a certain advantage in expression duration.
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診創(chuàng)傷外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31160199) 廣西區(qū)自然科學(xué)基金資助項目(2014GXNSFAA118263)~~
【分類號】：Q78;R68

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本文編號：1705688