本文選題：VEGF　切入點：BMP　出處：《新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：1背景由創(chuàng)傷、感染和骨腫瘤引起的大段骨缺損的修復(fù)治療一直是骨科醫(yī)師面臨的難題之一。目前在臨床中,自體骨移植一直被認(rèn)為是治療骨缺損的金標(biāo)準(zhǔn)之一,但是當(dāng)自體骨移植修復(fù)骨缺損后會常�；蛎媾R一些感染、疼痛、神經(jīng)損傷等并發(fā)癥,同時由于自體骨移植取材有限,從而限制了其在臨床上的應(yīng)用。隨著對骨移植替代材料的不斷深入研究,同種異體骨憑借其來源廣、可滿足多種形態(tài)的骨缺損修復(fù),有骨誘導(dǎo)、骨傳導(dǎo)等優(yōu)點,在臨床上得到廣泛應(yīng)用,然而同種異體骨在修復(fù)骨缺損的過程中會面臨著再血管化和骨重建等難題,針對這些難題,許多學(xué)者都進(jìn)行了不斷探索研究,我們在前期試驗中也通過把同種異體骨異位于兔右側(cè)大腿血供豐富的股直肌與股內(nèi)側(cè)肌間隙內(nèi)近隱動脈處,經(jīng)過一段時間同種異體骨可再血管化為活化骨。為了能加速同種異體骨異位再血管化為活化骨的進(jìn)程,縮短二期移植骨爬行替代修復(fù)骨缺損的時間,在本實驗中,我們選擇中國白兔作為實驗對象,以兔同種異體脫鈣骨作為移植骨材料,設(shè)想通過施加外源性血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)和骨活性發(fā)生蛋白(BMP)加快同種異體骨異位血管化為活化骨的速度,縮短其二期骨缺損修復(fù)的爬行替代的進(jìn)程。2目的探討外源性VEGF復(fù)合BMP對兔同種異體脫鈣骨異位構(gòu)建血管化骨進(jìn)程的影響。3方法選用成年中國白兔210只,雌雄不限,隨機(jī)取30只作為供體制備同種異體脫鈣骨,其余按隨機(jī)數(shù)字表分為實驗組:實驗組A(同種異體脫鈣骨+VEGF+BMP)60只、B(同種異體脫鈣骨+VEGF)60只,對照組(同種異體脫鈣骨)60只。實驗組A將制備好的1.5 cm長同種異體脫鈣脛骨段置于兔右大腿股直肌與股內(nèi)側(cè)肌間隙近隱動脈處,并用2根0.8mm克氏針將其固定于股骨上,于其附近皮下植入一枚膠囊滲透壓泵,泵內(nèi)載有濃度為0.5μg/ml的VEGF溶液200μl,同時將濃度為1μg/ml的BMP溶液取1ml滴在凝膠海綿上并植入移植骨內(nèi);實驗組B做與實驗組A相同處理,但不施加BMP;對照組取等長同種異體脫鈣骨同法置于兔右大腿相應(yīng)部位。每組分別于術(shù)后0、2、4、6、8、10、12周處死10只白兔,通過大體標(biāo)本觀察、HE染色觀察、CD34計數(shù)、I型膠蛋白熒光強(qiáng)度檢測、Ca2+含量檢測和骨堿性磷酸酶檢測,分析判斷外源性生長因子對同種異體脫鈣骨異位再血管化和成骨活性的影響。4、結(jié)果一、大體標(biāo)本觀察結(jié)果術(shù)后2周三組實驗白兔術(shù)后切口愈合均良好,未見明顯炎性溶液滲出。術(shù)后4周,觀察到實驗組A骨段表面有少量結(jié)締組織覆蓋,且與周圍軟組粘連較為緊密,與2周時相比骨段表面出現(xiàn)一些較為表淺的骨吸收陷窩;實驗組B觀察到異位骨段與周圍軟組織有一定的粘連,骨段表面也出現(xiàn)少許淺表性陷窩;對照組骨段與周圍組織粘連較為疏松,骨段表面也仍然較為光滑、無明顯陷窩。隨著預(yù)構(gòu)時間的進(jìn)一步延長,骨段與周圍組織粘附緊密,有大量纖維結(jié)締組織長入髓腔,形成較疏松的纖維結(jié)締組織支架,取出骨段發(fā)現(xiàn)骨表面色澤較暗,陷窩進(jìn)一步加深。二、HE染色結(jié)果0周時,三組骨段骨組織哈佛管內(nèi)殘留極少量的結(jié)締組織,未見明顯的血管殘留結(jié)構(gòu)。2周時,實驗組A可見較少量新生血管和破骨細(xì)胞分布在哈弗管內(nèi),實驗組B哈弗管周圍無明顯的血管長入,僅有少許肉芽組織,對照組觀察大哈弗氏管周圍無明顯變化。4周時,實驗組A哈佛管內(nèi)出現(xiàn)較多新生微血管分布在管腔旁;實驗組B哈弗管管腔增大,管內(nèi)新生微血管增多且伴隨著部分致密結(jié)締組織;對照組的哈弗氏管內(nèi)逐漸出現(xiàn)少許的微血管樣結(jié)構(gòu),余未見明顯變化。當(dāng)預(yù)構(gòu)進(jìn)程進(jìn)一步延長可發(fā)現(xiàn)哈弗管基本穩(wěn)定,管內(nèi)分布較多粗、細(xì)不等的成熟骨小梁,且伴隨著大量的骨細(xì)胞分布其周圍。三、免疫熒光檢測結(jié)果CD34免疫熒光染色結(jié)果顯示:CD34的陽性血管數(shù)量隨著時間的延長,三組的實驗結(jié)果都呈現(xiàn)先增加,然后減少的趨勢,且實驗組A和實驗組B在前8周的增加趨勢明顯高于對照組,但實驗組A和實驗組B無明顯差別。實驗組A的CD34陽性血管數(shù)和實驗組B的CD34陽性血管數(shù)均在術(shù)后第6周達(dá)到最大值,對照組的陽性血管數(shù)在第8周達(dá)到最大值,實驗組A第6周的血管生成量明顯多于對照組第8周的血管生成量,同時實驗組A的血管生成量稍多于對照組第B周的血管生成量,實驗組B第6周的血管生成量也多于對照組第8周的血管生成量,且做組間比較(P0.05)。實驗組A組內(nèi)作比較,前六周隨著觀察時間的增加,CD34陽性血管數(shù)也呈現(xiàn)增加趨勢,且4周的CD34陽性血管數(shù)少于6周時CD34陽性血管數(shù),(P0.05),8周時的CD34陽性血管數(shù)也少于6周時CD34陽性血管數(shù)(P0.05);實驗組B組內(nèi)比較結(jié)果與實驗組A相似;對照組組內(nèi)對比發(fā)現(xiàn),6周時的CD34陽性血管數(shù)同樣少于8周時的CD34陽性血管數(shù),10周CD34陽性血管數(shù)少于8周時CD34陽性血管數(shù)(P0.05)。I型膠原蛋白的熒光強(qiáng)度值,三組I型膠原蛋白的熒光強(qiáng)度值總體變化趨勢:實驗組A在術(shù)后到第6周內(nèi)I型膠原蛋白吸光度值一直處于上升狀態(tài),從第6周到第12周內(nèi)吸光度值呈下緩慢降趨勢;前6周內(nèi)每次觀察點值與上一觀察點比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意(P0.05),第6周與第10周、12周比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實驗組B從0周到第8周一直處于上升趨勢,從第8周到第12周I型膠原蛋白熒光強(qiáng)度值出現(xiàn)下降趨勢。且在前8周內(nèi),每次觀察點的吸光度值與上一觀察點比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),第8周與第10周比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);對照組從0周到第10周一直處于上升趨勢,從第10周到第12周I型膠原蛋白熒光強(qiáng)度值出現(xiàn)下降趨勢。且在前10周內(nèi),每次觀察點的吸光度值與上一觀察點比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),第10周與第12周比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);A第6周時I型膠原蛋白的熒光強(qiáng)度大于實驗組B第10周數(shù)值,實驗組B第8周時I型膠原蛋白的熒光強(qiáng)度大于對照組第10周數(shù)值,但組間對比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。四、鈣含量檢測隨著同種異體脫鈣骨在肌間隙內(nèi)構(gòu)建血管化骨的進(jìn)程延長,發(fā)現(xiàn),三組的鈣含量都在呈現(xiàn)不同程度的下降。對于實驗組A結(jié)果示,在4周到6周的觀察節(jié)點,鈣含量由較為明顯的下降趨勢,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。從6周到8周結(jié)果示鈣含量有稍微的增加,但統(tǒng)計學(xué)無意義。從第8周到12周,鈣含量仍出現(xiàn)下降的趨勢。實驗組B術(shù)鈣含量在第6周到8周有下降趨勢,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);但是在第8周到10周,鈣含量又出現(xiàn)增加趨勢,但總體趨勢是下降的,且無統(tǒng)計學(xué)意義;第10周到12周,鈣含量又呈現(xiàn)下降的趨勢。對照組的鈣含量同樣隨著時間的延長,呈現(xiàn)逐漸下降趨勢,雖然在個別觀察點有增加趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。五、骨堿性磷酸酶檢測隨著構(gòu)建血管化骨及骨活化的時間增加,實驗組ABALP的含量則在第6周達(dá)到最大值,且在第6周到第10周出現(xiàn)緩慢下降趨勢。實驗組B在第8周前其BALP含量也在逐漸的增加,在第8周達(dá)到峰值,然后在第10周至第12周出現(xiàn)略微下降趨勢。對照組則在第10周前,骨組中BALP的含量呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢,在第10周出現(xiàn)最大值。5結(jié)論兔同種異體脫鈣骨在異位構(gòu)建血管化骨的過程中,施加外源性的生長因子VEGF和BMP可以明顯促進(jìn)同種異體脫鈣骨異位構(gòu)建血管化骨的進(jìn)程。
[Abstract]:1 background by trauma, repair treatment of large bone defect caused by bone tumor and infection is one of the problems in Medical Department of orthopedics. Currently in clinical, autologous bone grafting has been considered one of the gold standard for the treatment of bone defect, but when facing some often or infection, autogenous bone repair bone defect after transplantation pain at the same time, nerve injury and other complications, the autogenous bone graft limited material, thus limiting its clinical application. With the deepening of research on material for bone transplantation, allograft bone with its wide source, can meet the various forms of bone defect repair, bone induction, bone conduction and other advantages, is widely used in clinic, however, allograft bone will be faced with the revascularization and bone reconstruction problem in the process of repairing bone defect, aiming at these problems, many scholars have been exploring the research, we in the front During the experiment also through the allograft bone is the right thigh with rich blood supply of rabbit rectus femoris and vastus medialis gap near the saphenous artery, after a period of time of allograft revascularization can be activated. In order to accelerate bone allograft revascularization for ectopic bone activation process, shorten two during the period of bone creeping substitution of bone defect repair time, in this experiment, we choose Chinese rabbits as experimental object, using rabbit allogenic decalcified bone as bone graft material, by applying exogenous growth factor on vascular endothelial cells (VEGF) and the activity of bone protein (BMP) to accelerate bone allograft for ectopic blood vessels the activation of bone speed, shorten the repair of bone defects the second phase of the creeping substitution process.2.3 method to explore the influence of exogenous VEGF compound BMP on rabbit allogenic decalcified bone heterotopic vascularized bone construction process to choose 騫翠腑鍥界櫧鍏，

本文編號：1666262