本文選題：細(xì)胞老化　切入點(diǎn)：生長因子　出處：《中國矯形外科雜志》2017年01期

【摘要】：[目的]構(gòu)建人椎間盤髓核細(xì)胞(nucleus pulposus cells,NPCs)老化模型,探討老化NPCs中生長因子的表達(dá)差異及其與椎間盤退變(intervertebral disc degeneretion,IDD)的關(guān)系。[方法]體外單層培養(yǎng)人正常NPCs系(Scien Cell 4800),連續(xù)1:2傳代培養(yǎng),誘導(dǎo)建立NPCs復(fù)制性老化(replication senescence cells,RS)模型;不同濃度雙氧水作用于未老化細(xì)胞,模擬椎間盤氧化應(yīng)激微環(huán)境,誘導(dǎo)建立應(yīng)激誘導(dǎo)過早老化(stress induced premature senescence cells,SIPS)模型。細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色檢測NPCs陽性表達(dá)率。流式細(xì)胞儀檢測G1期細(xì)胞比例及細(xì)胞凋亡率。CCK-8檢測不同代次細(xì)胞增殖活性。應(yīng)用Agilent表達(dá)譜芯片初步篩選出正常與老化NPCs中差異性表達(dá)的生長因子,實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證所篩選生長因子的表達(dá)差異。[結(jié)果]NPCs經(jīng)連續(xù)傳代、雙氧水誘導(dǎo)可分別構(gòu)建RS模型及SIPS模型。兩種老化模型SA-β-Gal陽性表達(dá)的細(xì)胞比例均高于70%,G1期細(xì)胞比例均高于80%,凋亡率均低于10%。Agilent表達(dá)譜芯片篩選出的堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)與血管內(nèi)皮生長因子a(vascular endothelial growth factor a,VEGF-a)在不同老化模型中,表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),特別是b FGF在SIPS模型中的表達(dá)顯著高于RS模型(P0.05)。兩種老化模型中的b FGF表達(dá)量顯著高于正常組(P0.05)。[結(jié)論]雙氧水誘導(dǎo)所引起的氧化應(yīng)激可促進(jìn)細(xì)胞過早老化。老化NPCs上調(diào)b FGF,且SIPS模型中的上調(diào)幅度顯著高于RS,SIPS可能比RS更加上調(diào)b FGF。不同老化誘導(dǎo)條件下,生長因子的表達(dá)可能存在差異,b FGF可能參與椎間盤再血管化及自我修復(fù)。
[Abstract]:[objective] to construct the aging model of pulposus cells of nucleus pulposus of human intervertebral disc, and to explore the difference of growth factor expression in aging NPCs and its relationship with intervertebral disc degeneretion (IDD). The NPCs replicating senescence cells RSs model was induced, and different concentrations of hydrogen peroxide acted on the unaged cells to simulate the oxidative stress microenvironment of the intervertebral disc. The senescence-associated 尾 -galactosidase SA- 尾 -galactosidase (SA- 尾 -galactosidase) staining was used to detect the positive expression of NPCs. Flow cytometry was used to detect the percentage of cells in G1 phase and the rate of cell apoptosis. CCK-8 was used to detect the different generations of cells. Proliferative activity. Agilent expression microarray was used to screen the differentially expressed growth factors in normal and aging NPCs. Real-time fluorescent quantitative PCR was used to further verify the difference of expression of growth factors. [results] NPCs was subcultured continuously. The ratio of SA- 尾 -Gal positive cells in both aging models was higher than that in 70 G 1 phase cells, and the percentage of apoptosis was lower than that of basic fibroblast growth screened by 10%.Agilent expression microarray. VEGF-a and a(vascular endothelial growth factor FGFs were observed in different aging models. The expression of b FGF in SIPS model was significantly higher than that in RS model P0 05. The expression of b FGF in two aging models was significantly higher than that in normal group. [conclusion] oxidative stress induced by hydrogen peroxide can be induced by hydrogen peroxide. Aging NPCs upregulated bFGFs, and the upregulation rate in SIPS model was significantly higher than that in RSS-SIPS model. There may be differences in the expression of growth factor B FGF, which may be involved in disc revascularization and self-repair.
【作者單位】： 東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院骨科;東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院普外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81272035;81572170) 青年科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81201423)
【分類號(hào)】：R681.53

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