本文選題：小鼠　切入點(diǎn)：去盆腔神經(jīng)支配　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景:盆腔神經(jīng)損傷引起的結(jié)直腸動(dòng)力障礙在結(jié)直腸外科很常見,常會(huì)引起腹部脹痛、頑固性便秘、排糞不盡、直腸墜脹等臨床表現(xiàn),嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,臨床處理困難[1]。在直腸癌手術(shù)中,有多個(gè)容易造成自主神經(jīng)損傷的危險(xiǎn)區(qū)。有研究顯示,中低位直腸癌根治術(shù)中游離直腸造成支配直腸的盆腔自主神經(jīng)損傷引起術(shù)后排便功能障礙的發(fā)生率高達(dá)71%[2]。臨床上觀察到,部分排便功能障礙的患者其癥狀隨時(shí)間推移呈緩慢恢復(fù)趨勢(shì),說明機(jī)體存在適應(yīng)性恢復(fù)的機(jī)制,探討盆腔神經(jīng)損傷后的這一適應(yīng)性恢復(fù)的機(jī)制對(duì)臨床防治有重要價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn),去盆腔神經(jīng)支配(pelvic nerve denervation,PND)大鼠的結(jié)腸傳輸功能約1周可恢復(fù)[3]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)PND大鼠模型結(jié)腸黏膜瞬時(shí)受體電位通道錨蛋白亞家族成員1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA 1)蛋白水平顯著降低,但是隨著時(shí)間的推移,呈現(xiàn)恢復(fù)的趨勢(shì)[4],而且結(jié)腸傳輸功能的恢復(fù)與其結(jié)腸粘膜TRPA 1的表達(dá)水平有相關(guān)性。提示TRPA1可能參與了PND大鼠結(jié)腸動(dòng)力的適應(yīng)性恢復(fù)過程。TRPA 1是表達(dá)于腸嗜鉻(enterochromaffin,EC)細(xì)胞的感受器分子,能夠感知腸腔內(nèi)化學(xué)與物理的刺激信號(hào),并介導(dǎo)EC細(xì)胞釋放5-HT調(diào)控腸動(dòng)力[5]。而在眾多的5-HT受體中,5-HT3及5-HT4受體在腸粘膜感覺神經(jīng)調(diào)控中的作用最受關(guān)注[6]。本研究擬建立PND小鼠模型,利用TRPA1基因敲除小鼠深入研究TRPA1在PND小鼠腸動(dòng)力適應(yīng)性恢復(fù)過程中的作用,并觀察下游的5-HT3及5-HT4受體蛋白表達(dá)水平的變化,初步了解TRPA1的作用機(jī)制。目的1、建立去盆腔神經(jīng)支配(PND)小鼠模型。2、了解PND小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸TRPA1蛋白的表達(dá)變化。3、利用TRPA1基因敲除小鼠,探討TRPA1在PND小鼠結(jié)腸動(dòng)力變化中的作用機(jī)制。方法一、實(shí)驗(yàn)對(duì)象和分組1、將108只成年雄性C57小鼠隨機(jī)分為3部分:結(jié)腸傳輸試驗(yàn)36只,分為PND組和假手術(shù)組,各18只。直腸敏感性試驗(yàn)36只,分為PND組和假手術(shù)組,各18只。TRPA1蛋白檢測(cè)36只,分為PND組和假手術(shù)組,各18只。2、用18只野生型小鼠和18只TRPA1基因敲除小鼠建立PND模型,用于觀察遠(yuǎn)端結(jié)腸5-HT3和5-HT4受體蛋白的表達(dá)變化。二、模型制備1、PND模型組:小鼠開腹后分離出雙側(cè)盆腔神經(jīng),顯微剪剪斷。2、假手術(shù)組:小鼠開腹后,不剪斷盆腔神經(jīng)。3、腸傳輸試驗(yàn)的小鼠,在盲腸埋入硅膠管。直腸敏感性試驗(yàn)的小鼠,在小鼠腹外斜肌處埋入鉑金電極。三、檢測(cè)指標(biāo)1、結(jié)腸傳輸功能檢測(cè):術(shù)后(postoperative day,POD)第1、3、7天三個(gè)時(shí)相點(diǎn),從預(yù)置硅膠管注射亞甲藍(lán)注射液,20分鐘后處死小鼠,通過計(jì)算各組小鼠結(jié)腸組織中亞甲藍(lán)分布占結(jié)腸組織總長度的百分比(傳輸比例)檢測(cè)結(jié)腸傳輸功能。2、直腸敏感性檢測(cè):術(shù)后第1、3、7天三個(gè)時(shí)相點(diǎn),采用結(jié)直腸擴(kuò)張(CRD)-內(nèi)臟運(yùn)動(dòng)反射(VMR)評(píng)估各組直腸敏感性的改變。3、Western Blot檢測(cè):術(shù)后第1、3、7天三個(gè)時(shí)相點(diǎn)遠(yuǎn)端結(jié)腸黏膜中的TRPA1,5-HT3和5-HT4受體蛋白表達(dá)情況。結(jié)果1、小鼠PND模型建立情況:雙側(cè)盆腔神經(jīng)切斷后均會(huì)出現(xiàn)尿潴留,需要每日按摩膀胱協(xié)助排尿。結(jié)腸傳輸試驗(yàn)顯示:與假手術(shù)組相比,PND模型組小鼠術(shù)后第1天與第3天結(jié)腸傳輸功能顯著降低(t=10.065,2.986,P0.001,P=0.017),但PND模型組小鼠結(jié)腸傳輸功能隨時(shí)間推移呈顯著恢復(fù)趨勢(shì),術(shù)后第7天時(shí)與假手術(shù)組已無差異(t=0.459,P0.05)。內(nèi)臟敏感性試驗(yàn)顯示PND模型組小鼠術(shù)后第1、3、7天內(nèi)臟敏感性均顯著降低(t=3.134,2.543,3.357,P=0.011,0.029,0.007),但隨時(shí)間推移也呈恢復(fù)趨勢(shì)。2、小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸TRPA1蛋白表達(dá)檢測(cè)顯示:與假手術(shù)組相比,PND模型組小鼠術(shù)后第1、3天的結(jié)腸遠(yuǎn)端TRPA1蛋白表達(dá)均顯著降低(均P0.01),但PND模型組小鼠結(jié)腸遠(yuǎn)端TRPA1蛋白表達(dá)隨時(shí)間推移呈顯著恢復(fù)趨勢(shì),術(shù)后第7天與假手術(shù)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、去盆腔神經(jīng)支配后,TRPA1敲除小鼠和野生型小鼠結(jié)腸遠(yuǎn)端5-HT3和5-HT4受體蛋白表達(dá)都呈現(xiàn)隨時(shí)間推移而恢復(fù)的趨勢(shì)。與野生型小鼠相比,TRPA1基因敲除小鼠術(shù)后第1天與第3天結(jié)腸遠(yuǎn)端5-HT3受體蛋白表達(dá)明顯降低(P=0.02,0.048),第7天無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.203)。同樣,與野生型小鼠相比,TRPA1基因敲除小鼠術(shù)后第1、3、7天結(jié)腸遠(yuǎn)端5-HT4受體蛋白表達(dá)均明顯降低(P0.001,P=0.036,0.011)。結(jié)論1、去盆腔神經(jīng)支配后,小鼠結(jié)腸傳輸和直腸敏感性減弱,但隨時(shí)間推移可逐漸恢復(fù)。2、去盆腔神經(jīng)支配后,小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸TRPA1表達(dá)顯著降低,但隨時(shí)間推移可逐漸恢復(fù)。3、TRPA1基因敲除后,去盆腔神經(jīng)支配小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸5-HT3和5-HT4受體蛋白表達(dá)仍然隨時(shí)間呈上調(diào)趨勢(shì),但表達(dá)上調(diào)的程度較野生型小鼠顯著降低。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R656

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊漢勇;田躍;童衛(wèi)東;劉曉波;王李;李凡;劉寶華;;去盆腔神經(jīng)對(duì)大鼠結(jié)腸動(dòng)力與結(jié)腸黏膜瞬時(shí)受體電位通道A1的影響[J];中華消化外科雜志;2015年06期

2 紀(jì)雷;陳強(qiáng);何雨芩;林玲;冉亞梅;朗秀瓊;李磊;王建明;王正國;楊敏;;PTSD狀態(tài)下HCN2-GLT-1在脊髓水平協(xié)同調(diào)控內(nèi)臟高敏感性-中樞敏化的作用及機(jī)制研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2014年10期

3 朱金照;張志堅(jiān);劉建強(qiáng);;替加色羅對(duì)肝硬化大鼠腸傳輸功能的影響[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2007年03期

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本文編號(hào)：1607393