發(fā)布時(shí)間：2018-03-12 22:13

  本文選題：七氟烷后處理　切入點(diǎn)：延遲相遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分：七氟烷后處理與延遲相遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理在心臟保護(hù)中鈣調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)差異目的：鈣調(diào)節(jié)蛋白——L型鈣通道(L-type Ca2+ channels, LTCCs)、蘭尼堿受體2(ryanodine receptor isoform 2,RyR2)以及鈉鈣交換體1 (Na+/Ca2+ exchanger isoform 1,NCX1)被認(rèn)為心肌缺血再灌注損傷的重要保護(hù)機(jī)制。七氟烷后處理(sevoflurane postconditioning, SevoPoC)以及延遲相遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理(delayed remote ischemic preconditioning, DRIPC)均可以減輕缺血再灌注損傷保護(hù)心臟。本研究利用離體大鼠心臟灌注模型探討三種鈣調(diào)節(jié)蛋白在SevoPoC和DRIPC中的表達(dá)。方法：血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定(平衡期)30min后,以缺血30min復(fù)灌60min建立缺血再灌注損傷模型,40只SD大鼠隨機(jī)分入以下4組,每組10只：(1)時(shí)間對照組(Time control,TC)：離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液120min；(2)缺血再灌注組(Ischemia/reperfusion, I/RI):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min后,停止灌注30min,恢復(fù)灌注60min；(3)七氟烷后處理組(SevoPoC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min后,停止灌注30min,在復(fù)灌即刻使用含3%的七氟烷持續(xù)灌注10min,然后使用氧合的KH液灌注50min；(4)延遲相遠(yuǎn)隔缺血預(yù)處理組(DRIPC):在游離心臟前一天,SD大鼠麻醉(烏拉坦,1.5g/kg,腹腔注射)后在單側(cè)后肢以壓脈帶行四個(gè)周期的間斷缺血復(fù)流(4×5min/5min),肢端缺血經(jīng)過改良的脈搏氧監(jiān)測儀進(jìn)行確認(rèn)。觀察SevoPoC (3% v/v)和]DRIPC的效果。各實(shí)驗(yàn)組均持續(xù)監(jiān)測心率(heart rate, HR),左心室發(fā)展壓(left ventricular developed pressure, LVDP),最大LVDP上升速率(+dp/dt)及最大LVDP下降速率(-dp/dt)。檢測心肌梗死面積和冠脈流出液肌鈣蛋白I(Cardiac troponin I, cTnI)水平。分別用蛋白印跡法和RT-PCR檢測LTCCs、RyR2以及NCX1的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果：SevoPoC和DRIPC均能明顯加快LVEDP, RPP和±dp/dt向基線水平恢復(fù)。與SevoPoC相比,DRIPC組的RPP下降更加明顯(P0.05)。同時(shí),兩者可以降低心肌缺血再灌注損傷后肌鈣蛋白I的釋放。相比于DRIPC, SevoPoC減少缺血再灌注損傷引起的心肌梗死面積效果更加顯著(16.50%±4.54% vs 22.34%±4.02%,P0.001)。SevoPoC,而不是DRIPC能夠更加明顯地抑制NCX1的激活(0.59±0.09,I/RI組vs0132±0.16,SevoPoC組,P0.01；vs 0.57±0.14 DRIPC組,P0.05)。LTCCs以及RyR2的表達(dá)在兩組間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：SevoPoC和DRIPC可以提供相似的心肌保護(hù)作用,表現(xiàn)在心功能恢復(fù)的增強(qiáng)、冠脈流出液cTnI釋放以及心肌梗死面積的減少。然而,在鈣調(diào)節(jié)蛋白的調(diào)節(jié)方面,SevoPpC降低NCX1活性的效果更加顯著。第二部分： 七氟烷預(yù)處理與七氟烷后處理在心臟保護(hù)中鈣調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)差異以及對再灌注心律失常的影響目的：1.比較L型鈣通道(LTCCs)、蘭尼堿受體2(RyR2)以及鈉鈣交換體1(NCX1)在七氟烷預(yù)處理與七氟烷后處理心臟保護(hù)作用中的異同；2.觀察七氟烷預(yù)處理與七氟烷后處理對離體大鼠心肌再灌注心律失常的影響,并探索其相關(guān)機(jī)制；方法：在血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定30min后,以缺血20 min復(fù)灌60min建立缺血再灌注損傷模型,50只SD大鼠隨機(jī)分入以下5組,每組10只：(1)時(shí)間對照組(Time control, TC0:離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液110min； (2)缺血/再灌注組(Ischemia/reperfusion, I/RI):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min,停止灌注20min,恢復(fù)灌流60min；(3)七氟烷預(yù)處理組(sevoflurane preconditioning, SevoPC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液15min,使用含3%七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注15min,停止灌注20min,恢復(fù)灌流60min；(4)七氟烷后處理組(sevoflurane postconditioning, SevoPoC):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液30min,停止灌注20min,在復(fù)灌即刻使用含3%七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注15min,然后使用氧合的KH液灌注45min；(5)七氟烷聯(lián)合處理組(sevoflurane preconditioning+ sevoflurane postconditioning, PCPo):離體心臟恒流灌注充分氧合的KH液15min,使用含3%七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注15min,停止灌注20min,在復(fù)灌即刻使用含3%七氟烷飽和的KH液持續(xù)灌注15min,然后使用氧合的KH液灌注45min。觀察SevoPC和SevoPoC的效果。各實(shí)驗(yàn)組均持續(xù)監(jiān)測心率(HR),左心室發(fā)展壓(LVDP),最大LVDP上升速率(+dp/dt)及最大LVDP下降速率(-dp/dt)。檢測心肌梗死面積和冠脈流出液肌鈣蛋白I(cTnI)水平并監(jiān)測記錄再灌注心律失常。分別用蛋白印跡法和RT-PCR檢測LTCCs,、RyR2以及NCX1的蛋白和轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果：1.與I/RI組相比,SevoPC組、SevoPoC組、PCPo組的離體心臟在再灌注30min及60min的LVDP、+dp/dt、-dp/dt以及HR均降低(P0.05),LVEDP升高(P0.05)。SevoPC和SevoPoC均能降低由I/RI造成的心肌梗死(17.92% ±2.12%,SevoPC組；17.22% ±2.30%,SevoPoC組；vs 23.83% ±2.07%,I/R組,P0.05)；相對于單獨(dú)運(yùn)用SevoPC和SevoPoC,聯(lián)合二者(PCPo)降低心肌梗死面積的效果更加明顯(P0.001)。與TC組相比,I/RI組再灌注終點(diǎn)時(shí)cTnI水平明顯升高(P0.001)。SevoPC和SevoPoC均能減少cTnI的釋放(P0.001 vs I/RI組)。SevoPC和SevoPoC再灌注終點(diǎn)時(shí)cTnI水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.與I/RI組相比,SevoPC和SevoPoC能夠顯著減少VPB的個(gè)數(shù),縮短VT和VF的發(fā)作時(shí)程,降低VF的發(fā)生率,并且能夠降低再灌注心律失常評分。3.在鈣調(diào)節(jié)蛋白方面,在SevoPC組,RyR2的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平顯著降低；在SevoPoC組,LTCCs, RyR2及NCX1的表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平顯著降低,RyR2及NCX1在翻譯水平的表達(dá)顯著降低。結(jié)論：1. SevoPC及SevoPoC能夠改善MIRI后的心功能,兩者在改善改善MIRI后的心功能方面并無明顯差異。SevoPC和SevoPoC均能降低心肌cTnI的釋放,降低由I/RI造成的心肌梗死,相對于單獨(dú)運(yùn)用SevoPC和SevoPoC,聯(lián)合二者降低心肌梗死面積的效果更加明顯。2. SevoPC及SevoPoC能改善離體大鼠心臟的再灌注心律失常發(fā)生。3. SevoPC及SevoPoC對再灌注心律失常的作用可能與其對LTCCs, RyR2及NCX1的抑制有關(guān)。4.在鈣調(diào)節(jié)蛋白方面,SevoPC在轉(zhuǎn)錄水平可以抑制RyR2的表達(dá),SevoPoC在轉(zhuǎn)錄水平可以抑制LTCCs, RyR2及NCX1的表達(dá),并在翻譯水平抑制RyR2及NCX1的表達(dá)。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614
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本文編號：1603511