發(fā)布時(shí)間：2018-03-07 21:11

  本文選題：非小細(xì)胞肺癌　切入點(diǎn)：乳腺癌　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤,全球每年約180萬(wàn)新發(fā)病例,約150多萬(wàn)人死亡,其中以男性居多。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的80%以上,部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期,5年生存率較低。因此非小細(xì)胞肺癌的早期診斷顯得尤為重要。目前,影像學(xué)檢查是臨床工作中主要的診斷工具,但其費(fèi)用高,輻射較大等因素導(dǎo)致其不適合于大規(guī)模的篩查工作。故而我們急需找到檢查便利、費(fèi)用低而且創(chuàng)傷性小的檢查手段。近年來(lái),non coding RNA在腫瘤學(xué)領(lǐng)域中的重要性得到了廣泛的研究,并且作為NSCLC的分子診斷標(biāo)志物得到了越來(lái)越多的關(guān)注。本研究中,首先通過(guò)文獻(xiàn)篩選出11種與非小細(xì)胞肺癌密切相關(guān)的non coding RNAs,包括niR-21, miR-197, miR-1254, miR-574-5p, miR-125b, miR-155, miR-30d, miR-24, miR-182, miR-485-5p 與 MALAT1,采用qRT-PCR技術(shù),在試驗(yàn)組中對(duì)11種non coding RNAs進(jìn)行篩選,并將5種表達(dá)差異顯著的non codingRNAs在驗(yàn)證組中進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證,構(gòu)建NSCLC診斷模型。并應(yīng)用ROC方法分析其診斷效率,結(jié)果顯示,由此5種non coding RNA組成的NSCLC診斷模型的診斷效率較高,在試驗(yàn)組與驗(yàn)證組中AUC值分別為0.915與0.875。尤其是在Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ期的診斷效率較高。乳腺癌則是嚴(yán)重威脅著女性生命健康的主要疾病。每年新發(fā)乳腺癌病例約167萬(wàn),約52萬(wàn)死亡。Non coding RNA不僅在肺癌中異常表達(dá),也在乳腺癌血清中呈失調(diào)改變。為了找到有利于乳腺癌的診斷的分子標(biāo)志物,我們構(gòu)建了基于4種non coding RNAs的診斷模型。該模型在試驗(yàn)組與驗(yàn)證組中的AUC值分別為0.960與0.968�；诖四Ｐ蛯�(duì)BC的診斷效率、敏感性及特異性均較高,可以作為BC診斷的分子標(biāo)志物�；谇捌诘难芯拷Y(jié)果得知,miR-574-5p在乳腺癌患者血清中異常高表達(dá),并且其診斷效率、敏感性與特異性均較高,在乳腺癌的臨床診斷方面具有重要意義。因此,本節(jié)中進(jìn)一步探討miR-574-5p在乳腺癌患者血清中的診斷價(jià)值及其在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)改變及其對(duì)乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。結(jié)果顯示,miR-574-5p在正常對(duì)照組、纖維腺瘤組及乳腺癌患者組血清中的表達(dá)水平隨病程的進(jìn)展而呈現(xiàn)出逐漸升高趨勢(shì)；miR-574-5p影響乳腺癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力；并且與B-myb與MALAT1的表達(dá)水平存在關(guān)聯(lián)；miR-574-5p靶向調(diào)節(jié)Snai3, Snai3是Snail家族中的一員,參與了腫瘤細(xì)胞的遷移過(guò)程。因此,提示miR-574-5p可能參與調(diào)控了乳腺癌細(xì)胞的遷移過(guò)程。以上結(jié)果提示我們miR-574-5p在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮了重要作用,并為其在乳腺癌的臨床診療及防治領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)。肺癌是由小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)與非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)組成,后者包括除小細(xì)胞肺癌以外的其他上皮癌,如腺癌、鱗癌、腺鱗癌、大細(xì)胞癌等,約占所有肺癌的80%以上。大部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期,5年生存率較低。因此肺癌的早期診斷顯得尤為重要。MicroRNA (miRNA)與長(zhǎng)鏈非編碼RNA MALAT1 (metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1)都是非編碼RNA的組成部分,并且作為NSCLC的分子診斷標(biāo)志物得到了越來(lái)越多的關(guān)注。本研究首次構(gòu)建了基于多種血清miRNA 與 MALAT1的診斷模型,驗(yàn)證其作為NSCLC分子標(biāo)志物的診斷效率。首先設(shè)計(jì)兩階段的病例對(duì)照研究來(lái)建立NSCLC診斷模型,將2002年收集的NSCLC血清樣本與正常對(duì)照血清樣本隨機(jī)分成試驗(yàn)組(36例NSCLC vs 36例正常對(duì)照)與驗(yàn)證組(120例HSCLC vs71正常對(duì)照),并通過(guò)文獻(xiàn)篩選出與NSCLC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNAMALAT1和10種niRNAs,包括miR-21, miR-197, miR-1254, miR-574-5p, miR-125b, miR-155, miR-30d, miR-24, miR-182, miR-485-5p。并應(yīng)用qRT-PCR技術(shù),在試驗(yàn)組中對(duì)11種non coding RNAs進(jìn)行篩選,并將表達(dá)差異顯著的noncoding RNAs在驗(yàn)證組中進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證。通過(guò)危險(xiǎn)分?jǐn)?shù)分析法、ROC曲線、聚類分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)分析建立基于血清non coding RNAs 的 NSCLC診斷模型。結(jié)果顯示,在試驗(yàn)組中,NSCLC與正常對(duì)照組相比,5種non coding RNAs(miR-21, miR-1254, miR-485-5p, miR-574-5p 與 (MALAT1)的表達(dá)水平呈現(xiàn)顯著差異。危險(xiǎn)分?jǐn)?shù)分析結(jié)果表明,基于此5種血清non coding RNAs建立的NSCLC診斷模型可以很好的將NSCLC與正常對(duì)照組區(qū)分。ROC曲線結(jié)果顯示,在試驗(yàn)組與驗(yàn)證組中AUC分別為0.915(95%可信區(qū)間(CI)0.853-0.978)和0.875(95% CI0.819-0.930)�；诖�5種血清non coding RNAs建立的NSCLC診斷模型與NSCLC的臨床分期相關(guān),其在Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ期的診斷效率較高。結(jié)論,本研究首次構(gòu)建了基于多種血清niRNA與長(zhǎng)鏈非編碼RNA MALAT1的非小細(xì)胞肺癌的聯(lián)合診斷模型,并且此模型對(duì)NSCLC的診斷效率、敏感性及特異性均較高,可以作為NSCLC的分子診斷標(biāo)志物。乳腺癌(breast cancer, BC)是嚴(yán)重威脅女性生命與健康安全的主要疾病,其發(fā)病率呈每年升高趨勢(shì),而且日趨年輕化。乳腺癌患者的預(yù)后與腫瘤的臨床分期密切相關(guān),因此,乳腺癌的早期診斷與早期治療至關(guān)重要。目前,臨床上常用X線檢查,超聲檢查,核磁共振及核醫(yī)學(xué)檢查來(lái)診斷早期乳腺癌。但是影像學(xué)檢查費(fèi)用高,輻射量較大,并不適用于乳腺癌的早期篩查工作。我們需要診斷效率、敏感性與特異性更高的檢查手段,以避免不必要的影響學(xué)檢查。血液non coding RNA分析就是一種創(chuàng)傷小而且花費(fèi)小的篩查工具,有利于對(duì)大規(guī)模高風(fēng)險(xiǎn)人群進(jìn)行篩查。本研究首次構(gòu)建了基于多種血清miRNAs 與 MALAT1的診斷模型,驗(yàn)證其作為乳腺癌標(biāo)志物的診斷效率。首先設(shè)計(jì)兩階段的病例對(duì)照研究來(lái)建立BC診斷模型,將2013-2014年收集的乳腺癌血清樣本與正常對(duì)照血清樣本隨機(jī)分成試驗(yàn)組(30例BC vs 30例正常對(duì)照)與驗(yàn)證組(128例BC vs 77正常對(duì)照),并通過(guò)文獻(xiàn)篩選出與BC發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA MALAT1和10中 miRNAs,包括miR-21,let-7a, miR-574-5p, miR-155, miRNA-10b, miRNA-181b, miRNA-1254, miRNA-196a, miRNA-205, miRNA-195。并應(yīng)用qRT-PCR技術(shù),在試驗(yàn)組中對(duì)11種non coding RNAs進(jìn)行篩選,并將表達(dá)差異顯著的non coding RNAs在驗(yàn)證組中進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證。通過(guò)危險(xiǎn)分?jǐn)?shù)分析法、ROC曲線、聚類分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)分析建立基于血清noncoding RNAs的BC診斷模型。結(jié)果顯示,在試驗(yàn)組中,BC與正常對(duì)照組相比,4種non coding RNAs (let7a, miR-155, miR-574-5p 與 MALAT1)的表達(dá)水平呈現(xiàn)顯著差異。危險(xiǎn)分?jǐn)?shù)分析結(jié)果表明,基于此4種血清non coding RNAs建立的BC診斷模型可以很好的將BC與正常對(duì)照組區(qū)分。ROC曲線結(jié)果顯示,在試驗(yàn)組與驗(yàn)證組中AUC分別為0.960(95%可信區(qū)間(CI)：0.864-1.000)和0.968(95% CI0.903-0.985)。并且此4種non codingRNA在正常對(duì)照組、纖維腺瘤組與乳腺癌組間均存在差異性表達(dá),聯(lián)合let-7a、miR-155及miR-574-5p3種non coding RNA可以將纖維腺瘤與正常對(duì)照組區(qū)分開AUC值為0.987；而聯(lián)合niR-155、miR-574-5p與MALAT1可以區(qū)分開乳腺癌與纖維腺瘤,AUC值為0.959。而且此4種non coding RNA在乳腺癌術(shù)前與術(shù)后1周的血清中,其表達(dá)水平也發(fā)生的明顯改變。并且,對(duì)化療前后的乳腺癌患者血清的研究發(fā)現(xiàn),miR-155對(duì)化療藥長(zhǎng)春瑞濱的敏感性更好。結(jié)論,本研究首次構(gòu)建了基于多種血清miRNA與長(zhǎng)鏈非編碼RNA MALAT1的乳腺癌的聯(lián)合診斷模型,危險(xiǎn)分?jǐn)?shù)功能分析表明基于此模型對(duì)BC的診斷效率、敏感性及特異性均較高,可以作為BC診斷的分子標(biāo)志物。乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤,發(fā)病率與死亡率均居各種惡性腫瘤前列,且呈逐年上升趨勢(shì),嚴(yán)重威脅著女性的生命健康安全。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是涉及多因素的復(fù)雜過(guò)程,深入研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制,找到有助于臨床診斷與治療的靶基因,將會(huì)大大改進(jìn)乳腺癌防治工作并且對(duì)乳腺癌的早期診斷與預(yù)防具有重要的臨床意義。miRNA是近年來(lái)研究最為廣泛的非編碼單鏈小RNA,大量研究指出,miRNAs在多種腫瘤中都存在表達(dá)失調(diào)現(xiàn)象。基于第二部分的研究結(jié)果,可以看到miR-574-5p在乳腺癌患者血清中異常高表達(dá),并且其診斷效率、敏感性與特異性均較高,在乳腺癌的臨床診斷方面具有重要意義。因此,本節(jié)中,將進(jìn)一步探討miR-574-5p在乳腺癌患者血清中的診斷價(jià)值及其在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)改變及其對(duì)乳腺癌發(fā)生發(fā)展的影響,期待為乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移等機(jī)制研究提供新的視角,為miR-574-5p在乳腺癌的臨床診療及防治領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法：1、采用q RT-PCR技術(shù)分析1niR-574-5p在正常對(duì)照組、纖維腺瘤組及乳腺癌患者組血清中的表達(dá)水平及其臨床分期等因素的相關(guān)性。2、利用transwell方法分析miR-574-5p對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移的影響；并采用qRT-PCR技術(shù)分析miR-574-5p表達(dá)量的改變對(duì)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的影響。3、通過(guò)生物信息學(xué)在線預(yù)測(cè)軟件分析miR-574-5p的靶基因；檢測(cè)乳腺癌患者血清中niR-574-5p表達(dá)水平的與其預(yù)測(cè)靶基因Snai3基因表達(dá)的相關(guān)關(guān)系。結(jié)果：1、miR-574-5p在正常對(duì)照組、纖維腺瘤組及乳腺癌患者組血清中的定量分析結(jié)果顯示,miR-574-5p在三組間的表達(dá)水平隨病程的進(jìn)展而呈現(xiàn)出逐漸升高趨勢(shì),并且三組間的差異性表達(dá)存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、轉(zhuǎn)染miR574-5p mimic的MCF-7細(xì)胞,其遷移能力降低了2倍；而轉(zhuǎn)染miR574-5p inhibitor后,細(xì)胞的遷移能力升高了1.94倍；并且組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著；在轉(zhuǎn)染niR-574-5p mimic組中,Snail、E-cadherin、Snai3及MALAT1的表達(dá)量與對(duì)照組相比未見明顯差異,p0.05,而B-myb的表達(dá)量顯著下調(diào),p=0.005。而轉(zhuǎn)染miR-574-5p inhibitor組,Snail與MALAT1的表達(dá)量顯著升高。3、生物信息學(xué)預(yù)測(cè)1niR574-5p的靶基因?yàn)镾nai3;在乳腺癌患者血清中,miR-574-5p與Snai3基因間的表達(dá)水平存在負(fù)相關(guān)。結(jié)論：1、miR-574-5p可能在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用,并且可能會(huì)在乳腺癌的臨床診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景。2、體外的遷移實(shí)驗(yàn)表明,miR-574-5p影響乳腺癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力；并且與B-myb與MALAT1的表達(dá)水平存在關(guān)聯(lián)。3、miR-574-5p可能靶向調(diào)節(jié)Snai3,Snai3是Snail家族中的一員,參與了腫瘤細(xì)胞的遷移過(guò)程。因此,提示miR-574-5p可能參與調(diào)控了乳腺癌細(xì)胞的遷移過(guò)程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2;R737.9

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本文編號(hào)：1580967