本文選題：腺病毒　切入點(diǎn)：β-神經(jīng)生長因子　出處：《山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2017年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的評(píng)價(jià)接枝Nogo-66受體(NgR)抗體和多聚左旋賴氨酸(PLL)的透明質(zhì)酸(HA)水凝膠支架的作用,及轉(zhuǎn)染β神經(jīng)生長因子(β-NGF)基因的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)能否在支架內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)外源基因。方法采用冰凍干燥法制備多孔HA水凝膠材料,將NgR抗體和PLL接枝到HA支架上。體外培養(yǎng)EPCs,并通過攜帶β-NGF腺病毒轉(zhuǎn)染EPCs,將EPCs與支架共培養(yǎng),通過掃描電鏡觀察支架結(jié)構(gòu),將細(xì)胞按處理方式及培養(yǎng)方式分為β-NGF+組、Scaffold-β-NGF+組、β-NGF-組、Scaffold-β-NGF-組、對(duì)照組和Scaffold-對(duì)照組。采用細(xì)胞活力(CCK-8)法及HE法檢測(cè)EPCs在支架上的生長情況,采用乳酸脫氫酶(LDH)-細(xì)胞毒性法檢測(cè)支架的細(xì)胞毒性,采用ELISA法、Rt-PCR法和Western blotting法檢測(cè)β-NGF的表達(dá)。結(jié)果制備的支架具備三維多孔結(jié)構(gòu),孔徑(200±15)μm,大小較均一,EPCs在支架上的生長明顯優(yōu)于培養(yǎng)板中的生長狀況(F=468 518.044,P0.001),且隨時(shí)間推移,細(xì)胞數(shù)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2 678 658.138,P0.001),支架的細(xì)胞毒性相比培養(yǎng)板無明顯異常(F=0.680,P=0.429)。EPCs在支架上可以穩(wěn)定表達(dá)β-NGF,且Scaffold-β-NGF+組mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)量均優(yōu)于β-NGF+組(mRNA:F=651.554,P0.001;蛋白:F=14 671.733,P0.001)。結(jié)論 EPCs與NgR抗體-PLL復(fù)合A水凝膠支架具有良好的生物相容性。該HA水凝膠支架有望作為修復(fù)脊髓損傷的組織工程載體。
[Abstract]:Objective to evaluate the effect of graft Nogo-66 receptor (Nogo-66 receptor) antibody and poly (L-lysine) (PLL) hydrogel scaffold on hyaluronic acid (HA). Whether the endothelial progenitor cells transfected with 尾 -NGF gene could stably express foreign genes in the scaffold. Methods porous HA hydrogel materials were prepared by freeze drying method. NgR antibody and PLL were grafted onto HA scaffold. EPCs were transfected with 尾 -NGF adenovirus and co-cultured with EPCs. The stents were observed by scanning electron microscope. The cells were divided into 尾 -NGF group (Scaffold- 尾 -NGF group), 尾 -NGF- group (Scaffold- 尾 -NGF- group) and 尾 -NGF group (Scaffold- 尾 -NGF- group). In control group and Scaffold- control group, cell viability CCK-8 and HE methods were used to detect the growth of EPCs on the scaffold, and the cytotoxicity of the stents was detected by lactate dehydrogenase (LDH) -cytotoxicity assay. The expression of 尾 -NGF was detected by ELISA Rt-PCR and Western blotting. Results the scaffolds had a three-dimensional porous structure with a pore diameter of 200 鹵15 渭 m. The growth of EPCs on the scaffold was obviously better than that in the culture plate. There was significant difference in the number of cells. Compared with the culture plate, the cytotoxicity of the scaffold was not abnormal. MRNA and protein expression in Scaffold- 尾 -NGF group were significantly higher than those in 尾 -NGF group. Conclusion the expression of 尾 -NGF in Scaffold- 尾 -NGF group is higher than that in 尾 -NGF group. Conclusion the expression of 尾 -NGF in Scaffold- 尾 -NGF group is higher than that in 尾 -NGF group. Conclusion the expression of mRNA and protein in Scaffold- 尾 -NGF group is higher than that in 尾 -NGF group. Conclusion the expression of 尾 -NGF in Scaffold- 尾 -NGF group is higher than that in 尾 -NGF group. The HA hydrogel scaffold has good biocompatibility with NgR antibody PLL composite A hydrogel scaffold which is expected to be used as tissue engineering carrier for spinal cord injury repair.
【作者單位】： 山東大學(xué)第二醫(yī)院脊柱外科;臨邑縣人民醫(yī)院骨科;
【基金】：山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2014GSF118045)
【分類號(hào)】：R651.2

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