本文選題：SD大鼠充質(zhì)干細(xì)胞　切入點(diǎn)：骨髓微囊泡　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:1.學(xué)會(huì)體外培養(yǎng)SD大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),研究并完善骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞源性微囊泡(bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicles,BMSCs-MVs)的分離、提取以及鑒定的方法;2.研究BMSCs-MVs對(duì)軟骨細(xì)胞的調(diào)控作用,探討它在NF-k B途徑信號(hào)通路中的調(diào)控機(jī)制;方法:1.于體外培養(yǎng)并適時(shí)傳代SD大鼠的BMSCs;2.從體外培養(yǎng)的SD大鼠的BMSCs中通過(guò)超速離心提取并擴(kuò)增BMSCs-MVs,進(jìn)行相應(yīng)的細(xì)胞學(xué)和形態(tài)學(xué)鑒定;3.于體外培養(yǎng)并傳代SD大鼠的軟骨細(xì)胞,并進(jìn)行相應(yīng)的細(xì)胞學(xué)和形態(tài)學(xué)鑒定,為之后實(shí)驗(yàn)提供部分來(lái)源;4.分組將BMSCs-MVs與SD大鼠軟骨細(xì)胞共培養(yǎng),經(jīng)適時(shí)傳代后,提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)相關(guān)因子,利用SPSS 16.0軟件進(jìn)行結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。進(jìn)而探究BMSCs-MVs對(duì)軟骨細(xì)胞在增殖和凋亡方面的影響,以及BMSCs-MVs作用于軟骨細(xì)胞信號(hào)通路NF-k B轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制;結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS16.0軟件進(jìn)行處理與分析,結(jié)果采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)來(lái)表示,不同實(shí)驗(yàn)處理目標(biāo)基因的相對(duì)表達(dá)值分別采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)進(jìn)行分析,軟件處理后的結(jié)果(p0.05),意義為此次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.各實(shí)驗(yàn)組和空白組進(jìn)行比較,促凋亡的p53基因的表達(dá)量減少(p0.05);實(shí)驗(yàn)組內(nèi)進(jìn)行比較,BMSCs-MVs+抑制劑EVP4593組與BMSCs-MVs組相比p53基因的表達(dá)量減少(p0.05);BMSCs-MVs+抑制劑EVP4593組與抑制劑EVP4593組相比p53基因的表達(dá)量減少(p0.05);同實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)(4h與24h)相互比較,基因p53表達(dá)量無(wú)顯著差異(p0.05);2.MVs組與空白組對(duì)比,抑制凋亡基因Bcl-2的表達(dá)量均顯著增加(p0.05);抑制劑EVP4593組及BMSCs-MVs+抑制劑EVP4593組分別與空白對(duì)照組相比,抑制凋亡基因Bcl-2的表達(dá)量均顯著減少(p0.05);BMSCs-MVs+抑制劑EVP4593組與MVs組相比Bcl-2基因表達(dá)量顯著減少(p0.05);BMSCs-MVs+抑制劑EVP4593組與抑制劑EVP4593組相比Bcl-2基因表達(dá)量顯著減少,(p0.05);相同實(shí)驗(yàn)組的不同時(shí)間點(diǎn)(4h與24h)相互比較Bcl-2基因表達(dá)量無(wú)顯著差異(p0.05);結(jié)論:1.BMSCs-MVs具有減少軟骨細(xì)胞中促凋亡因子p53表達(dá)和增加抑凋亡因子Bcl-2表達(dá)的作用;2.BMSCs-MVs對(duì)軟骨細(xì)胞的作用是多種通路實(shí)現(xiàn)的,NF-kb通路在此過(guò)程中的權(quán)重尚不明確。
[Abstract]:Objective to learn to culture bone marrow mesenchymal stem cells from SD rats in vitro, and to study and perfect the isolation of bone marrow mesenchymal stem cells-derived microvesicles BMSCs-MVsof bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). To study the regulatory effect of BMSCs-MVs on chondrocytes and explore its regulatory mechanism in NF-k B pathway. Methods 1. BMSCs-MVs2. BMSCs-MVs2. BMSCs-MVs2 was isolated from SD rats by ultracentrifugation and amplified by ultracentrifugation, and the corresponding cytological and morphological identification was performed. The chondrocytes of SD rats were cultured and subcultured in vitro. The corresponding cytological and morphological identification were carried out to provide a partial source for the later experiment. BMSCs-MVs and SD rat chondrocytes were co-cultured in groups. After timely passage, total RNAs were extracted, and the related factors were detected by RT-PCR after reverse transcription. The effects of BMSCs-MVs on the proliferation and apoptosis of chondrocytes and the mechanism of BMSCs-MVs acting on NF-k B transduction in chondrocyte signaling pathway were analyzed by SPSS 16.0 software. Results: the results of this experiment were processed and analyzed by SPSS16.0 software. The results were expressed by (mean 鹵standard deviation). The relative expression values of target genes in different experiments were analyzed by t-test of independent samples. The result of the software processing was p0.05, meaning that the difference of the experimental data was statistically significant. 1. The experimental group and the blank group were compared. The expression of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in BMSCs-MVs group, and the expression of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in EVP4593 group, compared with that in BMSCs-MVs group; the expression of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in EVP4593 group, and the expression level of p53 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was lower than that in EVP4593 group. At different time points (4 h and 24 h), There was no significant difference in the expression of p53 gene between MVs group and control group. The expression of inhibiting apoptosis gene Bcl-2 in EVP4593 group and BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group were significantly higher than that in control group. The expression of Bcl-2 gene in BMSCs-MVs inhibitor EVP4593 group was significantly lower than that in MVs group, and the expression of Bcl-2 gene in EVP4593 group was significantly lower than that in EVP4593 group, and the same experimental group was different. Conclusion: 1. BMSCs-MVs can reduce the expression of apoptosis-promoting factor p53 and increase the expression of anti-apoptotic factor Bcl-2 in chondrocytes. 2. The effects of BMSCs-MVs on chondrocytes are multiple pathways. The weight of the implemented NF-kb path in this process is unclear.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R684

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9 張e，

本文編號(hào)：1557060