本文關(guān)鍵詞： 單純性顱腦創(chuàng)傷 凝血因子VII 甲基化 表觀遺傳學(xué) 進(jìn)展性出血性損傷　出處：《蘇州大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本課題分三部分,第一部分從臨床角度闡述單純性顱腦創(chuàng)傷(traumatic brain injury,TBI)患者血漿凝血因子VII活性(coagulation factor VII activity,CFVIIa)水平與顱內(nèi)進(jìn)展性出血性損傷(progressive hemorrhagic injury,PHI)的相關(guān)性;第二和第三部分分別從細(xì)胞和臨床角度研究凝血因子VII(coagulation factor VII,CFVII)啟動子區(qū)甲基化對CFVII基因表達(dá)調(diào)控作用及與PHI的相關(guān)性。各部分研究摘要如下:第一部分單純性顱腦創(chuàng)傷患者血漿凝血因子VII活性水平與顱內(nèi)進(jìn)展性出血性損傷的相關(guān)性目的:研究單純性TBI患者血漿CFVIIa水平與PHI的相關(guān)性。方法:根據(jù)研究納入和排除標(biāo)準(zhǔn)選取2010年8月至2014年6月在上海華山醫(yī)院神經(jīng)創(chuàng)傷中心急診入院的年齡≥17歲的中重度單純性TBI患者112例,采集患者入院時外周靜脈血標(biāo)本并送檢國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(international normalized ratio,INR)、活化部分凝血活酶時間(activeated partial thromboplasting time,APTT)、血小板(platelet,PLT)、D-二聚體、纖維蛋白原(fibrinogen,FIB)及CFVIIa。每24 h隨訪患者頭顱CT一次,當(dāng)再次CT掃描較首次CT掃描顯示的出血性病灶擴(kuò)大或有新出現(xiàn)的出血性病灶時被診斷為PHI。結(jié)果:PHI組患者血漿CFVIIa及PLT水平均顯著低于非PHI組(77.79%±22.82%VS 100.32%±30.39%;126.95±48.46 VS 148.13±53.41;P0.05);PHI組患者血漿APTT、INR、D-二聚體、FIB均高于非PHI組,但兩組之間差異不明顯(P0.05)。Logistic回歸分析,結(jié)果顯示血漿CFVIIa低下(OR=1.06,95%CI=1.03~1.10,P0.001)及PLT水平降低(OR=1.01,95%CI=1.00~1.02,P=0.009)是單純性TBI患者發(fā)生PHI的獨(dú)立危險因素。結(jié)論:單純性TBI后PHI患者血漿CFVIIa及PLT水平均顯著低于非PHI患者,血漿CFVIIa低下及PLT水平降低是單純性TBI患者發(fā)生PHI的獨(dú)立危險因素。第二部分凝血因子VII啟動子區(qū)甲基化調(diào)控凝血因子VII表達(dá)目的:研究CFVII基因啟動子區(qū)甲基化對CFVII表達(dá)調(diào)控作用。方法:基因合成CFVII啟動子區(qū)-781--1bp及-1000--1 bp兩條片段,并將上述片段亞克隆至PGL3-basic載體,獲得重組質(zhì)粒PGL3-F7UM-781--1、PGL3-F7UM-1000--1。酶切、測序驗(yàn)證無誤后,用甲基化轉(zhuǎn)移酶(M.Sss I,NEB)對重組質(zhì)粒、PGL3-Basic、PGL3-Control質(zhì)粒進(jìn)行全甲基化修飾得到甲基化質(zhì)粒。本實(shí)驗(yàn)共分9組,分別為無轉(zhuǎn)染對照、PGL3-Basic(UM)、PGL3-Basic(M)、PGL3-Control(UM)、PGL3-Control(M)、PGL3-F7UM-781--1、PGL3-F7M-781--1、PGL3-F7UM-1000--1、PGL3-F7M-1000--1。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑分別將以上質(zhì)粒及對照質(zhì)粒PRL-TK轉(zhuǎn)染入人肝癌細(xì)胞(Hep G2),檢測熒光素酶活性。結(jié)果:各組甲基化質(zhì)粒較未甲基化質(zhì)粒熒光素酶表達(dá)水平均顯著降低(P0.001)。其中PGL3-F7M-781--1組熒光素酶表達(dá)較PGL3-F7UM-781--1組下降了約110倍(P0.001);而PGL3-F7M-1000--1組較PGL3-F7UM-1000--1組熒光素酶表達(dá)下降約244倍(P0.001)。兩組非甲基化重組質(zhì)粒熒光素酶表達(dá)水平無明顯差異(P=0.28);而兩組甲基化重組質(zhì)粒熒光素酶表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。結(jié)論:CFVII啟動子區(qū)甲基化影響CFVII基因表達(dá),啟動子區(qū)高甲基化將導(dǎo)致CFVII基因表達(dá)降低。位于啟動子區(qū)-781 bp至-1000 bp之間的Cp G甲基化對CFVII基因表達(dá)影響更顯著。第三部分單純性顱腦創(chuàng)傷患者血漿凝血因子VII啟動子區(qū)甲基化與凝血因子VII活性水平及顱內(nèi)進(jìn)展性出血性損傷相關(guān)性研究目的:研究單純性TBI患者血漿CFVII啟動子區(qū)甲基化水平與血漿CFVIIa水平之間關(guān)系,并探討CFVII啟動子區(qū)甲基化與PHI的相關(guān)性。方法:選取符合條件的中重度單純性TBI患者79例,采集患者入院時外周靜脈血,并送檢CFVIIa、PLT、APTT、INR、FIB、D-二聚體。提取患者血液基因組DNA,并對其進(jìn)行亞硫酸氫鹽處理,設(shè)計(jì)合成引物,PCR擴(kuò)增目的基因片段,采用Sequenom質(zhì)譜法檢測患者CFVII啟動子區(qū)甲基化水平。本實(shí)驗(yàn)共采用兩種分組方法:CFVIIa≥90%組與CFVIIa90%組,PHI組與非PHI組。PHI定義與前述相同。結(jié)果:采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)對所研究的FVII啟動子區(qū)Cp G位點(diǎn)進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn):CFVIIa≥90%組與CFVIIa90%組患者Cp G3位點(diǎn)甲基化率有顯著性差異(0.83±0.05VS 0.85±0.03,P0.05),CFVIIa≥90%組患者Cp G3位點(diǎn)甲基化率小于CFVIIa90%組;而兩組患者Cp G2、Cp G4、Cp G5、Cp G6等位點(diǎn)甲基化率無顯著性差異(P0.05);PHI組與非PHI組患者以上各Cp G位點(diǎn)甲基化率均無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:單純性TBI患者CFVII基因啟動子區(qū)甲基化與患者血漿CFVIIa水平相關(guān),甲基化率高,患者血漿CFVIIa水平低;而CFVII啟動子區(qū)甲基化率與患者是否發(fā)生PHI無關(guān)。
[Abstract]:The relationship between plasma coagulation factor VII activity ( CFVlla ) level in patients with severe brain injury ( CFVII ) and intracranial progressive hemorrhagic injury was discussed in the first part . The correlation between plasma coagulation factor VII activity level and prognosis of patients with intracranial progressive hemorrhagic injury was studied in the first part . Results : The plasma levels of plasma levels of plasma coagulation factor VII ( CFVlla ) and the degree of blood coagulation ( CFVlla ) were significantly lower in PHI group than in non - PHI group ( 77.79 % 鹵 22.82 % VS 100.32 % 鹵 30.39 % ; 126.95 鹵 48.46 vs 148.13 鹵 53.41 ; P0.05 ) . The results showed that the levels of plasma CFVlla and PLT were significantly lower than those in non - PHI patients ( P0.01 , 95 % CI = 1.00 锝，

本文編號：1546007