發(fā)布時(shí)間：2018-02-24 06:48

  本文關(guān)鍵詞： 豬 大鼠 人 真皮 材料表征 順應(yīng)性　出處：《山東大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景：臨床實(shí)踐中常用脫細(xì)胞真皮基質(zhì)作為真皮的替代物用于皮膚缺損的重建和修復(fù)。異體來(lái)源的人脫細(xì)胞真皮基質(zhì)是真皮缺損患者真皮修復(fù)與再生的“金標(biāo)準(zhǔn)”,但由于異體皮膚來(lái)源有限,并且成品價(jià)格較高,限制了其在臨床實(shí)踐中的廣泛應(yīng)用。故制備動(dòng)物來(lái)源的異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)為解決該問(wèn)題的關(guān)鍵。近些年針對(duì)豬及大鼠脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的研究一直為研究熱點(diǎn),但兩者材料學(xué)性能和效果的差異報(bào)道較少。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)豬邊腹部網(wǎng)織層真皮質(zhì)地柔軟,脫細(xì)胞處理后與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng),細(xì)胞浸潤(rùn)良好。故本研究擬在前期研究基礎(chǔ)之上將豬邊腹部及大鼠背部網(wǎng)織層與人網(wǎng)織層真皮進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)、材料學(xué)表征比較,為異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備提供材料學(xué)及方法學(xué)選擇依據(jù)。研究目的：針對(duì)脫細(xì)胞真皮種屬來(lái)源的選擇,采用實(shí)驗(yàn)室前期研究的邊腹部豬真皮,結(jié)合組織形態(tài)學(xué)、生物力學(xué)、傅里葉紅外光譜掃描、熱分析等手段,從形態(tài)學(xué)和物理學(xué)角度,進(jìn)一步闡明豬及大鼠真皮作為異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)材料與人真皮的差異。為異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)種屬選擇提供材料學(xué)及方法學(xué)依據(jù)。研究方法：1實(shí)驗(yàn)標(biāo)本來(lái)源：成年男性全層皮膚標(biāo)本3例。4-5月齡健康雄性白色家豬6頭；9周齡清潔級(jí)雄性Wistar大鼠6只。2樣品的制備：家豬及大鼠去毛后,各分別切取邊腹部、背部全層皮膚標(biāo)本。人全層皮膚標(biāo)本3例為自愿捐獻(xiàn)。3組皮膚標(biāo)本均用鼓式取皮機(jī)制取網(wǎng)織層真皮。用于組織學(xué)染色的標(biāo)本用多聚甲醛固定后,按常規(guī)制作組織蠟塊,組織切片機(jī)切片。用于生物力學(xué)測(cè)試、傅里葉紅外光譜掃描、熱分析的標(biāo)本進(jìn)行真空冷凍干燥處理。3實(shí)驗(yàn)步驟及觀測(cè)指標(biāo)：(1)大體觀察：通過(guò)肉眼觀察及觸摸比較3組樣本的質(zhì)地。(2)生物力學(xué)測(cè)試：將真空冷凍干燥后的樣品裁成80 mm×5 mm規(guī)格的力學(xué)檢測(cè)試件,復(fù)水后,進(jìn)行單軸拉伸實(shí)驗(yàn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)計(jì)算及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。(3)蘇木素-伊紅染色：將石蠟切片按常規(guī)進(jìn)行蘇木素-伊紅染色,顯微照相后,用圖像分析軟件進(jìn)行如下測(cè)量：①測(cè)量膠原纖維束直徑。②測(cè)量白色空白區(qū)域面積占整個(gè)圖片面積的百分比。(4)苦味酸-天狼星紅染色：組織切片經(jīng)天狼星紅染色后,用偏振光顯微鏡照相,并用圖像分析軟件分析I、III型膠原纖維含量及其比值。(5)傅里葉紅外光譜掃描：樣品真空冷凍干燥后,壓片法制樣,用傅里葉紅外光譜儀進(jìn)行傅里葉紅光譜掃描。(6)熱分析：樣品真空冷凍干燥后,用同步熱分析儀進(jìn)行熱重分析和差示掃描量熱分析,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果用作圖軟件Origin 8.0做導(dǎo)數(shù)熱重曲線(xiàn)。研究結(jié)果：1大體觀察： 豬邊腹部真皮毛孔密集、粗大,質(zhì)地較人和大鼠稍僵硬,伸展性稍差。大鼠真皮質(zhì)地細(xì)膩、柔軟,毛孔細(xì)小。人真皮質(zhì)地居中,毛孔稀疏,伸展性較大。2生物力學(xué)測(cè)試： 3組樣品復(fù)水效果良好。豬真皮組(P=0.44)、大鼠真皮組(P=0.36),與人真皮組比較,楊氏模量差異無(wú)顯著性意義。3蘇木素-伊紅染色：(1)光鏡下觀察：豬網(wǎng)織層真皮膠原纖維束粗大,排列緊密；大鼠網(wǎng)織層真皮膠原纖維束較纖細(xì),排列疏松。與豬真皮組相比,大鼠真皮組織形態(tài)與人更為接近。(2)測(cè)量結(jié)果：豬真皮膠原纖維束直徑與人比較差異無(wú)顯著性意義(P=0.34)；大鼠真皮膠原纖維束比人真皮膠原纖維束略細(xì)(P0.05)。間隙率測(cè)量結(jié)果顯示,豬真皮較人排列緊密(P0.01)；大鼠與人近似(P=0.17)。4苦味酸-天狼星紅染色： 豬真皮Ⅲ型膠原含量較少,Ⅰ、Ⅲ型膠原之比大于人真皮(P0.05),而大鼠真皮與人真皮比較差異無(wú)顯著性意義(P=0.72)。5熱分析： 在熱重曲線(xiàn)和導(dǎo)數(shù)熱重曲線(xiàn)38-200℃范圍內(nèi),人真皮的失重速率最快(11.58±0.80),豬其次(11.33±2.02),大鼠最慢(10.07±2.83)。差示掃描量熱曲線(xiàn)顯示豬真皮與人真皮相似,大鼠真皮與人真皮差異較大。6傅里葉紅外光譜掃描： 酰胺帶寬度(例如酰胺Ⅰ帶和酰胺Ⅱ帶)比較,豬寬于人,大鼠與人近似。酰胺A峰強(qiáng)度比較,豬、大鼠均強(qiáng)于人,尤以大鼠為甚。結(jié)論：豬邊腹部網(wǎng)織層真皮膠原纖維束直徑及熱分析結(jié)果與人接近,取皮面積較大,在單塊較大面積脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制作方面具有較好的應(yīng)用前景；大鼠背部網(wǎng)織層真皮膠原纖維束排列與人類(lèi)似,Ⅰ、Ⅲ型膠原含量及其比值也接近于人,熱穩(wěn)定性較好,在較小面積的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)制作時(shí)其臨床效果可能優(yōu)于豬邊腹部網(wǎng)織層真皮。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R622

【參考文獻(xiàn)】

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1 謝孟峽,劉媛;紅外光譜酰胺Ⅲ帶用于蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定研究[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào);2003年02期

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本文編號(hào)：1529286