本文關(guān)鍵詞： 椎間盤退變 細(xì)胞凋亡 牽引　出處：《解放軍醫(yī)學(xué)雜志》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討自體垂直懸吊牽引與靶向調(diào)控caspase 3對兔退變椎間盤細(xì)胞凋亡的影響。方法體外實(shí)驗(yàn):分離培養(yǎng)兔椎間盤髓核細(xì)胞,進(jìn)行caspase3 siRNA和陰性對照siRNA轉(zhuǎn)染,分別置于血清饑餓培養(yǎng)基中培養(yǎng)6h和48h,設(shè)正常細(xì)胞和血清饑餓細(xì)胞對照,應(yīng)用RT-q PCR法和流式細(xì)胞術(shù)Annexin V法分析caspase3 mRNA表達(dá)和細(xì)胞凋亡情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將35只新西蘭大白兔隨機(jī)分為模型組(n=10)、陰性siRNA對照組(n=10)、caspase3 siRNA組(n=10)和caspase3siRNA牽引組(n=5),采用16G針刺損傷腰椎椎體右前側(cè)纖維環(huán)制備椎間盤退變模型;后3組按照造模入路用26G針頭從造模對側(cè)分別注入陰性對照siRNA或caspase3 siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合體至兔髓核中心,模型組不予處理。48h后前3組每組隨機(jī)選取5只實(shí)驗(yàn)兔,處死取髓核組織,提取總RNA,采用RT-q PCR和Western blotting分析退變椎間盤內(nèi)caspase3 mRNA和蛋白表達(dá)情況;同時(shí)caspase3 siRNA牽引組再行自體垂直懸吊牽引,30min/d,連續(xù)2周后處死獲取髓核組織,采用ELISA檢測髓核內(nèi)TNF-α和IL-1β表達(dá)情況,HE染色觀察組織形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果 Caspase 3 siRNA轉(zhuǎn)染后兔髓核細(xì)胞caspase3 mRNA表達(dá)水平明顯降低,在饑餓培養(yǎng)條件下細(xì)胞凋亡明顯減少(P0.05)。椎間盤退變模型兔在纖維環(huán)穿刺注入caspase3 siRNA后,椎間盤髓核內(nèi)caspase3 mRNA和蛋白表達(dá)明顯下調(diào);2周后caspase3 siRNA牽引組TNF-α和IL-1β表達(dá)與模型組和陰性siRNA對照組比較顯著減少(P0.05),但與caspase3 siRNA組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HE染色顯示caspase3 siRNA牽引組椎間盤內(nèi)活細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)明顯增多,膠原纖維排列整齊。結(jié)論自體垂直懸吊牽引和靶向調(diào)控caspase3能有效阻止細(xì)胞凋亡的發(fā)生,延緩早期椎間盤退變。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of autologous vertical suspension traction and targeted regulation of caspase _ 3 on apoptosis of rabbit degenerative disc cells. Caspase3 siRNA and negative control siRNA were transfected and cultured in serum starvation medium for 6 h and 48 h, respectively. Normal cells and serum hungry cells were used as control. The expression and apoptosis of caspase3 mRNA were analyzed by RT-q PCR assay and flow cytometry Annexin V method. 35 New Zealand white rabbits were randomly divided into model group (. 10). The control group with negative siRNA, caspase3 siRNA group (10%) and the caspase3siRNA traction group (5%). The model of disc degeneration was established by 16G acupuncture on the right anterior fibrous ring of lumbar vertebrae. In the latter three groups, negative control siRNA or caspase3 siRNA were injected into the nucleus pulposus center of rabbits with 26G needle from the contralateral side of the model respectively. After the model group was not treated for 48 hours, 5 rabbits in each group were randomly selected, and the tissues of nucleus pulposus were killed and the total RNA was extracted. The expression of caspase3 mRNA and protein in degenerative disc was analyzed by RT-q PCR and Western blotting. At the same time, the caspase3 siRNA traction group was treated with autologous vertical suspension traction for 30 min / d, and then killed for 2 weeks to obtain the nucleus pulposus tissue. The expression of TNF- 偽 and IL-1 尾 in nucleus pulposus was detected by ELISA. Results the expression of caspase3 mRNA in rabbit nucleus pulposus cells was significantly decreased after transfection of Caspase 3 siRNA. Apoptosis was significantly decreased in starved cultured rabbits after caspase3 siRNA was injected into the disc degeneration model. The expression of caspase3 mRNA and protein in nucleus pulposus of intervertebral disc was down-regulated. After 2 weeks, the expression of TNF- 偽 and IL-1 尾 in caspase3 siRNA traction group was significantly lower than that in model group and negative siRNA control group (P 0.05). But there was no significant difference between caspase3 siRNA group and caspase3 siRNA group (P0.05). HE staining showed that the number of living cells and extracellular matrix in intervertebral disc in caspase3 siRNA traction group was significantly increased. Conclusion Autologous vertical suspension traction and targeted regulation of caspase3 can effectively prevent apoptosis and delay early degeneration of intervertebral disc.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院中醫(yī)科;廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心;
【基金】：廣州醫(yī)科大學(xué)博士啟動(dòng)項(xiàng)目(2014C41)~~
【分類號】：R681.53
【正文快照】： 椎間盤退變性疾病包括腰椎椎管狹窄、椎間盤突出癥等,是骨科的常見病,也是導(dǎo)致肢體功能障礙的主要原因[1]。椎間盤退變的病理機(jī)制尚未完全闡明,但椎間盤內(nèi)部異常的生物力學(xué)環(huán)境、椎間盤細(xì)胞凋亡及其相互作用可能是誘發(fā)和加速椎間盤退變從而出現(xiàn)腰腿痛的重要因素,因此早期改善

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本文編號：1450108