本文關(guān)鍵詞：第一部分：兩個(gè)三指節(jié)拇指—軸前多指家系的ZRS突變分析 第二部分：家族性甲狀腺非髓樣癌遺傳基礎(chǔ)的初步研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 三指節(jié)拇指 軸前多指 極化活性區(qū)調(diào)控序列 點(diǎn)突變 脛骨發(fā)育不良伴多指(趾) 甲狀腺癌 家族性甲狀腺非髓樣癌 全外顯子組測(cè)序 單核苷酸多態(tài)性微陣列

【摘要】：背景：在人類先天肢端畸形中,多指畸形是相對(duì)常見的畸形。按多指的發(fā)生部位,大致分為軸前多指、軸后多指、中央多指。發(fā)生于橈側(cè)的多指畸形被稱為軸前多指(preaxial polydactyly, PPD)。PPD可獨(dú)立發(fā)生,如PPDⅠ-Ⅳ型；也可作為某些綜合征的部分表型,伴隨其它表型出現(xiàn)。三指節(jié)拇指(triphalangeal thumb, TPT)可與PPD并發(fā),例如PPD Ⅱ、PPDⅢ均具有TPT特征,二者在臨床上難以嚴(yán)格區(qū)分,我們統(tǒng)稱為三指節(jié)拇指-軸前多指。極化活性區(qū)調(diào)控序列(zone of polarizing activity regulatory sequence, ZRS)位于LMBR1基因第五內(nèi)含子內(nèi),長(zhǎng)度約1.3kb。其作為增強(qiáng)子遠(yuǎn)程調(diào)控距其1Mb左右的SHH基因(sonic hedgehog)在胚胎肢芽后緣表達(dá),形成極化活性區(qū)(zone of polarizing activity, ZPA)。當(dāng)ZRS發(fā)生突變以致產(chǎn)生額外的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),導(dǎo)致SHH在胚胎肢芽前緣異位表達(dá)并形成異位的ZPA,則可造成以TPT和PPD為典型特征的多種表型。如三指節(jié)拇指-多并指綜合征(triphalangeal thumb-polysyndactyly syndrome,TPT-PS), TPT1, PPDⅡ,脛骨發(fā)育不全伴多指(趾)(tibial hypoplasia or aplasia with polydactyly, THYP), Laurin Sandrow綜合征(Laurin Sandrow syndrome, LSS)等。目的：分析兩個(gè)具有三指節(jié)拇指／軸前多指特征的中國(guó)漢族家系的致病突變。方法：1)在所有患者及相關(guān)親屬知情同意的情況下,采集家系1的9名家庭成員(患者2例)、家系2的14名家庭成員(患者7例)的外周血,提取基因組DNA。2)采用實(shí)時(shí)定量PCR (qPCR)與PCR-Sanger測(cè)序,針對(duì)ZRS分別進(jìn)行拷貝數(shù)變異檢測(cè)和序列突變檢測(cè)。3)使用200名無(wú)關(guān)正常人基因組DNA作為對(duì)照進(jìn)行驗(yàn)證。4)使用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,檢測(cè)家系1ZRS附近作為遺傳標(biāo)記的短串聯(lián)重復(fù)序列重復(fù)次數(shù),結(jié)合Sanger測(cè)序發(fā)現(xiàn)的點(diǎn)突變及SNP進(jìn)行單倍型分析。結(jié)果：1)qPCR結(jié)果顯示,兩家系患者均無(wú)ZRS拷貝數(shù)變異。2)Sanger測(cè)序結(jié)果顯示,家系1的兩患者均存在ZRS 406AG雜合突變,家系2的7例患者均存在ZRS 105CG雜合突變,且突變?cè)诟髯约蚁抵芯c多指表型共分離。3)在200名正常對(duì)照中均未發(fā)現(xiàn)上述突變。4)單倍型分析及測(cè)序結(jié)果提示,家系1中第一例出現(xiàn)肢端畸形的患者為ZRS 406AG突變的體細(xì)胞及生殖細(xì)胞嵌合體。結(jié)論：SHH基因調(diào)控序列ZRS的406AG,105CG雜合突變分別為兩個(gè)中國(guó)漢族三指節(jié)拇指軸前多指家系的致病突變。背景：甲狀腺癌(thyroid cancer, TC)是人類最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性病變,其發(fā)病率在中國(guó)乃至全球范圍內(nèi)均迅速上升。甲狀腺癌根據(jù)不同的細(xì)胞起源可分為兩大類：起源于濾泡細(xì)胞的甲狀腺非髓樣癌(nonmedullary thyroid cancer, NMTC)和起源于濾泡旁細(xì)胞的甲狀腺髓樣癌(medullary thyroid cancer, MTC)。全部甲狀腺癌中的95%為NMTC,約有4.2%的NMTC家族中有2個(gè)以上患者,此種NMTC稱為家族性甲狀腺非髓樣癌(familial nonmedullary thyroid cancer, FNMTC)。FNMTC的預(yù)后明顯差于散發(fā)NMTC,需要進(jìn)行更積極的臨床治療。目前通過(guò)家系連鎖分析、全基因組關(guān)聯(lián)分析和全外顯子組測(cè)序等方法,僅有約10個(gè)候選致病基因／位點(diǎn)報(bào)道,其遺傳學(xué)證據(jù)和致病機(jī)制均有待進(jìn)一步明確。且大部分FNMTC病例尚未發(fā)現(xiàn)可能的遺傳基礎(chǔ)。目的：通過(guò)對(duì)10個(gè)FNMTC家系(家系1-10)的遺傳學(xué)分析,探究FNMTC的遺傳機(jī)制。方法：1)在所有家系患者及親屬知情同意的情況下,采集各家系部分成員的外周靜脈血,提取基因組DNA。2)針對(duì)家系2中的三名患者和一名家系內(nèi)正常人,通過(guò)單核苷酸多態(tài)微陣列(SNP array)檢測(cè)其全基因組范圍內(nèi)的DNA拷貝數(shù)變異,并篩選其中與表型共分離的變異。3)針對(duì)家系2中的三名患者和一名家系內(nèi)正常人,通過(guò)全外顯子組測(cè)序(whole-exome sequencing, WES),篩選位于外顯子及外顯子側(cè)翼序列且與表型共分離的突變,并通過(guò)基因頻率、序列保守性、突變位置等因素進(jìn)行分析。經(jīng)PCR-Sanger測(cè)序驗(yàn)證,確定家系2的候選基因。4)在其它9個(gè)FNMTC家系中各選擇一名患者,通過(guò)PCR-Sanger測(cè)序檢測(cè)其在家系2候選基因外顯子及側(cè)翼序列是否存在可能致病突變,并針對(duì)檢測(cè)到的可能致病突變,對(duì)相應(yīng)家系的全體成員進(jìn)行突變位點(diǎn)測(cè)序,進(jìn)行家系內(nèi)共分離分析。5)對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道的FNMTC可能致病基因HABP2,在1 0例FNMTC家系中各選一名患者,對(duì)基因外顯子及外顯子側(cè)翼的內(nèi)含子序列進(jìn)行PCR-Sanger測(cè)序,分析是否存在致病突變。結(jié)果：1)對(duì)家系2的SNP array分析中未發(fā)現(xiàn)可疑的致病拷貝數(shù)變異。2)通過(guò)家系2的WES,篩選得到候選基因13個(gè),分別為：ERBB3、GTF2F2、GALC、MPP4、 CCDC150、SPRYD3、C14orfl6、GSE1、MNAT1、TRIP12、FMNL3、DNAH7、NCL。3)在其它9個(gè)FNMTC家系的候選基因測(cè)序中發(fā)現(xiàn),家系7被檢患者攜帶TRIP 12c.561CT雜合突變,家系8被檢患者攜帶GSE c.3491-3495 del雜合突變。但兩突變?cè)诩蚁?,家系8中均不與NMTC表型共分離。4)對(duì)HABP2基因測(cè)序,10個(gè)家系的被檢患者均不攜帶致病突變。結(jié)論：本研究通過(guò)高通量基因組變異檢測(cè)方法,篩選出若干FNMTC候選致病基因,目前工作尚不能確定其遺傳致病性,但為今后繼續(xù)探索家系2的遺傳機(jī)制奠定了工作基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R682.1

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 趙熙萌;第一部分：兩個(gè)三指節(jié)拇指—軸前多指家系的ZRS突變分析 第二部分：家族性甲狀腺非髓樣癌遺傳基礎(chǔ)的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

，

本文編號(hào)：1320906