本文關(guān)鍵詞：內(nèi)源性大麻素2-AG通過調(diào)控大麻素受體參與保留神經(jīng)損傷誘導的神經(jīng)病理痛

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【摘要】：目的:通過選擇性阻斷大麻素受體CB1或CB2,觀察內(nèi)源性大麻素2-AG對保留神經(jīng)損傷誘導的神經(jīng)病理痛的抑制效應(yīng),以及是否能夠翻轉(zhuǎn)該抑制效應(yīng),從而明確具體哪個大麻素受體在2-AG發(fā)揮的鎮(zhèn)痛效應(yīng)中起關(guān)鍵性作用。方法:通過對大鼠坐骨神經(jīng)分支部分損傷,構(gòu)建神經(jīng)病理痛動物模型——SNI模型(Spared nerve injury model,SNI model),行為學實驗觀察:大鼠機械痛閾——50%爪縮閾值(50%Paw withdrawal mechanical threshold,50%PWT)的改變情況;鞘內(nèi)單次注射內(nèi)源性大麻素2-AG,觀察其對大鼠機械痛敏的抑制效應(yīng);2-AG分別聯(lián)合應(yīng)用大麻素受體1或大麻素受體2特異性阻斷劑(AM281或AM630),觀察這兩種受體阻斷劑對2-AG鎮(zhèn)痛效應(yīng)的翻轉(zhuǎn)情況。通過細胞形態(tài)學實驗和蛋白印跡實驗,觀察上述干預措施后,大麻素受體亞型和星形膠質(zhì)細胞的共表達情況,以及星形膠質(zhì)細胞內(nèi)谷氨酸-谷氨酰胺循環(huán)的關(guān)鍵酶——谷氨酰胺合成酶(GS)的表達變化情況。結(jié)果:行為學研究發(fā)現(xiàn),大鼠坐骨神經(jīng)分支部分損傷后(SNI模型)第四天,測定大鼠的50%PWT,發(fā)現(xiàn)其機械閾值顯著下降(1.57g)并出現(xiàn)明顯的機械痛敏;鞘內(nèi)給予2-AG后,明顯地抑制了大鼠的機械痛敏,大鼠的機械痛閾顯著上升(13.67g),與SNI組比較具有統(tǒng)計學意義(F(1,71)=318.75,P0.01),同時觀察到2-AG的鎮(zhèn)痛效應(yīng)可持續(xù)30min;CB1受體阻斷后,大鼠的機械痛閾明顯下降,翻轉(zhuǎn)了2-AG對機械痛敏的抑制效應(yīng)(F(1,71)=346.20,P0.01),持續(xù)觀察60min翻轉(zhuǎn)效應(yīng)仍然存在;CB2受體阻斷后,僅在45~60min時翻轉(zhuǎn)了2-AG的抑制效應(yīng),與2-AG組相比差異統(tǒng)計學意義(F(1,71)=10.81,P=0.0220.05)。細胞形態(tài)學研究結(jié)果顯示,在SNI模型組,腰段脊髓背角的神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞均不同程度的被激活,其中星形膠質(zhì)細胞被激活的最為明顯,GFAP、CB1受體的表達水平同空白對照組(Na?ve組)相比較表達明顯增強,并且GFAP和CB1受體共表達水平亦明顯上調(diào)(均P0.05);鞘內(nèi)注射2-AG后腰段脊髓背角的星形膠質(zhì)細胞的表達程度與SNI組比較受到一定的抑制,同時CB1受體的表達和GFAP/CB1受體的共表達水平也明顯下調(diào)(均P0.05);陽性細胞計數(shù)統(tǒng)計結(jié)果還顯示,CB1、CB2受體單獨阻斷組中,GFAP、CB1和GFAP/CB1陽性細胞數(shù)均顯著高于2-AG組(均P0.05);CB2受體在各組織染色中均未出現(xiàn)明顯的陽性標記。蛋白印跡實驗發(fā)現(xiàn),神經(jīng)損傷(SNI組)后GS的蛋白表達水平與Naive組比較明顯提高(t=20.22,P0.01);2-AG組顯著抑制了SNI組GS的高表達(t=13.08,P0.01);CB1阻斷組GS蛋白的表達同2-AG組比較明顯上調(diào)(t=6.91,P0.01);CB2阻斷組GS蛋白的表達同2-AG組比較無明顯差異(t=2.81,P=0.1860.05)。結(jié)論:內(nèi)源性大麻素2-AG可以明顯抑制大鼠保留神經(jīng)損傷誘導的神經(jīng)病理痛60min觀察期的觸誘發(fā)痛行為,該效應(yīng)是通過激動星形膠質(zhì)細胞的CB1受體和CB2受體,抑制星形膠質(zhì)細胞內(nèi)的GS酶表達,進而抑制了谷氨酸在突觸末梢的合成和釋放而實現(xiàn)的;并且,在60min的觀察期內(nèi)CB1受體激動所產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛效應(yīng)明顯強于CB2受體。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R614
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本文編號：1256323