本文關(guān)鍵詞：飽和氫鹽水對(duì)大鼠移植肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 氫氣 原位肝移植 缺血再灌注損傷 自噬 凋亡 p53

【摘要】：目的:本研究擬探討飽和氫鹽水對(duì)大鼠移植肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,并進(jìn)一步探討自噬可能參與的保護(hù)機(jī)制。方法:1、研究對(duì)象為健康雄性SD大鼠,周齡8~10周,體重220~250g,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將其分為3組(n=8):假手術(shù)組(sham組)、原位肝移植組(OLT組)和原位肝移植組+飽和氫鹽水處理組(OLT+H組)。sham組僅在麻醉后接受單純開關(guān)腹操作,OLT組和OLT+H組建立原位肝移植模型,并分別在門靜脈開放5min后經(jīng)肝下下腔靜脈注射生理鹽水或飽和氫鹽水(hydrogen-rich saline,HRS)6mL/kg。各組受鼠術(shù)中均進(jìn)行血壓監(jiān)測(cè)。門靜脈開放后及sham組術(shù)畢6h時(shí)取血樣,測(cè)定血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平。取新鮮肝組織標(biāo)本于10%中性福爾馬林保存,蘇木素-伊紅(HE)染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織的病理學(xué)改變。取部分肝組織制成組織勻漿,檢測(cè)丙二醛(MDA)水平和總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。2、研究對(duì)象為健康雄性SD大鼠,周齡8~10周,體重220~250g,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將其分為4組(n=8):假手術(shù)組(sham組)、原位肝移植組(OLT組)、原位肝移植組+飽和氫鹽水處理組(OLT+H組)和原位肝移植組+飽和氫鹽水+3-甲基腺嘌呤(3-MA)處理組(OLT+H+3-MA組)。sham組、OLT組和OLT+H組處理同第一部分。OLT+H+3-MA組在建立原位肝移植模型前1h腹腔注射自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)2.5mg/kg。各組受鼠術(shù)中均進(jìn)行血壓監(jiān)測(cè)。門靜脈開放后及sham組術(shù)畢6h時(shí)取血樣,測(cè)定血清ALT、AST水平。取新鮮肝組織標(biāo)本分別于10%中性福爾馬林和電鏡液保存,在光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織的病理學(xué)改變并通過透射電鏡觀察自噬體的改變。取部分肝組織制成組織勻漿,檢測(cè)MDA水平和T-SOD活性。肝細(xì)胞凋亡情況采用TUNEL染色檢測(cè)。應(yīng)用Western blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白(LC3-II、Beclin-1)、凋亡相關(guān)蛋白(Caspase-3、Cyt-c)的表達(dá)水平及p53磷酸化水平。結(jié)果:1、有創(chuàng)血壓監(jiān)測(cè)顯示,OLT組和OLT+H組受鼠無肝期血壓均顯著降低,再灌注后血壓上升,術(shù)后10min血壓恢復(fù)至正常,組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。再灌注后6h,與sham組比較,OLT組和OLT+H組受鼠肝臟病理損傷明顯,病理學(xué)評(píng)分顯著升高(P㩳0.05);血清ALT和AST水平和肝組織MDA含量均明顯升高(P㩳0.05);而肝組織T-SOD活性均明顯降低(P㩳0.05)。與OLT組比較,OLT+H組中肝臟病理損傷明顯減輕(P㩳0.05);血清ALT和AST水平和肝組織MDA含量均明顯降低(P㩳0.05);而T-SOD活性明顯升高(P㩳0.05)。2、有創(chuàng)血壓監(jiān)測(cè)顯示OLT+H+3-MA組受鼠與OLT組、OLT+H組受鼠比較,血壓變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。與sham組比較,OLT組、OLT+H組和OLT+H+3-MA組受鼠肝臟病理損傷明顯(P㩳0.05),血清ALT和AST水平均顯著升高(P㩳0.05),肝組織MDA水平顯著升高而T-SOD活性均顯著降低(P㩳0.05),Caspase-3、Cyt-c蛋白表達(dá)均顯著升高,凋亡指數(shù)顯著升高(P㩳0.05),且OLT組、OLT+H組LC3-II、Beclin-1蛋白表達(dá)以及自噬體數(shù)目顯著升高(P㩳0.05)。與OLT組比較,OLT+H組肝臟病理損傷程度明顯減輕(P㩳0.05),ALT、AST和MDA水平明顯降低而T-SOD活性顯著升高(P㩳0.05),Caspase-3、Cyt-c、LC3-II、Beclin-1的蛋白表達(dá)以及自噬體數(shù)目均顯著降低(P㩳0.05),凋亡指數(shù)也明顯減低(P㩳0.05),但p53磷酸化程度升高(P㩳0.05)。OLT+H+3-MA組與OLT+H組比較,各項(xiàng)損傷指標(biāo)均顯著降低,Caspase-3、Cyt-c、LC3-II、Beclin-1的蛋白表達(dá)及自噬體數(shù)目均顯著降低同時(shí)凋亡指數(shù)也明顯減低(P㩳0.05),而p53磷酸化程度的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。結(jié)論:飽和氫鹽水后處理可有效緩解移植肝缺血再灌注損傷的程度;其機(jī)制與飽和氫鹽水通過上調(diào)p53磷酸化抑制肝移植誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬,減輕細(xì)胞凋亡程度有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R614

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