飽和氫鹽水對大鼠移植肝缺血再灌注損傷的保護作用及機制
本文關鍵詞:飽和氫鹽水對大鼠移植肝缺血再灌注損傷的保護作用及機制
更多相關文章: 氫氣 原位肝移植 缺血再灌注損傷 自噬 凋亡 p53
【摘要】:目的:本研究擬探討飽和氫鹽水對大鼠移植肝缺血再灌注損傷的保護作用,并進一步探討自噬可能參與的保護機制。方法:1、研究對象為健康雄性SD大鼠,周齡8~10周,體重220~250g,采用隨機數(shù)字表法,將其分為3組(n=8):假手術組(sham組)、原位肝移植組(OLT組)和原位肝移植組+飽和氫鹽水處理組(OLT+H組)。sham組僅在麻醉后接受單純開關腹操作,OLT組和OLT+H組建立原位肝移植模型,并分別在門靜脈開放5min后經(jīng)肝下下腔靜脈注射生理鹽水或飽和氫鹽水(hydrogen-rich saline,HRS)6mL/kg。各組受鼠術中均進行血壓監(jiān)測。門靜脈開放后及sham組術畢6h時取血樣,測定血清中天冬氨酸轉氨酶(AST)和丙氨酸轉氨酶(ALT)水平。取新鮮肝組織標本于10%中性福爾馬林保存,蘇木素-伊紅(HE)染色后在光學顯微鏡下觀察肝組織的病理學改變。取部分肝組織制成組織勻漿,檢測丙二醛(MDA)水平和總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。2、研究對象為健康雄性SD大鼠,周齡8~10周,體重220~250g,采用隨機數(shù)字表法,將其分為4組(n=8):假手術組(sham組)、原位肝移植組(OLT組)、原位肝移植組+飽和氫鹽水處理組(OLT+H組)和原位肝移植組+飽和氫鹽水+3-甲基腺嘌呤(3-MA)處理組(OLT+H+3-MA組)。sham組、OLT組和OLT+H組處理同第一部分。OLT+H+3-MA組在建立原位肝移植模型前1h腹腔注射自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)2.5mg/kg。各組受鼠術中均進行血壓監(jiān)測。門靜脈開放后及sham組術畢6h時取血樣,測定血清ALT、AST水平。取新鮮肝組織標本分別于10%中性福爾馬林和電鏡液保存,在光學顯微鏡下觀察肝組織的病理學改變并通過透射電鏡觀察自噬體的改變。取部分肝組織制成組織勻漿,檢測MDA水平和T-SOD活性。肝細胞凋亡情況采用TUNEL染色檢測。應用Western blot法檢測自噬相關蛋白(LC3-II、Beclin-1)、凋亡相關蛋白(Caspase-3、Cyt-c)的表達水平及p53磷酸化水平。結果:1、有創(chuàng)血壓監(jiān)測顯示,OLT組和OLT+H組受鼠無肝期血壓均顯著降低,再灌注后血壓上升,術后10min血壓恢復至正常,組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。再灌注后6h,與sham組比較,OLT組和OLT+H組受鼠肝臟病理損傷明顯,病理學評分顯著升高(P㩳0.05);血清ALT和AST水平和肝組織MDA含量均明顯升高(P㩳0.05);而肝組織T-SOD活性均明顯降低(P㩳0.05)。與OLT組比較,OLT+H組中肝臟病理損傷明顯減輕(P㩳0.05);血清ALT和AST水平和肝組織MDA含量均明顯降低(P㩳0.05);而T-SOD活性明顯升高(P㩳0.05)。2、有創(chuàng)血壓監(jiān)測顯示OLT+H+3-MA組受鼠與OLT組、OLT+H組受鼠比較,血壓變化差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。與sham組比較,OLT組、OLT+H組和OLT+H+3-MA組受鼠肝臟病理損傷明顯(P㩳0.05),血清ALT和AST水平均顯著升高(P㩳0.05),肝組織MDA水平顯著升高而T-SOD活性均顯著降低(P㩳0.05),Caspase-3、Cyt-c蛋白表達均顯著升高,凋亡指數(shù)顯著升高(P㩳0.05),且OLT組、OLT+H組LC3-II、Beclin-1蛋白表達以及自噬體數(shù)目顯著升高(P㩳0.05)。與OLT組比較,OLT+H組肝臟病理損傷程度明顯減輕(P㩳0.05),ALT、AST和MDA水平明顯降低而T-SOD活性顯著升高(P㩳0.05),Caspase-3、Cyt-c、LC3-II、Beclin-1的蛋白表達以及自噬體數(shù)目均顯著降低(P㩳0.05),凋亡指數(shù)也明顯減低(P㩳0.05),但p53磷酸化程度升高(P㩳0.05)。OLT+H+3-MA組與OLT+H組比較,各項損傷指標均顯著降低,Caspase-3、Cyt-c、LC3-II、Beclin-1的蛋白表達及自噬體數(shù)目均顯著降低同時凋亡指數(shù)也明顯減低(P㩳0.05),而p53磷酸化程度的差異無統(tǒng)計學意義(P㧐0.05)。結論:飽和氫鹽水后處理可有效緩解移植肝缺血再灌注損傷的程度;其機制與飽和氫鹽水通過上調(diào)p53磷酸化抑制肝移植誘導的細胞自噬,減輕細胞凋亡程度有關。
【學位授予單位】:天津醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2016
【分類號】:R614
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,本文編號:1155635
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