本文關(guān)鍵詞：人退變椎間盤(pán)內(nèi)三種干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較

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【摘要】：目的比較來(lái)源于同一人退變椎間盤(pán)內(nèi)髓核干細(xì)胞(NPSCs)、纖維環(huán)干細(xì)胞(AFSCs)及軟骨終板干細(xì)胞(CESCs)的生物學(xué)特性。方法收集7例經(jīng)X線、MRI(核磁共振)確診為椎間盤(pán)突出癥患者,將取出的椎間盤(pán)仔細(xì)分離并進(jìn)行酶消化、濾網(wǎng)過(guò)濾后獲得NPSCs、AFSCs及CESCs。培養(yǎng)至第3代時(shí),采用CCK-8(細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒)檢測(cè)三種干細(xì)胞的生長(zhǎng)活性,并進(jìn)行成脂、成骨及成軟骨誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)21d后分別應(yīng)用油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞成脂能力,茜素紅染色檢測(cè)細(xì)胞成骨能力,甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞成軟骨能力。提取第3代細(xì)胞總RNA,分別行RT-PCR(實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng))檢測(cè)成脂、成骨及成軟骨相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果來(lái)自于同一患者的NPSCs、AFSCs與CESCs形態(tài)上相似,無(wú)明顯差異。生長(zhǎng)曲線顯示CESCs(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為0.35±0.01,0.52±0.02,0.64±0.08,0.80±0.19,0.79±0.2,1.06±0.11,1.37±0.09,1.31±0.41)與AFSCs(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為0.38±0.01,0.50±0.03,0.72±0.06,0.82±0.13,0.87±0.08,0.87±0.09,1.20±0.05,1.43±0.05)增殖能力要比NPSCs(第1、3、5、7、9、11、13、15天OD值分別為0.32±0.02,0.42±0.04,0.59±0.01,0.64±0.17,0.65±0.19,0.68±0.21,0.67±0.12,0.59±0.12)活躍。油紅O染色、茜素紅染色及甲苯胺藍(lán)染色分別證實(shí)三種干細(xì)胞均可向脂、骨及軟骨三系誘導(dǎo)分化。RT-PCR檢測(cè)顯示AFSCs在成脂(PPARγ基因相對(duì)表達(dá)量6.85±0.32,LPL基因相對(duì)表達(dá)量13.72±0.37)、及成軟骨(COII基因相對(duì)表達(dá)量10.45±1.10,SOX-9基因相對(duì)表達(dá)量14.39±1.22)基因表達(dá)方面比NPSCs(PPARγ基因相對(duì)表達(dá)量6.63±0.50,LPL基因相對(duì)表達(dá)量8.41±0.42;COII基因相對(duì)表達(dá)量3.53±0.62,SOX-9基因相對(duì)表達(dá)量7.66±0.68)與CESCs(PPARγ基因相對(duì)表達(dá)量7.21±0.21,LPL基因相對(duì)表達(dá)量10.62±0.37;COII基因相對(duì)表達(dá)量8.26±0.49,SOX-9基因相對(duì)表達(dá)量13.70±1.10)略強(qiáng);而成骨能力方面,CESCs最強(qiáng)(RUNX-2基因相對(duì)表達(dá)量7.30±1.1,COI基因相對(duì)表達(dá)量8.22±0.84),AFSCs(RUNX-2基因相對(duì)表達(dá)量6.20±0.92,COI基因相對(duì)表達(dá)量4.94±0.90)與NPSCs相當(dāng)(RUNX-2基因相對(duì)表達(dá)量2.61±0.06,COI基因相對(duì)表達(dá)量7.05±0.82;);NPSCs的成脂基因尤其脂蛋白脂肪酶(LPL)基因表達(dá)較低。結(jié)論NPSCs、AFSCs及CESCs在體外培養(yǎng)中細(xì)胞形態(tài)相似,但生物學(xué)特性方面存在著差異。體外誘導(dǎo)分化及RT-PCR檢測(cè)均提示AFSCs比其他兩種干細(xì)胞在椎間盤(pán)組織工程領(lǐng)域中更加具有優(yōu)越性。
【關(guān)鍵詞】：退變椎間盤(pán) 髓核干細(xì)胞 纖維環(huán)干細(xì)胞 軟骨終板干細(xì)胞 生物學(xué)特性
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R681.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-10
• 第一部分人退變椎間盤(pán)內(nèi)三種干細(xì)胞的提取、分離及培養(yǎng)10-15
• 材料與方法10-13
• 結(jié)果13-14
• 附圖14-15
• 第二部分人退變椎間盤(pán)內(nèi)三種干細(xì)胞的生物學(xué)特性比較15-29
• 一.材料15-17
• 二.方法17-23
• 結(jié)果23-27
• 討論27-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 綜述32-54
• 參考文獻(xiàn)41-54
• 中英文縮略詞表54-55
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文55-56
• 致謝56-58

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