本文關(guān)鍵詞：嗜酸乳桿菌干預(yù)大鼠回腸貯袋炎的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 回腸貯袋炎 嗜酸乳桿菌 葡聚糖硫酸鈉 ZO-1

【摘要】：本研究利用顯微外科技術(shù)制作建立大鼠回腸貯袋模型,隨后采用葡聚糖硫酸鈉(Dextran surfate sodium,DSS)誘導(dǎo)大鼠回腸貯袋炎模型,通過對(duì)比DSS干預(yù)前后大鼠糞便評(píng)分、組織病理學(xué)的變化和貯袋(或末端回場(chǎng))組織中炎癥標(biāo)志物IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA轉(zhuǎn)錄水平評(píng)估貯袋炎模型。大鼠貯袋炎模型成功建立后給予嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus,LA)灌胃治療,通過對(duì)比大鼠糞便評(píng)分、評(píng)價(jià)貯袋組織病理改變、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)上述炎癥標(biāo)志物相對(duì)表達(dá)量變化及免疫組化檢測(cè)腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1的表達(dá)水平綜合評(píng)價(jià)治療大鼠回腸貯袋炎的效果并探討其機(jī)制。第一部分大鼠回腸貯袋炎模型的建立目的:利用顯微外科技術(shù)建立大鼠回腸貯袋模型,并采用葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium salt,DSS)誘導(dǎo)大鼠回腸貯袋炎模型。方法:利用顯微外科技術(shù)建立SD大鼠回腸貯袋模型,將模型大鼠隨機(jī)分為回腸貯袋肛管吻合術(shù)(ileal pouch-anal anastomosis,IPAA)組,IPAA+DSS組:IPAA術(shù)后第31天開始,連續(xù)給4%DSS溶液100ml 4天,并設(shè)定假手術(shù)(Sham)組:開關(guān)腹為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)期間記錄各組大鼠體重變化、便血情況、糞便性狀(評(píng)分);術(shù)后第35天取對(duì)照組末端回腸組織,IPAA大鼠取回腸貯袋組織,HE染色進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)組織IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:IPAA術(shù)后大鼠體重在(9.42±1.44)天達(dá)到最低水平(285.47±10.30)g之后逐漸增長(zhǎng);給予DSS后大鼠體重出現(xiàn)持續(xù)下降,下降幅度為(72.92±6.60)g。IPAA+DSS組大鼠均出現(xiàn)血便(6/6),糞便評(píng)分低于IPAA組和Sham組(F=350.4,P0.05);給予DSS后大鼠的貯袋組織學(xué)評(píng)分高于Sham組和IPAA組(F=573.8,P0.05),且IPAA組貯袋評(píng)分高于Sham組末端回腸組織評(píng)分(t=20.55,P0.05)。IPAA+DSS組貯袋組織中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均高于Sham組和IPAA組(F=886.4,P0.05;F=773.1,P0.05;F=575.2,P0.05),IL-10mRNA表達(dá)水平低于后兩組(F=536.3,P0.05)。IPAA組貯袋組織中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA轉(zhuǎn)錄水平高于Sham組(t=16.47,P0.05;t=8.29,P0.05;t=16.05,P0.05),IL-10mRNA表達(dá)水平低于Sham組(t=14.24,P0.05)。結(jié)論:在建立大鼠回腸貯袋模型基礎(chǔ)上給予適量DSS可以建立理想的大鼠回腸貯袋炎模型。第二部分嗜酸乳桿菌干預(yù)大鼠回腸貯袋炎模型的實(shí)驗(yàn)研究目的:評(píng)價(jià)嗜酸乳桿菌干預(yù)大鼠回腸貯袋炎模型的治療效果并探討其作用機(jī)制。方法:利用顯微外科技術(shù)建立SD大鼠回腸貯袋模型,并建立DSS誘導(dǎo)的回腸貯袋炎模型,將模型大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組(NS組)、嗜酸乳桿菌組(LA組)和無干預(yù)組(non-intervention,NI組),各組分別給予3ml生理鹽水灌胃、1×1010 CFU(3ml)嗜酸乳桿菌灌胃和無干預(yù)7天。實(shí)驗(yàn)期間觀察記錄各組大鼠體重變化、便血情況、糞便性狀(評(píng)分);取大鼠回腸貯袋組織,HE染色進(jìn)行組織學(xué)評(píng)分;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)貯袋組織中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的mRNA表達(dá)水平;免疫組化檢測(cè)貯袋組織緊密連接蛋白ZO-1表達(dá)水平。結(jié)果:干預(yù)結(jié)束后LA組體重恢復(fù)水平高于NS組和NI組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=61.34,P0.05)。各組大鼠均出現(xiàn)血便,在DSS處理結(jié)束后LA組大鼠在3.17±0.75天血便消失,NS組和NI組分別為6.5±0.55天和6.17±0.75天。LA組大鼠糞便性狀明顯改善,糞便評(píng)分高于NS組和NI組(F=108.7,P0.05)。NS組和NI組大鼠回腸貯袋組織病理評(píng)分高于LA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=31.23,P0.05)。LA組貯袋組織中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均低于NS組和NI組(F=373.6,P0.05;F=285.5,P0.05;F=132.9,P0.05),IL-10mRNA表達(dá)水平高于后兩組(F=61.05,P0.05)。LA組貯袋組織中ZO-1表達(dá)水平高于NS組和NI組(F=8.23,P0.05),NS組和NI組貯袋組織各炎癥因子和ZO-1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。結(jié)論:嗜酸乳桿菌可以治療DSS誘導(dǎo)的大鼠回腸貯袋炎,其可能是通過抑制IL-1β、IL-6和TNF-α,促進(jìn)IL-10的表達(dá)減輕貯袋炎癥,并影響ZO-1蛋白表達(dá)改善腸道屏障功能。
【關(guān)鍵詞】：回腸貯袋炎 嗜酸乳桿菌 葡聚糖硫酸鈉 ZO-1
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R656
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 第一部分 大鼠回腸貯袋炎模型的建立15-29
• 1.1 對(duì)象與方法15-22
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象和材料15-16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)流程圖16
• 1.1.3 大鼠回腸貯袋模型的制作16-18
• 1.1.4 誘導(dǎo)大鼠回腸貯袋炎18
• 1.1.5 一般情況及糞便評(píng)分18
• 1.1.6 組織HE染色及病理評(píng)18-19
• 1.1.7 PCR檢測(cè)相關(guān)炎癥因子mRNA轉(zhuǎn)錄19-22
• 1.1.8 統(tǒng)計(jì)處理方法22
• 1.2 結(jié)果22-27
• 1.2.1 大鼠生理狀況改變22-24
• 1.2.2 組織病理學(xué)改變及組織學(xué)評(píng)分24-26
• 1.2.3 PCR檢測(cè)腸管組織炎癥指標(biāo)26-27
• 1.3 討論27-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 第二部分 嗜酸乳桿菌干預(yù)大鼠回腸貯袋炎模型29-41
• 2.1 對(duì)象與方法29-31
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象和材料29-30
• 2.1.2 糞便評(píng)分、HE、病理評(píng)分和RT-PCR按照第一部分操作30
• 2.1.3 免疫組化染色檢測(cè)ZO-1 蛋白30-31
• 2.2 結(jié)果31-37
• 2.2.1 大鼠生理狀況改變31-33
• 2.2.2 組織病理學(xué)改變及組織學(xué)評(píng)分33-34
• 2.2.3 PCR檢測(cè)腸管組織炎癥指標(biāo)34-35
• 2.2.4 ZO-1蛋白表達(dá)水平35-37
• 2.3 討論37-40
• 2.3.1 嗜酸乳桿菌在貯袋炎中的應(yīng)用37
• 2.3.2 嗜酸乳桿菌對(duì)貯袋炎便血的治療作用37
• 2.3.3 嗜酸乳桿菌與貯袋炎癥因子37-39
• 2.3.4 嗜酸乳桿菌與腸屏障39-40
• 2.4 小結(jié)40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明52-53
• 綜述 菌群與回腸貯袋炎的研究53-62
• 綜述參考文獻(xiàn)57-62
• 致謝62-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：1037970