本文關(guān)鍵詞：調(diào)控脂肪間充質(zhì)干細胞成軟骨分化基因Sox-9和低氧誘導(dǎo)因子1α的表達

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【摘要】：背景:有學(xué)者采用基因轉(zhuǎn)染的方法誘導(dǎo)脂肪間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化,使種子細胞能夠穩(wěn)定合成和分泌特定的細胞因子,從而達到長期穩(wěn)定刺激種子細胞增殖、分化和軟骨形成的目的。目的:觀察胰島素樣生長因子1基因轉(zhuǎn)染對兔脂肪間充質(zhì)干細胞低氧誘導(dǎo)因子1α和Sox-9表達的影響。方法:(1)取成年新西蘭大耳白兔頸后部皮下脂肪組織,分離、培養(yǎng)兔脂肪間充質(zhì)干細胞,免疫熒光法鑒定后在脂質(zhì)體介導(dǎo)下應(yīng)用pc DNA3.1-IGF-1基因轉(zhuǎn)染脂肪間充質(zhì)干細胞,G418篩選,獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株;(2)實驗分為3組:正常傳代培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)干細胞;轉(zhuǎn)染pc DNA3.1的脂肪間充質(zhì)干細胞;轉(zhuǎn)染pc DNA3.1-IGF-1的脂肪間充質(zhì)干細胞。(3)RT-PCR及Western blot法檢測轉(zhuǎn)染后細胞中胰島素樣生長因子1的表達,MTT法繪制細胞增殖曲線,Dil熒光染料標記后計數(shù)細胞增殖效率,免疫熒光法分析轉(zhuǎn)染后細胞低氧誘導(dǎo)因子1α和Sox-9的表達情況,DMMB定量測定總糖胺聚糖含量。結(jié)果與結(jié)論:(1)成功構(gòu)建穩(wěn)定表達pcD NA3.1-IGF-1的細胞株,RT-PCR及Western blot檢測證實轉(zhuǎn)染后的細胞株在m RNA水平上獲得胰島素樣生長因子1的表達,并且成功翻譯為蛋白;(2)MTT提示轉(zhuǎn)染后細胞增殖活性增強;(3)胰島素樣生長因子1基因轉(zhuǎn)染顯著提高Dil標記脂肪間充質(zhì)干細胞的增殖效率;(4)轉(zhuǎn)染后細胞的低氧誘導(dǎo)因子1α和Sox-9表達陽性;(5)胰島素樣生長因子1基因轉(zhuǎn)染組糖胺聚糖含量明顯高于其他2組(P0.01)。(6)結(jié)果說明,胰島素樣生長因子1基因轉(zhuǎn)染能夠能夠有效促進脂肪間充質(zhì)干細胞增殖,促使陽性表達低氧誘導(dǎo)因子1α和成軟骨分化調(diào)控基因Sox-9,并有效促進細胞分泌軟骨細胞外基質(zhì)糖胺聚糖。
【作者單位】： 朝陽市中心醫(yī)院骨外科;中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院創(chuàng)傷骨科;
【關(guān)鍵詞】： 干細胞 間充質(zhì)干細胞 胰島素樣生長因子I 組織工程 脂肪干細胞 胰島素樣生長因子 脂肪間充質(zhì)干細胞 低氧誘導(dǎo)因子 SOX- 遼寧省自然科學(xué)基金
【基金】：遼寧省自然科學(xué)基金資助項目(20102264)~~
【分類號】：R68
【正文快照】： 0引言Introduction 因為軟骨細胞再生、軟骨損傷自身修復(fù)能力的限制,關(guān)節(jié)軟骨損傷在臨床上仍然難以修復(fù)。軟骨組織工程學(xué)的發(fā)展為其治療提供了新的契機,應(yīng)用組織工程軟骨修復(fù)軟骨缺損成為近年來的一個熱門研究領(lǐng)域。種子細胞、生物因子和支架材料是組織工程的3個要素,而種子

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本文編號：1032503