本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic-reticulum stress）與人工關(guān)節(jié)無菌性松動機(jī)制的研究

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【摘要】：盡管人工關(guān)節(jié)置換是人類最為成功的外科手術(shù)之一,但由微粒誘導(dǎo)的骨溶解所引起的人工關(guān)節(jié)無菌性松動仍是導(dǎo)致關(guān)節(jié)置換失敗的最主要原因。深入研究人工關(guān)節(jié)無菌性松動的發(fā)病機(jī)理對這一疾病的早期預(yù)防和治療都具有非常重要的意義。近年來研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在炎癥的發(fā)生中起著重要的作用,而炎癥被認(rèn)為在無菌性松動中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否參與了無菌性松動的發(fā)生仍尚未可知。本論文假設(shè)巨噬細(xì)胞吞噬了磨損微粒后會誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,并導(dǎo)致了微粒誘導(dǎo)的骨溶解及無菌性松動的發(fā)生。首先,我們使用了類巨噬細(xì)胞系Raw264.7細(xì)胞進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。我們發(fā)現(xiàn)加入加入Ti合金微�；蛘逤oCrMo合金微粒后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)蛋白IRE1-α、GRP78/Bip和CHOP的表達(dá)較對照組顯著升高,說明在Raw264.7細(xì)胞中,合金微粒誘導(dǎo)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生。進(jìn)一步的,為了探明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生的意義,我們檢測了無菌性松動相關(guān)的炎性細(xì)胞因子IL-6, TNF-α和IL-1β的表達(dá)。結(jié)果,合金微粒刺激Raw264.7細(xì)胞后,細(xì)胞中上述細(xì)胞因子的表達(dá)顯著上調(diào),更為重要的是,當(dāng)我們使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的抑制劑抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生后,Raw264.7細(xì)胞所表達(dá)的炎性細(xì)胞因子也被抑制,這意味著內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)參與介導(dǎo)了微粒誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),利用微粒誘導(dǎo)的小鼠顱骨骨溶解模型,采用多方面的數(shù)據(jù)(Western blotting,細(xì)胞因子的變化,TRAP染色,TRAP酶活性測定,甲苯胺藍(lán)染色),驗(yàn)證內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)在微粒誘導(dǎo)的骨溶解中所發(fā)揮的作用。我們發(fā)現(xiàn),微粒刺激小鼠顱骨后,其顱骨骨膜中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)標(biāo)志蛋白以及細(xì)胞因子均顯著升高,此外還伴隨著顱骨中破骨細(xì)胞活性的增強(qiáng),骨溶解的發(fā)生；而抑制了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)后,細(xì)胞因子的表達(dá)下調(diào),破骨細(xì)胞活性減低,骨溶解的發(fā)生也顯著減輕。為了確證假體周圍無菌性松動患者體內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生,我們使用從臨床患者體內(nèi)收集的界膜組織進(jìn)行Western blotting檢測,成功檢測到了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)蛋白的高表達(dá)。綜上所述,我們推測微粒誘導(dǎo)的骨溶解發(fā)生的可能的機(jī)制之一是：磨損微粒被假體周圍的巨噬細(xì)胞所吞噬,誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),并通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)刺激了細(xì)胞分泌大量的炎性細(xì)胞因子,這些細(xì)胞因子誘導(dǎo)了破骨細(xì)胞的分化,和增強(qiáng)了破骨細(xì)胞的活性,最終導(dǎo)致了骨溶解的發(fā)生；因此,治療微粒誘導(dǎo)的骨溶解的可能機(jī)制之一是通過有效的途徑,抑制假體周圍內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生,達(dá)到緩解骨溶解發(fā)生的目的。通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生揭示了假體周圍無菌性松動的一種新的治療策略。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 無菌性松動 磨損微粒 骨溶解
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R687.4;R318.17
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 綜述部分12-37
• 一、人工關(guān)節(jié)假體周圍無菌性松動的概述12-20
• 1 人工關(guān)節(jié)假體周圍無菌性松動簡介12-13
• 2 人工關(guān)節(jié)假體周圍無菌性松動致病機(jī)理13-17
• 3 人工關(guān)節(jié)假體周圍無菌性松動治療現(xiàn)狀17-19
• 4 人工關(guān)節(jié)假體周圍無菌性松動的動物模型19-20
• 二、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)概述20-31
• 1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)概述20-25
• 2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)與炎癥25-30
• 3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)與疾病30-31
• 參考文獻(xiàn)31-37
• 實(shí)驗(yàn)部分37-75
• 一、引言37-38
• 二、實(shí)驗(yàn)儀器和材料38-40
• 1 實(shí)驗(yàn)儀器38-39
• 2 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 三、實(shí)驗(yàn)方法40-52
• 1 合金微粒、PMMA微粒的來源、制備及處理40-41
• 2 Raw264.7細(xì)胞的復(fù)蘇、凍存及傳代培養(yǎng)41-42
• 3 小鼠腹腔原代巨噬細(xì)胞的提取42
• 4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組及給藥處理42-44
• 5 蛋白的提取44-45
• 6 Western blotting45-48
• 7 Elisa檢測細(xì)胞因子48-49
• 8 小鼠顱骨骨溶解動物模型的構(gòu)建、分組及給藥處理49-50
• 9 甲苯胺藍(lán)染色、TRAP酶活性染色及活性定量50-51
• 10 臨床病例資料的收集51-52
• 11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)52
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論52-73
• 1 合金微粒能夠刺激RAW264.7細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)52-53
• 2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)在體外參與上調(diào)了合金微粒誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子的表達(dá)53-56
• 3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與微粒誘導(dǎo)的小鼠顱骨骨溶解模型56-61
• 4 在體內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與介導(dǎo)了微粒誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞活化及骨溶解61-69
• 5 臨床假體周圍無菌性松動標(biāo)本中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)69-73
• 五、小結(jié)73-75
• 碩士期間發(fā)表論文75-76
• 致謝76-78
• 附件78-83

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本文編號：996684