本文關鍵詞：納米材料的制備及其在蛋白激酶活性檢測中的應用

  更多相關文章： 石墨烯量子點 多肽 蛋白質激酶 抑制劑 金納米粒子 鞣花酸 光致發(fā)光

【摘要】：本論文由綜述和研究工作兩部分組成。綜述部分，首先綜述了納米材料的相關概念，納米材料的各種特性及其應用；其次，介紹了蛋白質激酶的實際意義以及各種分析方法；最后，簡單概括了各種納米材料在蛋白質激酶檢測中的應用。其中，研究工作由兩個實驗體系組成。 本論文的實驗研究內容具體如下幾點： 1.構建了一種基于Zr4+離子與磷酸化的石墨烯量子點-多肽（GQDs-Peptide）復合物之間的多重螯合作用高靈敏檢測蛋白質激酶CK2活性的光化學分析方法。在優(yōu)化的條件下，隨著蛋白質激酶CK2濃度的增加，GQDs-Peptide復合物的熒光強度逐漸下降。另外，，這種方法在蛋白質激酶抑制劑篩選方面有很大的應用潛能。通過在人體血清中檢測存在能夠抑制激酶CK2磷酸化的四種抑制劑（鞣花酸，DRB，大黃素，槲皮素）以及不加四種抑制劑系統(tǒng)的信號變化，證明了這種基于石墨烯量子點的檢測方法能夠用于實際生物樣品中蛋白激酶抑制劑的篩選。 2.通過Zr4+離子與磷酸化的金納米粒子-多肽復合物之間的多重螯合作用，誘導金納米粒子發(fā)生團聚，從而定量檢測蛋白激酶PKA的活性。該法不僅可以檢測PKA，通過改變多肽的序列，可以檢測不同多肽對應的蛋白質激酶。在優(yōu)化的條件下，隨著蛋白激酶PKA的濃度的增加，金納米粒子-多肽復合物對應的紫外吸收峰逐漸減小，表明其發(fā)生了團聚反應。另外，這種方法能夠用于蛋白激酶PKA抑制劑的篩選。本文以PKA典型的抑制劑鞣花酸為例，由于磷酸化的金納米粒子-多肽復合物在Zr4+離子存在下，發(fā)生團聚，引發(fā)金納米粒子的共振光散射峰增強，利用共振光散射峰的增強，分析抑制劑鞣花酸的半抑制濃度。
【關鍵詞】：石墨烯量子點 多肽 蛋白質激酶 抑制劑 金納米粒子 鞣花酸 光致發(fā)光
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08;TB383.1
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第1章 緒論7-16
• 1.1 納米材料概述7-8
• 1.1.1 納米材料的概念7
• 1.1.2 納米材料的分類7-8
• 1.1.3 納米材料的特征8
• 1.2 蛋白質激酶8-12
• 1.2.1 蛋白質激酶簡介8-9
• 1.2.2 蛋白質激酶的分類9
• 1.2.3 蛋白質激酶活性分析方法9-12
• 1.3 納米材料在蛋白激酶活性檢測中的應用12-14
• 1.3.1 金屬納米材料在蛋白激酶檢測中的應用12-13
• 1.3.2 量子點在蛋白激酶檢測中的應用13-14
• 參考文獻14-16
• 第2章 以石墨烯量子點為發(fā)光探針檢測蛋白激酶 CK2 的活性16-30
• 2.1 前言16-17
• 2.2 實驗部分17-19
• 2.2.1 化學試劑與材料17
• 2.2.2 儀器設備17-18
• 2.2.3 氧化石墨烯的制備18
• 2.2.4 石墨烯量子點的制備18
• 2.2.5 多肽-石墨烯量子點復合物的制備18
• 2.2.6 蛋白激酶 CK2 活性檢測18-19
• 2.2.7 CK2 抑制劑和 IC_(50)的分析19
• 2.3 結果與討論19-27
• 2.3.1 GQDs 的表征19-20
• 2.3.2 實驗條件優(yōu)化20-21
• 2.3.3 熒光檢測蛋白激酶 CK2 的活性21-24
• 2.3.4 共振光散射檢測蛋白激酶 CK2 的活性24-25
• 2.3.5 對 GQDs 反應結果的表征25
• 2.3.6 人體血清中 CK2 抑制劑檢測和 IC_(50)分析25-27
• 2.4 結論27
• 參考文獻27-30
• 第3章 基于金-多肽復合物的團聚效應檢測蛋白激酶 PKA 的活性30-39
• 3.1 前言30-31
• 3.2 實驗部分31-32
• 3.2.1 化學試劑與材料31
• 3.2.2 儀器設備31
• 3.2.3 金納米粒子的合成31
• 3.2.4 金納米粒子-多肽復合物的制備31-32
• 3.2.5 蛋白激酶 PKA 活性檢測32
• 3.2.6 PKA 抑制劑檢測和 IC_(50)的分析32
• 3.3 結果與討論32-36
• 3.3.1 對金納米粒子的表征32-33
• 3.3.2 紫外檢測蛋白激酶 PKA 活性33-34
• 3.3.3 共振光散射檢測蛋白激酶 PKA 的活性34-35
• 3.3.4 對金納米粒子反應結果的表征35-36
• 3.3.5 蛋白質激酶 PKA 抑制劑檢測和 IC_(50)分析36
• 3.4 結論36-37
• 參考文獻37-39
• 致謝39-40
• 攻讀碩士期間的研究成果40

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