本文關(guān)鍵詞：軟骨前體細(xì)胞的分離鑒定及IL-1β對其成軟骨分化的影響

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【摘要】：目的對正常軟骨中的軟骨前體細(xì)胞進行分離、鑒定,并對不同濃度IL-1β對軟骨前體細(xì)胞的成軟骨分化影響進行研究。方法取正常成年新西蘭大白兔的軟骨細(xì)胞,通過纖連蛋白粘連分離出軟骨前體細(xì)胞,采用流式細(xì)胞儀對其細(xì)胞表型進行鑒定,倒置相差顯微鏡觀察其克隆增殖,并行成骨、成脂、成軟骨三系分化觀察。培養(yǎng)軟骨前體細(xì)胞團并分為4組,分別加入普通H-DMEM培養(yǎng)基(A組)、成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(B組)、成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基+0.1 ng/mL IL-1β(C組)、成軟骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基+1.0 ng/mL IL-1β(D組),培養(yǎng)3周行組織學(xué)、生物化學(xué)、實時熒光定量PCR等檢測,觀察IL-1β的影響。結(jié)果在正常軟骨細(xì)胞中存在軟骨前體細(xì)胞,經(jīng)鑒定有干細(xì)胞表型陽性表達(dá),有與干細(xì)胞相似的克隆增殖能力及分化能力。HE染色示,C、D組中細(xì)胞團塊較B組明顯減小,細(xì)胞呈肥大樣改變。番紅O、Ⅱ型膠原及Ⅹ型膠原染色示,B組較A組染色深,C、D組均淺于B組,D組淺于C組。生物化學(xué)成分測定示,C、D組的總膠原、糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)相對含量及GAG/DNA比值均顯著低于B組,D組顯著低于C組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);C、D組DNA相對含量均顯著高于B組(P0.05),但C、D組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實時熒光定量PCR檢測示,C、D組Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、Sox-9 mRNA相對表達(dá)量均顯著低于B組,D組顯著低于C組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而C、D組Runx-2和MMP-13mRNA相對表達(dá)量均顯著高于B組,D組顯著高于C組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論在正常軟骨組織中存在一種有干細(xì)胞特性的軟骨前體細(xì)胞,其有克隆和潛在分化的能力。IL-1β對軟骨前體細(xì)胞成軟骨分化有抑制作用,并有促進成骨分化的可能。
【作者單位】： 蘇州市吳江區(qū)第一人民醫(yī)院骨科;南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： 軟骨前體細(xì)胞 炎性因子 IL-β 誘導(dǎo)分化 軟骨修復(fù)
【分類號】：R687;R318.08
【正文快照】： 關(guān)節(jié)軟骨由于自身組織無血管,其自身修復(fù)能力極為有限[1-2],一旦損傷往往會遺留疼痛或功能障礙,最后易致關(guān)節(jié)退變及骨性關(guān)節(jié)炎[3]。目前,臨床上對關(guān)節(jié)軟骨損傷的主要治療方法有骨髓刺激技術(shù)(以微骨折術(shù)為代表[4-5])、骨軟骨移植技術(shù)(以馬賽克技術(shù)為代表[6])等,但結(jié)果均不令人

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本文編號：972354