本文關(guān)鍵詞：組織工程動態(tài)培養(yǎng)法促進(jìn)大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在凍干骨支架上的粘附實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的 采用兩種不同的培養(yǎng)方法：靜態(tài)和動態(tài)培養(yǎng)法觀察脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在凍干骨支架上的粘附作用，為骨缺損修復(fù)領(lǐng)域提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。 方法 用酶消化法分離純化SD大鼠AD-MSCs，取傳至第3代的AD-MSCs，檢測表面抗原CD31、CD44、CD49d、CD106的表達(dá)情況，MTT法檢測增殖活性。取新鮮牛松質(zhì)骨，切成45mm3左右的小塊，脫脂，脫水，冷凍，干燥，制成FDB，滅菌備用。將FDB放入培養(yǎng)基培養(yǎng)，第0、1、2、3d檢測培養(yǎng)基的PH值。實(shí)驗(yàn)分組為：(1)細(xì)胞與骨（CB組）；(2)細(xì)胞組；(3)凍干骨組。采用兩種不同的方法共培養(yǎng)AD-MSCs和FDB：靜態(tài)共培養(yǎng)方法(二維-2D)和動態(tài)培養(yǎng)法(三維-3D)。AD-MSCs和FDB動態(tài)和靜態(tài)共培養(yǎng)24h后，甲醛固定， HNO3中脫鈣，，石蠟包埋。4μm切片，HE染色。圖像分析軟件對于粘附在FDB的細(xì)胞進(jìn)行半定量分析。隨機(jī)選取9個視野，200倍顯微鏡下對于細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。動態(tài)共培養(yǎng)24h后， FDB轉(zhuǎn)至12孔板中并在CO2孵箱中孵育6d。CB組在動態(tài)共培養(yǎng)24h，12孔板內(nèi)培養(yǎng)3d，6d分別用0.05%胰酶消化分離FDB和AD-MSCs，臺盼藍(lán)染色，對活細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，靜態(tài)培養(yǎng)0d，3d和6d后的細(xì)胞活性同樣操作。 結(jié)果 原代細(xì)胞為長梭形，貼壁生長，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示， CD44高表達(dá)，CD49d低表達(dá)，CD31、CD106陰性。MTT法結(jié)果表明AD-MSCs經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，其增殖能力沒有明顯降低。與單純培養(yǎng)基相比，含F(xiàn)DB的培養(yǎng)基pH值隨著時間的推移沒有明顯變化（P0.05），AD-MSCs和FDB動態(tài)或靜態(tài)共培養(yǎng)24h后，200倍顯微鏡下計數(shù)，靜態(tài)態(tài)培養(yǎng)為3.01±0.16，動態(tài)培養(yǎng)為4.15±0.11，二者比較有顯著差異（P 0.05），而且動態(tài)共培養(yǎng)在FDB表面形成多細(xì)胞層，在靜態(tài)共培養(yǎng)中沒有此現(xiàn)象。臺盼藍(lán)染色在動態(tài)培養(yǎng)轉(zhuǎn)為靜態(tài)培養(yǎng)后3和6d， FDB表面的活細(xì)胞數(shù)量減少，靜態(tài)培養(yǎng)后第3、6d比也出現(xiàn)出現(xiàn)減少，二者比較有顯著差異。 結(jié)論 與靜態(tài)培養(yǎng)法相比，動態(tài)培養(yǎng)法能促進(jìn)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在凍干骨表面的粘附數(shù)量并且活力增加。
【關(guān)鍵詞】：動態(tài)培養(yǎng)法 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 凍干骨 粘附
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-10
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法10-14
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與儀器10-11
• 二、實(shí)驗(yàn)方法11-14
• 三、統(tǒng)計分析14
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析14-18
• 一、AD-MSCs形態(tài)14-15
• 二、細(xì)胞表面抗原的表達(dá)15
• 三、大鼠AD-MSCs的增殖活性15-16
• 四、培養(yǎng)基pH值的檢測結(jié)果16
• 五、組織學(xué)觀察16-17
• 六、細(xì)胞生存率的評價——臺盼藍(lán)染色17-18
• 討論18-20
• 結(jié)論20-21
• 本實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新性自我評價21-22
• 參考文獻(xiàn)22-25
• 文獻(xiàn)綜述25-34
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 在學(xué)期間科研成績34-35
• 致謝35-36
• 個人簡介36-37

【參考文獻(xiàn)】

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1 李德強(qiáng);劉培來;湯亭亭;盧建熙;張元凱;李明;李振中;戴\戎;;動態(tài)培養(yǎng)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在三維多孔支架中成骨分化的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年04期

本文編號：849642