本文關鍵詞：新型CD271抗體介導的骨髓間充質干細胞募集性殼聚糖微球運用于原位骨組織工程學的研究

  更多相關文章： 殼聚糖微球 功能性材料 聚多巴胺 抗體固定 細胞捕獲

【摘要】：目的:通過殼聚糖(CS)微球/CD271抗體/聚多巴胺(PDA)涂層制備出一種功能化微球,并對這種微球捕獲成人骨髓間充質干細胞(hBM-MSCs)及促細胞在其表面粘附增殖能力進行評估。方法:1.通過高壓靜電場將殼聚糖溶液裂解為小液滴并利用氫氧化鈉溶液固定為殼聚糖微球。將微球與多巴胺在弱堿性緩沖液中反應以在微球表面構建PDA涂層,隨后引入生物素位點,并借助鏈霉親和素-生物素間的特異性配對將生物素�；腃D271抗體連接至微球表面,從而制備出CD271/PDA/CS微球。同時制備CD271/CS微球及空白CS微球作為對照。2.通過免疫熒光染色法及流式細胞法檢測hBM-MSCs的CD271表達情況。3.將細胞進行Di I預染色,隨后將微球與hBM-MSCs共培養(yǎng)5小時后采用40μm濾網(wǎng)濾去未捕獲細胞。細胞捕獲情況通過熒光顯微鏡及MTS檢測進行觀察評估。4.將捕獲細胞后的微球培養(yǎng)21天,并通過DAPI/鬼筆環(huán)肽染色法及MTS檢測評估細胞在各組微球表面的增殖情況。結果:1.亞微米級的殼聚糖微球被成功制得。經(jīng)過PDA修飾后微球由透明變?yōu)楹谏�。熒光染色結果顯示CD271抗體被成功連接至殼聚糖微球及PDA修飾的殼聚糖微球表面。2.CD271在hBM-MSCs中廣泛表達,表達率高達97.9%。3.CD271/PDA/CS組及CD271/CS組均可捕獲大量hBM-MSCs且兩組間無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05),同時捕獲的細胞數(shù)量均明顯多于空白殼聚糖微球組(P0.05)。4.培養(yǎng)21天后CD271/PDA/CS組可觀察到細胞在微球表面大量增殖。然而CD271/CS組中絕大多數(shù)被捕獲的細胞會在最初一周內(nèi)從微球表面掉落至培養(yǎng)皿表面,從而導致微球上細胞數(shù)量明顯下降。結論:本實驗成功制備PDA及CD271抗體修飾的殼聚糖微球,初步驗證了可通過固定于微球表面的CD271抗體捕獲周圍環(huán)境中的hBM-MSCs,并可通過PDA涂層使捕獲后的細胞粘附于微球表面并大量增殖。
【關鍵詞】：殼聚糖微球 功能性材料 聚多巴胺 抗體固定 細胞捕獲
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R687;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-19
• 結果19-26
• 討論26-30
• 結論30-31
• 展望31-32
• 參考文獻32-38
• 綜述38-55
• 參考文獻45-55
• 英文縮略詞對照表55-57
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文57-59
• 參加學術會議情況59-60
• 致謝60-62

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本文編號：847151