本文關(guān)鍵詞：新型CD271抗體介導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞募集性殼聚糖微球運(yùn)用于原位骨組織工程學(xué)的研究

  更多相關(guān)文章： 殼聚糖微球 功能性材料 聚多巴胺 抗體固定 細(xì)胞捕獲

【摘要】：目的:通過殼聚糖(CS)微球/CD271抗體/聚多巴胺(PDA)涂層制備出一種功能化微球,并對這種微球捕獲成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBM-MSCs)及促細(xì)胞在其表面粘附增殖能力進(jìn)行評估。方法:1.通過高壓靜電場將殼聚糖溶液裂解為小液滴并利用氫氧化鈉溶液固定為殼聚糖微球。將微球與多巴胺在弱堿性緩沖液中反應(yīng)以在微球表面構(gòu)建PDA涂層,隨后引入生物素位點(diǎn),并借助鏈霉親和素-生物素間的特異性配對將生物素�；腃D271抗體連接至微球表面,從而制備出CD271/PDA/CS微球。同時制備CD271/CS微球及空白CS微球作為對照。2.通過免疫熒光染色法及流式細(xì)胞法檢測hBM-MSCs的CD271表達(dá)情況。3.將細(xì)胞進(jìn)行Di I預(yù)染色,隨后將微球與hBM-MSCs共培養(yǎng)5小時后采用40μm濾網(wǎng)濾去未捕獲細(xì)胞。細(xì)胞捕獲情況通過熒光顯微鏡及MTS檢測進(jìn)行觀察評估。4.將捕獲細(xì)胞后的微球培養(yǎng)21天,并通過DAPI/鬼筆環(huán)肽染色法及MTS檢測評估細(xì)胞在各組微球表面的增殖情況。結(jié)果:1.亞微米級的殼聚糖微球被成功制得。經(jīng)過PDA修飾后微球由透明變?yōu)楹谏�。熒光染色結(jié)果顯示CD271抗體被成功連接至殼聚糖微球及PDA修飾的殼聚糖微球表面。2.CD271在hBM-MSCs中廣泛表達(dá),表達(dá)率高達(dá)97.9%。3.CD271/PDA/CS組及CD271/CS組均可捕獲大量hBM-MSCs且兩組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),同時捕獲的細(xì)胞數(shù)量均明顯多于空白殼聚糖微球組(P0.05)。4.培養(yǎng)21天后CD271/PDA/CS組可觀察到細(xì)胞在微球表面大量增殖。然而CD271/CS組中絕大多數(shù)被捕獲的細(xì)胞會在最初一周內(nèi)從微球表面掉落至培養(yǎng)皿表面,從而導(dǎo)致微球上細(xì)胞數(shù)量明顯下降。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功制備PDA及CD271抗體修飾的殼聚糖微球,初步驗(yàn)證了可通過固定于微球表面的CD271抗體捕獲周圍環(huán)境中的hBM-MSCs,并可通過PDA涂層使捕獲后的細(xì)胞粘附于微球表面并大量增殖。
【關(guān)鍵詞】：殼聚糖微球 功能性材料 聚多巴胺 抗體固定 細(xì)胞捕獲
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R687;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-26
• 討論26-30
• 結(jié)論30-31
• 展望31-32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 綜述38-55
• 參考文獻(xiàn)45-55
• 英文縮略詞對照表55-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文57-59
• 參加學(xué)術(shù)會議情況59-60
• 致謝60-62

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1 孫晗;新型CD271抗體介導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞募集性殼聚糖微球運(yùn)用于原位骨組織工程學(xué)的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

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本文編號：847151