本文關(guān)鍵詞：鈷離子對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞毒性及Bax、Bcl-2基因表達(dá)變化的體外實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 鈷離子 人腎小管上皮細(xì)胞 細(xì)胞毒性 細(xì)胞凋亡

【摘要】：背景:由于優(yōu)良的機(jī)械性能、耐磨損、制作簡(jiǎn)單、價(jià)格合理等優(yōu)點(diǎn),鈷基合金成為牙體牙列缺損、牙列缺失、頜骨缺損等疾病的常規(guī)修復(fù)材料。研究顯示,長(zhǎng)期接觸物理、化學(xué)以及生物環(huán)境,鑄造合金在口內(nèi)容易發(fā)生電化學(xué)腐蝕,析出金屬離子。電化學(xué)腐蝕析出的金屬離子會(huì)接觸鄰近的細(xì)胞和組織,并通過(guò)血液循環(huán)分布到全身各處,患者易出現(xiàn)牙齦染色、牙齦炎、牙周炎、過(guò)敏等不良反應(yīng)。鈷基合金腐蝕析出的離子以Co2+為主,Co2+是否對(duì)人體全身健康系統(tǒng)造成損害,國(guó)內(nèi)外目前均未見(jiàn)明顯報(bào)道。體內(nèi)的Co2+絕大部分經(jīng)腎臟排泄,經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)后在腎小管被重吸收,因此Co2+更容易蓄積在腎小管上皮細(xì)胞。本研究以人腎小管上皮細(xì)胞為研究對(duì)象,采用MTT法和RT-PCR法聯(lián)合評(píng)價(jià)Co2+的腎細(xì)胞毒性,以期為臨床上鈷基合金修復(fù)體的選擇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:1.研究鈷離子對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞毒性。2.探討鈷離子對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞凋亡基因Bax、Bcl-2表達(dá)變化的影響;3.評(píng)價(jià)鈷離子的生物安全性,初步探討鈷離子影響人腎小管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制。方法:1.體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2),以5種濃度(0μM、2.5μM、5.0μM、7.5μM、10μM)的Co2+培養(yǎng)液分別干預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞12h、24h、48h。2.使用倒置顯微鏡觀察各時(shí)間點(diǎn)、各濃度培養(yǎng)組細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),記錄細(xì)胞的形態(tài)變化。3.采用MTT比色法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)、各濃度培養(yǎng)組細(xì)胞的吸光度值,測(cè)定細(xì)胞的相對(duì)增殖率。4.應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)、各濃度組細(xì)胞凋亡基因Bax以及Bcl-2mRNA的表達(dá)情況,探討Co2+對(duì)腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響。5.采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。結(jié)果:1.倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài):腎小管上皮細(xì)胞正常為卵圓或短梭形,似鋪路石樣排列較緊密,貼壁生長(zhǎng)好。隨著Co2+作用濃度和時(shí)間的增加,細(xì)胞間隙增大、數(shù)量減少、部分細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)梭形;高濃度干預(yù)24h以上時(shí),細(xì)胞所剩無(wú)幾、異型性生長(zhǎng)、無(wú)完整細(xì)胞形態(tài)、懸浮細(xì)胞多、凋亡率高。2.MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示:與陰性對(duì)照組相比較,各實(shí)驗(yàn)組的OD值表達(dá)差異顯著(P0.05)。隨著Co2+作用濃度、時(shí)間地增加,細(xì)胞的吸光度值逐漸減小,細(xì)胞的增殖率逐漸下降。3.RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果顯示:(1)相同作用時(shí)間時(shí):各組Bax mRNA的表達(dá)增高,差異顯著(P0.05)。Bcl-2 mRNA的表達(dá)降低,差異顯著(P0.05)。(2)相同作用濃度時(shí):各組Bax mRNA表達(dá)增高,差異不顯著(P0.05)。Bcl-2 mRNA的表達(dá)降低,差異顯著(P0.05)。隨著Co2+作用濃度以及時(shí)間地逐漸增加,Bax mRNA的表達(dá)量上升,Bcl-2 mRNA的表達(dá)量下調(diào),兩者的比值Bax/Bcl-2逐漸增大,促進(jìn)了細(xì)胞凋亡地發(fā)生。結(jié)論:1.低濃度(7.5μM)鈷離子在觀察時(shí)間內(nèi)(12h-48h)對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞不存在毒性作用,高濃度(≥7.5μM)干預(yù)24h后對(duì)細(xì)胞有輕度毒性。2.隨著Co2+作用濃度、時(shí)間地不斷增加,Co2+促進(jìn)了人腎小管上皮細(xì)胞中凋亡基因Bax mRNA的表達(dá),抑制了Bcl-2 mRNA的表達(dá),使腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡。3.Co2+對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和凋亡存在一定影響,與作用濃度、時(shí)間呈正相關(guān),但其生物安全性還需進(jìn)一步的臨床觀察和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
【關(guān)鍵詞】：鈷離子 人腎小管上皮細(xì)胞 細(xì)胞毒性 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料和方法13-21
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞來(lái)源13
• 2.1.2 主要試劑及來(lái)源13
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備13-14
• 2.1.4 主要液體的配制14-15
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)方法15-20
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)15-16
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組16
• 2.2.3 鈷離子干預(yù)培養(yǎng)HK-2 細(xì)胞16
• 2.2.4 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞的相對(duì)增殖率16-17
• 2.2.5 RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞凋亡基因Bax、Bcl-2 的表達(dá)變化17-20
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20-21
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-28
• 3.1 HK-2 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察21-23
• 3.1.1 鈷離子干預(yù)培養(yǎng) 12h的細(xì)胞形態(tài)21
• 3.1.2 鈷離子干預(yù)培養(yǎng) 24h的細(xì)胞形態(tài)21-22
• 3.1.3 鈷離子干預(yù)培養(yǎng) 48h的細(xì)胞形態(tài)22-23
• 3.2 MTT法檢測(cè)HK-2 細(xì)胞細(xì)胞增殖率結(jié)果23-24
• 3.3 RT-PCR檢測(cè)Bax、Bcl-2 基因的表達(dá)結(jié)果24-28
• 3.3.1 RT-PCR法檢測(cè) 12h、24h和 48h各組細(xì)胞Bax mRNA表達(dá)情況.1424-25
• 3.3.2 RT-PCR法檢測(cè) 12h、24h和 48h各組細(xì)胞Bcl-2 mRNA表達(dá)情況25-27
• 3.3.3 Image J軟件測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)各濃度組Bax、Bcl-2 基因的相對(duì)灰度值27-28
• 第4章 討論28-33
• 第5章 結(jié)論與展望33-34
• 5.1 結(jié)論33
• 5.2 展望33-34
• 致謝34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 附圖38-43
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果43-44
• 綜述44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 余娜;鐘志勇;唐小江;劉圣蘭;劉培慶;蔣建敏;;鎘引起腎臟毒性的細(xì)胞凋亡通路[J];生態(tài)毒理學(xué)報(bào);2014年03期

2 周群;苗磊;馮靖雯;余和東;郭蕾;林曉萍;;鈷鉻鉬合金對(duì)L929細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[J];上�？谇会t(yī)學(xué);2013年04期

3 戴閩;袁曉軍;程細(xì)高;張斌;詹平;漆啟華;熊建衛(wèi);;鈷鉻離子對(duì)成骨細(xì)胞細(xì)胞毒性及對(duì)其分泌骨保護(hù)素及其配體的影響[J];中國(guó)矯形外科雜志;2009年19期

4 熊建衛(wèi);戴閩;郝亮;漆啟華;詹平;;金屬離子刺激人單核細(xì)胞分泌TNF-α并誘導(dǎo)其凋亡與Caspase-3激活的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2009年03期

5 楊楊;季娟娟;彭蓓;張曉渝;王祥蕓;;4種鑄造合金對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞的毒性研究[J];實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

6 戰(zhàn)德松;呂嬌;趙奇;于學(xué)垠;徐孝榮;;磁性附著體中鐵素體不銹鋼引起小鼠成纖維細(xì)胞L929的死亡模式[J];金屬學(xué)報(bào);2006年08期

7 吳科達(dá),王遠(yuǎn)亮,潘君;生物材料誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2005年02期

8 王尊一,胡曉陽(yáng),侯金梅,宋昕;七種金屬修復(fù)材料的變應(yīng)原性試驗(yàn)[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;2000年04期

9 鄧旭亮,胡曉陽(yáng),李國(guó)珍,金奇,歐陽(yáng)翔英;五種全冠修復(fù)合金材料的細(xì)胞毒性研究[J];現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志;1999年03期

10 孟賀;韓東;戰(zhàn)德松;;五種牙科合金對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞毒性及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年08期

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本文編號(hào)：841739