本文關(guān)鍵詞：擔載細胞因子的電紡纖維在神經(jīng)導(dǎo)管中的應(yīng)用研究

  更多相關(guān)文章： NGF 多糖顆粒 靜電紡絲 神經(jīng)導(dǎo)管 緩釋 神經(jīng)再生

【摘要】：神經(jīng)生長因子(NGF)是細胞因子的一種,一定濃度的NGF具有促進神經(jīng)細胞生長的作用,在神經(jīng)導(dǎo)管中加入NGF并使其維持長效緩釋可以促進神經(jīng)更快更好的修復(fù)。但簡單地將神經(jīng)生長因子加入聚合物溶液通過靜電紡絲技術(shù)制備神經(jīng)導(dǎo)管極易使蛋白變性失活,甚至在體內(nèi)產(chǎn)生嚴重的免疫反應(yīng)。本文研究的主旨在于實現(xiàn)神經(jīng)生長因子在電紡纖維神經(jīng)導(dǎo)管中以自然形態(tài)長效緩釋,以達到修復(fù)神經(jīng)損傷的目的。本文采用改進的水相-水相冷凍相分離法將NGF包裹在多糖顆粒中,進一步將多糖顆粒分散在PLLA溶液中制備靜電紡絲纖維,得到顆粒法電紡纖維。同時將NGF水溶液直接分散在PLLA溶液中制備了乳液法電紡纖維作為對照組。對纖維的物理性質(zhì)進行了表征,結(jié)果表明電紡纖維具備良好的力學(xué)性質(zhì)和彈性,具有類似細胞外基質(zhì)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),并且加入NGF多糖顆粒后纖維的親水性增強。使用Elisa的方法對纖維中NGF的擔載量和體外釋放動力學(xué)進行了測算。顆粒法電紡纖維中NGF的擔載量為理論的41.44%±12.52%(n=3),乳液法電紡纖維僅為18.69%±7.07%(n=3)。顆粒法電紡纖維中NGF的擔載量顯著高于乳液法。顆粒法電紡纖維的體外釋放時間為28天,每日釋放量較均勻,累積釋放量達到2100pg。而乳液法電紡纖維釋放天數(shù)僅為11天,存在嚴重的突釋狀況,累積釋放量僅為930pg。說明顆粒法電紡纖維中NGF活性得到了較好的保護,并且多糖顆粒具有緩釋NGF的效果。使用大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤PC-12細胞作為模型細胞,通過Alamer Blue的方法和掃描電鏡(SEM)觀察細胞在纖維上的黏附和增殖狀況,結(jié)果表明顆粒法電紡纖維更有利于細胞的黏附和增殖。本文還構(gòu)建了大鼠10mm坐骨神經(jīng)缺損模型,使用自體神經(jīng)作為陽性對照,對顆粒法電紡纖維制備的神經(jīng)導(dǎo)管和乳液法電紡纖維制備的神經(jīng)導(dǎo)管的體內(nèi)神經(jīng)再生作用進行了評價。通過神經(jīng)傳導(dǎo)速度、髓鞘厚度和數(shù)量等指標判斷神經(jīng)的再生效果。結(jié)果表明顆粒法神經(jīng)導(dǎo)管對于神經(jīng)的修復(fù)作用明顯優(yōu)于乳液法,堪比自體神經(jīng)。說明本文構(gòu)建的顆粒法電紡纖維神經(jīng)導(dǎo)管在神經(jīng)再生領(lǐng)域具備良好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：NGF 多糖顆粒 靜電紡絲 神經(jīng)導(dǎo)管 緩釋 神經(jīng)再生
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R318.08
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 第一章 緒論13-31
• 1.1 研究意義13
• 1.2 神經(jīng)導(dǎo)管概述13-24
• 1.2.1 周圍神經(jīng)修復(fù)13-14
• 1.2.2 神經(jīng)導(dǎo)管研究背景14-16
• 1.2.3 制備神經(jīng)導(dǎo)管的材料16-19
• 1.2.4 制備神經(jīng)導(dǎo)管的方法19-20
• 1.2.5 神經(jīng)導(dǎo)管的修飾20-23
• 1.2.6 神經(jīng)導(dǎo)管研發(fā)面臨的問題23-24
• 1.3 靜電紡絲技術(shù)概述24-28
• 1.3.1 靜電紡絲技術(shù)的基本原理24-26
• 1.3.2 靜電紡絲技術(shù)的研究現(xiàn)狀26
• 1.3.3 靜電紡絲技術(shù)在神經(jīng)導(dǎo)管中的應(yīng)用26-27
• 1.3.4 靜電紡絲技術(shù)面臨的難題27-28
• 1.4 神經(jīng)生長因子（NGF）概述28-29
• 1.4.1 神經(jīng)生長因子（NGF）的基本性質(zhì)28-29
• 1.4.2 神經(jīng)生長因子（NGF）在神經(jīng)導(dǎo)管中的應(yīng)用29
• 1.5 研究方案29-31
• 第二章 神經(jīng)生長因子（NGF）多糖顆粒的制備與表征31-40
• 2.1 儀器與試劑31-32
• 2.1.1 主要儀器與設(shè)備31
• 2.1.2 主要試劑31-32
• 2.2 實驗方法32-35
• 2.2.1 NGF分析方法的建立-Elisa32-34
• 2.2.2 NGF-多糖顆粒的制備34
• 2.2.3 NGF-多糖顆粒的表征34-35
• 2.3 結(jié)果與討論35-39
• 2.3.1 NGF含量測定Elisa標準曲線35-36
• 2.3.2 Elisa方法回收率和精密度考察36
• 2.3.3 顆粒掃描電鏡（SEM）觀察36-37
• 2.3.4 顆粒粒徑分析37-38
• 2.3.5 顆�；厥章屎桶饴蕼y算38-39
• 2.4 本章小結(jié)39-40
• 第三章 電紡纖維的制備與表征40-50
• 3.1 儀器與試劑40-41
• 3.1.1 主要儀器與設(shè)備40-41
• 3.1.2 主要試劑41
• 3.2 實驗方法41-43
• 3.2.1 電紡纖維的制備41-42
• 3.2.2 電紡纖維的表征42-43
• 3.3 結(jié)果與討論43-49
• 3.3.1 外觀掃描電鏡觀察（SEM）43-45
• 3.3.2 接觸角測量45
• 3.3.3 力學(xué)性質(zhì)45-46
• 3.3.4 NGF含量測定46
• 3.3.5 體外釋放研究46-49
• 3.4 本章小結(jié)49-50
• 第四章 電紡纖維體外細胞實驗50-56
• 4.1 儀器與試劑50-51
• 4.1.1 主要儀器與耗材50
• 4.1.2 主要試劑50-51
• 4.2 實驗方法51-52
• 4.2.1 PC-12細胞培養(yǎng)51-52
• 4.2.2 細胞在纖維上的黏附與增殖52
• 4.3 結(jié)果與討論52-55
• 4.3.1 細胞的黏附52-54
• 4.3.2 細胞的增殖54-55
• 4.4 本章小結(jié)55-56
• 第五章 神經(jīng)導(dǎo)管體內(nèi)動物實驗56-64
• 5.1 儀器與試劑56
• 5.1.1 主要器材56
• 5.1.2 主要試劑56
• 5.2 實驗方法56-58
• 5.2.1 大體觀察57
• 5.2.2 神經(jīng)電生理57
• 5.2.3 組織學(xué)檢查57-58
• 5.3 結(jié)果與討論58-62
• 5.3.1 手術(shù)示例及大體觀察58-59
• 5.3.2 神經(jīng)傳導(dǎo)速度59-60
• 5.3.3 髓鞘再生效果60-62
• 5.4 本章小結(jié)62-64
• 第六章 全文總結(jié)64-67
• 參考文獻67-75
• 致謝75-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間已發(fā)表或錄用的論文及專利76

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 高振;王華;羅曉婷;;神經(jīng)導(dǎo)管生物材料的研究與進展[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年31期

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本文編號：832043