本文關(guān)鍵詞：負(fù)載rhPTH（1-34）的靜電紡絲膜的制備及生物學(xué)研究

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【摘要】：種植義齒已廣泛應(yīng)用于牙列缺損及缺失患者的臨床修復(fù)治療。然而種植體周存在骨缺損，會(huì)影響種植體骨結(jié)合界面快速愈合。這就使骨缺損修復(fù)成為該領(lǐng)域面臨的重要問題。目前采用自體骨移植、異體骨移植、生物材料以及牽張成骨技術(shù)治療骨缺損取得了一定的進(jìn)步，但由于存在繼發(fā)損傷、免疫排斥反應(yīng)、技術(shù)要求高等問題而限制了其應(yīng)用。隨著生物材料學(xué)的發(fā)展，應(yīng)用組織工程學(xué)技術(shù)構(gòu)建的人工骨治療骨缺損成為目前研究的熱點(diǎn)。 rhPTH（1-34）作為一種促進(jìn)骨生成藥物，通過增加成骨細(xì)胞數(shù)量、延長(zhǎng)成骨細(xì)胞壽命，來促進(jìn)骨形成、增加骨密度。由此我們推測(cè)，rhPTH(1-34)可增加種植區(qū)骨量，提高并加速骨缺損區(qū)種植體的骨結(jié)合。以往科研或臨床實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用rhPTH（1-34）作為促進(jìn)骨生成及愈合藥物，主要是通過低劑量間歇性皮下注射的方式給藥，然而rhPTH（1-34）存在易變性、半衰期短等缺陷，限制了其在口腔種植領(lǐng)域中的進(jìn)一步應(yīng)用。如果引入藥物緩釋系統(tǒng)提高rhPTH（1-34）的生物利用率，使促進(jìn)成骨作用可以得到充分發(fā)揮，其必將在口腔種植領(lǐng)域擁有更廣闊的應(yīng)用前景。 靜電紡絲纖維具有表面積大、孔隙率高以及擁有復(fù)雜的多孔結(jié)構(gòu)等優(yōu)點(diǎn)，在組織工程學(xué)和藥物載體等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。復(fù)合纖維可以作為一種有效的控制局部緩釋的藥物載體。本文旨在制備可負(fù)載rhPTH（1-34）的靜電紡絲緩釋纖維，實(shí)現(xiàn)對(duì)rhPTH（1-34）的可控緩釋，并通過細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究該系統(tǒng)在體外對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化的影響，為進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論指導(dǎo)。 方法： 將PLGA、nHA、rhPTH（1-34）按不同組分溶解于氯仿中，磁力攪拌均勻，進(jìn)行紡絲。分別制備PLGA、PLGA\HA、PLGA\PTH、PLGA\HA\PTH不同組分膜。利用掃描電鏡觀察材料表面形貌；利用萬能試驗(yàn)機(jī)進(jìn)行材料拉伸力學(xué)性能的檢測(cè)；通過測(cè)量材料失重率、pH變化及吸水率評(píng)價(jià)材料降解情況；通過MicroBCA檢測(cè)rhPTH(1-34)釋放量，反映材料體外釋放情況。通過FITC\PI染色后，利用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞在材料表面粘附情況；通過MTT法檢測(cè)材料對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞增殖的影響；通過ALP活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)材料對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞分化的影響。 結(jié)果： 一、靜電紡絲纖維膜理化性能 所制備的靜電紡絲纖維膜質(zhì)地均勻，呈多孔狀結(jié)構(gòu)，PLGA\HA\PTH與PLGA\HA、PLGA\PTH形貌相似、直徑較PLGA降低。PLGA拉伸強(qiáng)度最佳，PLGA\PTH強(qiáng)度次之，PLGA\HA、PLGA\HA\PTH兩種材料的強(qiáng)度接近。PLGA\PTH、PLGA\HA\PTH失重速率分別顯著快于PLGA、PLGA\HA組。降解過程中PLGA、PLGA\PTH組pH值下降趨勢(shì)呈現(xiàn)類似，另外兩組類似。PBS中浸泡24d后，PLGA\HA吸水率最低，僅為9.3%，PLGA\PTH吸水率最高，達(dá)28.1%。PLGA\PTH、PLGA\HA\PTH釋放rhPTH（1-34）速率無明顯差異，前1周呈快速釋放階段，4w末累計(jì)釋放基本結(jié)束。 二、靜電紡絲纖維膜的細(xì)胞生物相容性 細(xì)胞粘附 與細(xì)胞共培養(yǎng)6h后，，PLGA\HA\PTH組細(xì)胞黏附量較PLGA\PTH、PLGA\HA組多，且排列緊密。PLGA組粘附量顯著少于其他三組，同時(shí)可見細(xì)胞不僅黏附于材料表面，還有部分細(xì)胞長(zhǎng)入材料內(nèi)部。 細(xì)胞增殖 第1天，PLGA\HA和PLGA\PTH組細(xì)胞增殖明顯優(yōu)于PLGA組(P0.01)， PLGA\PTH\HA組細(xì)胞增殖明顯優(yōu)于PLGA\PTH和PLGA\HA組(P0.01)。第3天、第5天趨勢(shì)同第1天。 細(xì)胞分化 第1天，ALP含量表達(dá)PLGA組與PLGA\PTH組相比無顯著差異(P0.05); PLGA\HA與PLGA\PTH\HA組相比有差異(P0.05)。第7天時(shí)，PLGA\HA、PLGA\PTH和PLGA\PTH\HA組ALP表達(dá)顯著高于PLGA組(P0.01)，PLGA\PTH\HA對(duì)ALP活性的促進(jìn)作用最明顯(P0.01)。第14天時(shí)，各組趨勢(shì)同第7天。 結(jié)論： 1.靜電紡絲膜能夠有效負(fù)載rhPTH(1-34)，并對(duì)該藥物具有顯著的緩釋作用。 2. nHA的加入改善了膜基體PLGA降解過程中的產(chǎn)酸（副）作用。 3.同時(shí)負(fù)載rhPTH（1-34）、nHA的靜電紡絲PLGA纖維膜能夠促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞的增殖、分化。rhPTH(1-34)與nHA表現(xiàn)為協(xié)同作用。
【關(guān)鍵詞】：電紡絲 rhPTH(1-34) nHA 緩釋
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R783.1
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-15
• 文中常用縮寫中英文對(duì)照15-16
• 第1章 緒論16-23
• 1.1 靜電紡絲載藥研究現(xiàn)狀17-20
• 1.1.1 混合溶液靜電紡絲17
• 1.1.2 同軸靜電紡絲17-18
• 1.1.3 乳液靜電紡絲18-19
• 1.1.4 電紡后的表面功能化19
• 1.1.5 靜電紡絲載藥前景及展望19-20
• 1.2 甲狀旁腺激素用于口腔種植領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀20-23
• 1.2.1 甲狀旁腺激素生物學(xué)功能20
• 1.2.2 甲狀旁腺激素在口腔種植領(lǐng)域的應(yīng)用20-21
• 1.2.3 甲狀旁腺激素藥物緩釋載體的研究21-23
• 第2章 載 RHPTH（1-34）納米纖維的制備、理化性能23-35
• 2.123-24
• 2.1.1 材料23
• 2.1.2 儀器23-24
• 2.2 方法24-27
• 2.2.1 乳液法（W/O）PLGA、PLGA\HA、PLGA\PTH、PLGA\HA\PTH靜電紡纖維膜的制備24-25
• 2.2.2 掃描電鏡觀察靜電紡纖維膜表面形貌特征25
• 2.2.3 對(duì)靜電紡纖維膜行拉伸力學(xué)性能測(cè)試25
• 2.2.4 靜電紡纖維膜失重率25-26
• 2.2.5 靜電紡纖維膜 pH 改變26
• 2.2.6 靜電紡纖維膜吸水率26
• 2.2.7 載 rhPTH 靜電紡絲纖維膜的體外釋放26
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 2.3 結(jié)果27-30
• 2.3.1 靜電紡絲纖維膜的掃描電鏡觀察27
• 2.3.2 靜電紡絲纖維膜強(qiáng)度27-28
• 2.3.3 靜電紡絲纖維膜失重率28
• 2.3.4 靜電紡絲纖維膜緩沖液 pH 變化28-29
• 2.3.5 靜電紡絲纖維膜吸水率29
• 2.3.6 材料中 rhPTH 體外釋放29-30
• 2.4 討論30-34
• 2.5 小結(jié)34-35
• 第3章 載 RHPTH 納米纖維的細(xì)胞生物相容研究35-46
• 3.0 材料35
• 3.1 儀器35-36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法36-38
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)36
• 3.2.2 纖維膜對(duì) MC3T3-E1 細(xì)胞增殖的影響36-37
• 3.2.3 MC3T3-E1 細(xì)胞在靜電紡絲纖維膜上的生長(zhǎng)狀況37
• 3.2.4 靜電紡絲纖維膜對(duì)成骨細(xì)胞分化能力的影響37-38
• 3.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-42
• 3.3.1 FITC\PI 染色觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況38-39
• 3.3.2 各組細(xì)胞增殖活性39-40
• 3.3.3 各組細(xì)胞堿性磷酸酶活性40-42
• 3.4 討論42-45
• 3.5 小結(jié)45-46
• 第4章 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果53-54
• 致謝54-55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李聰;張U

本文編號(hào)：802643