本文關(guān)鍵詞：Sonic hedgehog信號(hào)調(diào)控BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化

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【摘要】：目的：分析Sonic hedgehog (Shh)信號(hào)對(duì)骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 (Bone Morphogenetic Proteins 9, BMP9)調(diào)控的間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells, MSCs)骨向分化的影響,并探究這種作用的調(diào)控機(jī)制。方法：BMP9處理MSCs,1、3、5d后,RT-PCR和Western Blot檢測(cè)Hedgehog (Hh)信號(hào)相關(guān)分子的表達(dá)。緊接著,用cyclopamine(Hh信號(hào)抑制劑)和purmorphamine(Hh信號(hào)激活劑)分別作用于BMP9處理的MSCs,化學(xué)發(fā)光檢測(cè)早期成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶(ALP)活性,茜素紅S染色檢測(cè)晚期的鈣鹽沉積。包裝腺病毒Ad-Shh(過表達(dá)Shh)和Ad-siShh(干擾Shh),RT-PCR和Western Blot分析病毒效果。隨后分別檢測(cè)Ad-Shh和Ad-siShh對(duì)BMP9調(diào)控的MSCs骨向分化的作用：化學(xué)發(fā)光和細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)ALP變化；茜素紅S染色檢測(cè)鈣鹽沉積；RT-PCR和Western Blot檢測(cè)晚期成骨標(biāo)志物骨橋蛋白(Osteopontin, OPN)和骨鈣素(Osteocalcin, OCN)以及BMP9下游成骨相關(guān)基因Dlx5、Runx2、Id1、Id2、Id3、CTGF和Coll的表達(dá)；Micro-CT以及組織細(xì)胞染色(HE、Masson三色和阿辛藍(lán))觀察Ad-Shh對(duì)BMP9引起的裸鼠皮下異位成骨的影響。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)Ad-Shh對(duì)BMP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性的影響；Western Blot檢測(cè)Ad-Shh對(duì)BMP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8、MAPK磷酸化以及總的Smad1/5/8和磷酸化Smad1/5/8核內(nèi)聚集的影響。結(jié)果：BMP9可影響Hh信號(hào)相關(guān)基因的表達(dá)；抑制或激活Hh信號(hào)可減弱或增強(qiáng)BMP9所導(dǎo)致的MSCs向成骨細(xì)胞分化。Ad-Shh增強(qiáng)了BMP9誘導(dǎo)的體外骨向分化過程,促進(jìn)了BMP9誘導(dǎo)的體內(nèi)成骨包塊形成;相反,Ad-siShh減弱了BMP9誘導(dǎo)的體外骨向分化過程。Ad-Shh增強(qiáng)了BMP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性,并促進(jìn)了磷酸化Smad1/5/8的核內(nèi)堆積。結(jié)論：Shh信號(hào)可調(diào)控BMP9誘導(dǎo)的MSCs成骨分化。
【關(guān)鍵詞】：Sonic hedgehog信號(hào) 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9 間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-16
• 技術(shù)路線15-16
• 1 材料和方法16-25
• 2 結(jié)果25-41
• 3 討論41-45
• 全文總結(jié)45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 文獻(xiàn)綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59-60
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文60

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