本文關(guān)鍵詞：腺病毒介導(dǎo)rhBMP-2轉(zhuǎn)染兔BMSCs聯(lián)合同種異體DBM構(gòu)建復(fù)合材料的生物安全性研究

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【摘要】：目的腺病毒重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)復(fù)合同種異體脫鈣骨基質(zhì)構(gòu)建復(fù)合材料的生物相容性觀察。方法復(fù)蘇保存于液氮罐中的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),取相同代數(shù)細(xì)胞運(yùn)用腺病毒重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,進(jìn)行轉(zhuǎn)染后免疫組化觀察轉(zhuǎn)染后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)表達(dá)情況。BMSCs轉(zhuǎn)染48h后與同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)復(fù)合,掃描電鏡觀察脫鈣骨基質(zhì)上細(xì)胞生長(zhǎng)、貼附情況,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。結(jié)果腺病毒轉(zhuǎn)染48h后,BMSCs在熒光顯微鏡觀察下,轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞狀態(tài)較好,鏡下可見(jiàn)綠色熒光表達(dá),肉眼觀察轉(zhuǎn)染效率達(dá)到95%以上,免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果表明(Ad-rhBMP-2)轉(zhuǎn)染后棕黃色顆粒性染色可以在細(xì)胞胞漿中觀察到,呈陽(yáng)性表達(dá),未轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)BMP-2蛋白含量較少。細(xì)胞復(fù)合同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)體外培養(yǎng)48h后,倒置顯微鏡下可見(jiàn)脫鈣骨基質(zhì)材料具有良好孔隙與三維結(jié)構(gòu),熒光顯微鏡下Ad-EGFP轉(zhuǎn)染細(xì)胞與脫鈣骨基質(zhì)復(fù)合組可觀察到支架材料上細(xì)胞正常生長(zhǎng)發(fā)出明亮綠色熒光。細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè),細(xì)胞與脫鈣骨基質(zhì)復(fù)合6h后,細(xì)胞粘附率約(70±3.7)%;復(fù)合12h后粘附率為(77±4.6)%;復(fù)合24h后粘附率為(80±3.8)%。掃描電鏡下觀察可見(jiàn)脫鈣骨基質(zhì)呈現(xiàn)疏松多孔結(jié)構(gòu),孔徑大小不一,形狀不規(guī)則并相互交通。脫鈣骨基質(zhì)的孔隙直徑為215±86μm,孔隙率達(dá)76±3.51%。體外培養(yǎng)7天后掃描電鏡觀察細(xì)胞與脫鈣骨基質(zhì)材料復(fù)合可見(jiàn)脫鈣骨表面的細(xì)胞粘連成片,細(xì)胞布滿孔隙,呈伸展?fàn)�、立體狀生長(zhǎng)。MTT檢測(cè)結(jié)果顯示,種植于脫鈣骨基質(zhì)上的轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖情況正常,與正常轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖情況無(wú)明顯差異(p0.05)。結(jié)論同種異體脫鈣骨基質(zhì)具有良好的三維立體結(jié)構(gòu)。Ad-rhBMP-2能夠?qū)MSCs成功、高效的轉(zhuǎn)染。Ad-BMP-2轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與同種異體骨脫鈣骨基質(zhì)的生物相容性良好。
【關(guān)鍵詞】：骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2 腺病毒 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 脫鈣骨基質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R68;R318.08
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英漢縮略詞對(duì)照表9-10
• 前言10-12
• 1 材料與方法12-21
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器12
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑12-13
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器13-14
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法14-21
• 2 結(jié)果21-25
• 2.1 兔BMSCs生長(zhǎng)情況21
• 2.2 Ad-EGFP轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)21
• 2.3 免疫組化法檢測(cè)BMP-2 的表達(dá)21-22
• 2.4 BMSCs復(fù)合DBM植骨材料觀察22-23
• 2.5 細(xì)胞復(fù)合DBM黏附率的測(cè)定23
• 2.6 掃描電鏡觀察23-24
• 2.7 MTT分析DBM對(duì)BMSCs存活及增殖的影響24-25
• 3 討論25-33
• 3.1 BMSCs的分離和培養(yǎng)25-27
• 3.2 腺病毒介導(dǎo)BMP-2 轉(zhuǎn)染BMSCs27-29
• 3.3 腺病毒介導(dǎo)BMP-2 轉(zhuǎn)染BMSCs同DBM復(fù)合29-31
• 3.4 生物相容性初步觀察31-33
• 4 結(jié)論33-34
• 4.1 同種異體脫鈣骨基質(zhì)具有良好的三維結(jié)構(gòu)33
• 4.2 Ad-rhBMP-2 能夠?qū)MSCs成功、高效的轉(zhuǎn)染33
• 4.3 Ad-rhBMP-2 轉(zhuǎn)染BMSCs聯(lián)合同種異體DBM構(gòu)建復(fù)合材料的生物相容性良好33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述38-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄52-53
• 致謝53

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本文編號(hào)：747332