本文關(guān)鍵詞：利用膠原—透明質(zhì)酸—硫酸軟骨素三元納米支架修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究

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【摘要】：目的：評估自主研發(fā)的組織工程軟骨納米支架的相關(guān)參數(shù)及其對兔關(guān)節(jié)軟骨缺損的修復(fù)效果。方法：（1）以膠原（Collagen, Col）、透明質(zhì)酸（Hyaluronicacid, HA）、硫酸軟骨素（Chondroitin sulfate, CS）為原料，按一定比例溶于三氟乙醇和水的混合溶劑中制成溶液，通過靜電紡絲技術(shù)制備組織工程軟骨三維納米多孔支架材料；通過掃描電鏡觀察其表面形貌，并檢測支架的吸水率、接觸角、降解率、粘附率及增殖率。選擇形貌優(yōu)良、理化性質(zhì)及生物學(xué)性能較好的納米支架做進一步的體內(nèi)外實驗；（2）取1周齡新西蘭大白兔肋軟骨，酶消化后體外培養(yǎng)擴增，得到軟骨細胞，選擇P2代軟骨細胞作為種子細胞。將軟骨細胞按一定比例接種于支架后，分別培養(yǎng)7天、14天，常規(guī)石蠟包埋切片，經(jīng)蘇木素-伊紅(Hematoxylin-eosin staining, HE)染色、番紅-O染色（Safranin-O）及蛋白聚糖（Aggrecan）免疫熒光染色、Ⅱ型膠原（Collagen Ⅱ）免疫組織化學(xué)染色觀察細胞在支架上的生長及細胞外基質(zhì)分泌情況；（3）制作兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損模型并分為3組，實驗組植入細胞支架復(fù)合物，對照組植入單純的組織工程軟骨納米支架材料，空白組不做任何處理。術(shù)后分別于8、12周取材，通過大體觀察、HE染色、Safranin-O及Collagen Ⅱ免疫組化染色等方法觀察缺損關(guān)節(jié)軟骨的修復(fù)情況。結(jié)果：（1）以軟骨細胞外基質(zhì)的主要成分COL、HA、CS為原料，利用靜電紡絲技術(shù)成功制備出組織工程軟骨納米支架材料。通過對納米材料纖維直徑、接觸角、降解率、吸水率檢測結(jié)果表明靜電紡絲的主要參數(shù)為：環(huán)境溫度25℃-30℃；靜電紡絲電壓15kv-22kv；靜電紡絲針頭型號為6號；針頭與接收裝置的距離為10cm-12cm；注射器經(jīng)注射泵送液速度9ml/h-11ml/h，紡絲的最佳濃度范圍為80-120mg/ml，三種原料支架的最佳比例為6-8:1:1-2。該條件下制備的復(fù)合三元納米纖維支架的直徑主要分布在126.5±23.3nm-374.7nm±14.1nm之間，支架具有良好的親水性、降解性能較好，軟骨細胞在支架上粘附和增殖情況良好。（2）軟骨細胞在支架上培養(yǎng)后包埋切片染色的結(jié)果表明，軟骨細胞在支架上均勻生長；番紅-O染色及蛋白聚糖免疫熒光染色、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色均為陽性，，表明軟骨細胞在支架上能較長時間存活并分泌糖胺聚糖、ColⅡ和Aggrecan等軟骨細胞外基質(zhì)細胞。（3）兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)實驗結(jié)果表明，術(shù)后8周，實驗組缺損軟骨即可見明顯修復(fù)；術(shù)后12周，大體觀察可見實驗組關(guān)節(jié)軟骨缺損處修復(fù)良好，組織化學(xué)染色結(jié)果表明新生組織與正常軟骨組織邊緣模糊，與軟骨下骨連接緊密，新生組織以透明軟骨細胞為主，軟骨陷窩排列有序，與正常軟骨陷窩相似。對照組的缺損的關(guān)節(jié)軟骨也得到了部分修復(fù)。而空白組缺損軟骨的自我修復(fù)情況較差，術(shù)后12周，缺損仍舊明顯，且染色結(jié)果顯示缺損處的新生組織以纖維組織為主。結(jié)論：（1）采用靜電紡絲技術(shù)，以軟骨細胞外基質(zhì)主要成分COL、HA、CS為原料，通過調(diào)節(jié)靜電紡絲相關(guān)參數(shù)，可以獲得理化特性和生物學(xué)性能良好的組織工程軟骨支架材料。（2）體外實驗表明軟骨細胞在這種支架材料上能正常地生長、增殖和分泌細胞外基質(zhì)。（3）納米支架與細胞復(fù)合物移植對兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損具有良好的修復(fù)作用。
【關(guān)鍵詞】：靜電紡絲 膠原 透明質(zhì)酸 硫酸軟骨素 軟骨組織工程
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R318.08;R687.3
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-14
• 第一部分 膠原-透明質(zhì)酸-硫酸軟骨素復(fù)合三元納米支架制備工藝的探索14-26
• 材料與方法14-17
• 結(jié)果17-22
• 討論22-25
• 小結(jié)25-26
• 第二部分 膠原-透明質(zhì)酸-硫酸軟骨素復(fù)合納米支架的物理參數(shù)及生物學(xué)性能檢測26-46
• 材料與方法26-32
• 結(jié)果32-42
• 討論42-45
• 小結(jié)45-46
• 第三部分 膠原-透明質(zhì)酸-硫酸軟骨素三元納米支架軟骨細胞的體外培養(yǎng)及體內(nèi)修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)軟骨缺損的實驗研究46-64
• 材料與方法46-53
• 結(jié)果53-59
• 討論59-63
• 小結(jié)63-64
• 結(jié)論64-65
• 參考文獻65-70
• 英漢縮略詞對照表70-71
• 致謝71-73
• 攻讀碩士學(xué)位期間主要成果73-75
• 綜述一75-89
• 參考文獻83-89
• 綜述二89-105
• 參考文獻98-105

【參考文獻】

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本文編號：734708