本文關(guān)鍵詞：食管內(nèi)環(huán)外縱平滑肌層的構(gòu)建及其體內(nèi)培育

  更多相關(guān)文章： 食道平滑肌細(xì)胞 內(nèi)環(huán)外縱支架 體內(nèi)培育 食道組織工程

【摘要】：目的:根據(jù)天然食道肌層內(nèi)環(huán)外縱的雙層結(jié)構(gòu),制備出一種具有雙面微槽構(gòu)造的生物降解性的聚氨酯(PU)支架,作為食道肌層損傷修復(fù)的替代物,引導(dǎo)食道外縱肌和內(nèi)環(huán)肌的再生,并在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行肌層的在體培育,為食道疾病的治療提供了基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:通過(guò)組織塊貼壁的方法,從新西蘭大白兔食道中提取并培養(yǎng)原代平滑肌細(xì)胞(SMCs),作為實(shí)驗(yàn)用種子細(xì)胞。同時(shí),課題組自制了帶有兩種微槽構(gòu)造的硅材質(zhì)模具,微槽構(gòu)造分別為:具有連續(xù)凹槽的圖案(P1),槽寬200 um,槽深30 um,槽間距30 um;和具有不連續(xù)凹槽圖案(P2),槽寬100 um,槽深30 um,間隔30 um,間隔前后間距30 um,間隔長(zhǎng)150 um,以無(wú)圖案的PU支架(P3)作為對(duì)照。將醫(yī)用的生物可降解的PU材料溶于1,4-二氧六環(huán)溶液中,得到PU溶液,倒在用上述自制模具制備的子模具(PDMS)上,制備了兩種上述P1和P2圖案的支架PU1和PU2。通過(guò)對(duì)制備的PU支架進(jìn)行絲素蛋白(SF)的接枝得到PU1-SF和PU2-SF,提高其表面的親水性能,進(jìn)一步提高其生物相容性。將上述原代SMCs種植于改性前后的支架上,檢測(cè)SMC在其上的生長(zhǎng)特性,利用四甲基偶氮唑鹽(MTT)檢測(cè)細(xì)胞在支架上生長(zhǎng)率,利用細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)和掃描電鏡(SEM)檢測(cè)支架表面細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)及鑒定細(xì)胞類(lèi)型,利用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)支架上平滑肌細(xì)胞的表達(dá)肌動(dòng)蛋白的能力,通過(guò)上述幾種方法來(lái)探索制備的PU支架對(duì)SMCs具有良好的細(xì)胞相容性和細(xì)胞生長(zhǎng)的方向性誘導(dǎo)作用,細(xì)胞在PU2-SF上的生長(zhǎng)率優(yōu)于PU1-SF,并且更能保持平滑肌的形態(tài)。為了在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)再生組織中血管的生長(zhǎng),根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用對(duì)上述改性后支架接枝血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的方法。另外,為緩解支架成管后內(nèi)面的機(jī)械張力,將點(diǎn)斷的PU2作為管子內(nèi)層,而連續(xù)PU1作為管子外層,用1,4-二氧六環(huán)將二層支架以微槽垂直取向黏合成具有雙面微槽的復(fù)合支架。建立動(dòng)物食管肌層缺損模型,將制備的支架植入損傷處,進(jìn)行體內(nèi)原位替代實(shí)驗(yàn),包括片狀支架替代和環(huán)狀支架整環(huán)替代,以觀察并培養(yǎng)食道外縱肌和內(nèi)環(huán)肌的生長(zhǎng),HE染色檢測(cè)支架對(duì)損傷面的修復(fù)和再生作用。結(jié)果:在體外通過(guò)組織塊貼壁法成功獲取了原代平滑肌細(xì)胞,傳至多代后仍能保持良好的平滑肌形態(tài),實(shí)驗(yàn)用到的細(xì)胞為2~4代。制備了兩種微槽構(gòu)造的復(fù)合支架,通過(guò)對(duì)細(xì)胞-支架的體外復(fù)合培養(yǎng)及檢測(cè),證明絲素蛋白改性后能促進(jìn)支架上細(xì)胞的生長(zhǎng),細(xì)胞也能沿著支架紋路的方向取向,這對(duì)平滑肌細(xì)胞維持其生物功能非常重要。體內(nèi)原位替代結(jié)果顯示,制備的支架可以引導(dǎo)食道肌層的生長(zhǎng),包括縱肌和環(huán)肌,對(duì)損傷的肌肉組織具有修復(fù)和再生作用。結(jié)論:制備的雙面紋路支架可以引導(dǎo)平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化,體內(nèi)可以作為食道肌層修復(fù)和再生的替代物。
【關(guān)鍵詞】：食道平滑肌細(xì)胞 內(nèi)環(huán)外縱支架 體內(nèi)培育 食道組織工程
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-16
• 1 材料與儀器設(shè)備16-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備18-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-26
• 2.1 圖案化支架的制備20-22
• 2.1.1 支架的制備20-21
• 2.1.2 絲素蛋白的提取21
• 2.1.3 支架的改性21-22
• 2.2 圖案化支架的細(xì)胞相容性22-24
• 2.2.1 原代平滑肌細(xì)胞的提取與培養(yǎng)22
• 2.2.2 支架與細(xì)胞共培養(yǎng)22
• 2.2.3 支架的細(xì)胞相容性檢測(cè)方法22-24
• 2.3 支架的原位修復(fù)24-26
• 2.3.1 動(dòng)物體內(nèi)替代支架的準(zhǔn)備24
• 2.3.2 片狀支架原位替代修復(fù)24-25
• 2.3.3 環(huán)狀支架原位替代修復(fù)25
• 2.3.4 術(shù)后大體觀察與檢測(cè)方法25-26
• 3 結(jié)果26-45
• 3.1 支架的構(gòu)建及其細(xì)胞相容性26-34
• 3.1.1 構(gòu)建支架的結(jié)構(gòu)26-27
• 3.1.2 支架的表面改性27-28
• 3.1.3 圖案化支架的細(xì)胞相容性28-34
• 3.2 支架在動(dòng)物體內(nèi)原位修復(fù)檢測(cè)34-45
• 3.2.1 無(wú)支架植入對(duì)照實(shí)驗(yàn)34-36
• 3.2.2 P1圖案單面連續(xù)補(bǔ)片支架替代修復(fù)36-39
• 3.2.3 P3無(wú)槽補(bǔ)片替代修復(fù)39
• 3.2.4 P1-P2雙面圖案補(bǔ)片替代修復(fù)39-42
• 3.2.5 環(huán)狀雙面凹槽支架的替代修復(fù)42-45
• 4 討論45-48
• 5 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 附錄A 主要試劑配制54-56
• 附錄B 中英文詞對(duì)照56-57
• 在學(xué)研究成果57-58
• 致謝58

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 鞏長(zhǎng)鳳;食道平滑肌的體外構(gòu)建及其體內(nèi)生物相容性研究[D];寧波大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：693723