本文關(guān)鍵詞：后發(fā)性白內(nèi)障與人工晶狀體材料的體外實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：背景白內(nèi)障是全球首位致盲疾病,手術(shù)是唯一的治療選擇。超聲乳化晶狀體摘除聯(lián)合人工晶狀體植入術(shù)是最主要的手術(shù)方式,術(shù)后可能出現(xiàn)角膜水腫、眼內(nèi)炎、黃斑水腫、后發(fā)性白內(nèi)障等,其中后發(fā)性白內(nèi)障是遠(yuǎn)期影響患者術(shù)后視力的最主要原因。后發(fā)性白內(nèi)障是指晶狀體上皮細(xì)胞向后囊膜移行、黏附、增殖及其上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化并分泌各種蛋白及其各型膠原纖維而使后囊膜發(fā)生混濁的過程,且后囊膜的收縮可使人工晶狀體移位、脫位等。后發(fā)性白內(nèi)障主要與患者的病史、手術(shù)技術(shù)、人工晶狀體等有關(guān),其中人工晶狀體是決定性因素。人工晶狀體的參數(shù)包括：外形設(shè)計(jì)、材料組成等,臨床上人工晶狀體材料主要有疏水性丙烯酸酯、親水性丙烯酸酯、硅凝膠、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)。大量研究證明人工晶狀體的方形邊緣設(shè)計(jì)一定程度上能有效降低后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生,而后發(fā)性白內(nèi)障與人工晶狀體材料是否有關(guān)存在爭論；而不同的研究報(bào)道關(guān)于不同材料人工晶狀體導(dǎo)致后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生未得到一致結(jié)論；國內(nèi)外關(guān)于后發(fā)性白內(nèi)障與人工晶狀體材料關(guān)系的體外實(shí)驗(yàn)研究較少。大量研究證實(shí)后發(fā)性白內(nèi)障是多因素、多細(xì)胞因子及其多信號(hào)通路共同參與的過程,而前輩們關(guān)于細(xì)胞因子、人工晶狀體及后發(fā)性白內(nèi)障的研究主要集中于在動(dòng)物眼植入人工晶狀體后房水中相關(guān)細(xì)胞因子的檢測,而相關(guān)細(xì)胞因子是來源晶狀體上皮細(xì)胞還是來源于術(shù)后房水循壞的破壞未有明確定論,細(xì)胞因子的分泌與人工晶狀體材料的關(guān)系國內(nèi)外少見相關(guān)報(bào)道。TGF-β2在后發(fā)性白內(nèi)障進(jìn)程中的重要作用已達(dá)到共識(shí),大量研究報(bào)道也證實(shí)IL-6,MMP-2和MMP-9參與后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生,而TGF-β2、IL-6 MMP-2及MMP-9的表達(dá)和人工晶狀體材料的關(guān)系尚未見相關(guān)報(bào)道。第一部分不同材料人工晶狀體囊膜生物相容性的實(shí)驗(yàn)研究[目的]本實(shí)驗(yàn)旨在通過人晶狀體上皮細(xì)胞對不同材料人工晶狀體黏附增殖、細(xì)胞形態(tài)變化及其上皮細(xì)胞一間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的情況,探索后發(fā)性白內(nèi)障與人工晶狀體材料的關(guān)系、囊膜生物相容性最佳的人工晶狀體材料及其后發(fā)性白內(nèi)障可能的發(fā)生機(jī)制。[方法]1.細(xì)胞來源人晶狀體上皮細(xì)胞購置于American Type Culture Collection (ATCC)公司HLEC-B3系,復(fù)蘇HLEC-B3,并反復(fù)傳代、凍存、復(fù)蘇以確保細(xì)胞的數(shù)量及其質(zhì)量。2.分組將疏水性丙烯酸酯人工晶狀體、親水丙烯酸酯人工晶狀體、硅凝膠人工晶狀體、PMMA人工晶狀體,分為A組(PC156C55,PMMA)、B組(Crystalens HD,硅凝膠),C組(Akreos Advance Optics Aspheric Lens,親水性丙烯酸酯),D1組(Envista,疏水性丙烯酸酯),D2組(ZCB00 Lens,疏水性丙烯酸酯),D3組(Acrysof,疏水性丙烯酸酯)。3.黏附實(shí)驗(yàn)人晶狀體上皮細(xì)胞分別種植于疏水性丙烯酸酯人工晶狀體、親水性丙烯酸酯人工晶狀體、硅凝膠人工晶狀體、PMMA人工晶狀體并培養(yǎng)6h、24 h后,在倒置相差顯微鏡下觀察人工晶狀體表面黏附細(xì)胞的數(shù)量及其形態(tài)并拍照。4.增殖計(jì)數(shù)通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測人工晶狀體表面培養(yǎng)24 h后人晶狀體上皮細(xì)胞的增殖情況。5.EMT實(shí)驗(yàn)在人工晶狀體表面繼續(xù)培養(yǎng)48 h后,對人工晶狀體表面細(xì)胞進(jìn)行以a-SMA為標(biāo)記蛋白的免疫熒光,在熒光顯微鏡下拍照并計(jì)數(shù)EMT的轉(zhuǎn)化率。6.HE染色培養(yǎng)后的人工晶狀體做HE染色,觀察培養(yǎng)72 h后人工晶狀體表面細(xì)胞的形態(tài)及其增殖情況。7.數(shù)據(jù)分析所有結(jié)果采用SPSS20.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以mean±standard deviation表示,各組間的比較以one-way ANOVA分析,兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),認(rèn)為P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)果]1.細(xì)胞形態(tài)正常培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞呈典型的上皮細(xì)胞樣形態(tài),為不規(guī)則的三邊形、長橢圓形、圓形為主。2.黏附實(shí)驗(yàn)1)細(xì)胞種植6h后,多數(shù)細(xì)胞緊貼人工晶狀體表面生長,在顯微鏡低倍鏡下(100X)疏水性丙烯酸酯人工晶狀體和硅凝膠人工晶狀體表面黏附的細(xì)胞數(shù)較多,且三種疏水性丙烯酸酯人工晶狀體表面黏附細(xì)胞無明顯差異,PMMA人工晶狀體次之,且PMMA人工晶狀體表面可見黑色細(xì)胞團(tuán),親水性丙烯酸酯黏附的細(xì)胞最少,表面較多折光性強(qiáng)的小圓形細(xì)胞；高倍鏡下(400X)觀察疏水性丙烯酸酯人工晶狀體、硅凝膠人工晶狀體及其親水性丙烯酸酯人工晶狀體表面黏附細(xì)胞形態(tài)以典型上皮樣細(xì)胞為主,為不規(guī)則三邊型,長方形,橢圓形為主,尚有貼壁不牢的圓形細(xì)胞,細(xì)胞與細(xì)胞之間形態(tài)清晰,偶見1、2個(gè)長纖維型細(xì)胞；PMMA人工晶狀體表面黏附細(xì)胞許多聚集成團(tuán),增殖伸展的細(xì)胞完全融合,細(xì)胞形態(tài)模糊,在細(xì)胞團(tuán)周圍可見典型的長纖維型細(xì)胞。(2)細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,在低倍鏡下(100X)親水性丙烯酸酯人工晶狀體表面黏附細(xì)胞大部分脫壁,呈現(xiàn)為折光性弱的暗小圓形細(xì)胞,其它組人工晶狀體表面黏附細(xì)胞明顯增殖,細(xì)胞數(shù)明顯多于培養(yǎng)6h時(shí)；高倍鏡(400X)下觀察,親水性丙烯酸酯人工晶狀體表面細(xì)胞僅有幾個(gè)細(xì)胞貼壁生長并伸展成不規(guī)則三邊形及四邊形；其余各組人工晶狀體表面細(xì)胞均伸展生長,大多數(shù)細(xì)胞融合,疏水性丙烯酸酯人工晶狀體,硅凝膠人工晶狀體表面黏附細(xì)胞大多數(shù)仍為長橢圓形的上皮樣細(xì)胞為主,但可見數(shù)個(gè)典型紡錘型細(xì)胞；PMMA表面的人晶狀體上皮細(xì)胞減少,大部分細(xì)胞聚集成團(tuán),細(xì)胞團(tuán)周圍可見典型的紡錘型成纖維細(xì)胞。3.增殖計(jì)數(shù)人工晶狀體表面細(xì)胞增殖反應(yīng)CCK-8各組OD值的結(jié)果顯示：D3(0.2384±0.007)D2(0.2338±0.002)D1(0.2260±0.005)B(0.1781±0.007)A(0.1580±0.007)C(0.1242±0.002)；組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.0001)；其中,D1與D2組之間,表面細(xì)胞增殖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.155),其余各組兩兩之間具有顯著性差異(P0.01)。4.EMT實(shí)驗(yàn)C組親水性丙烯酸酯人工晶狀體表面細(xì)胞貼壁不牢,隨著延長培養(yǎng),幾乎無人晶狀體上皮細(xì)胞黏附,人工晶狀體表面未見熒光；其余各組人工晶狀體表面細(xì)胞免疫熒光結(jié)果示：A組,B組,D1組,D2組,D3組表面為藍(lán)染的核和綠熒光的a-SMA,其中三組疏水性丙烯酸人工晶狀體表面較多藍(lán)色的細(xì)胞核,每組約7-8個(gè)帶有綠熒光的細(xì)胞,硅凝膠人工晶狀體細(xì)胞較多,同樣約7-8個(gè)帶有綠熒光的細(xì)胞,而PMMA組細(xì)胞極少,而幾乎所有細(xì)胞均出現(xiàn)綠熒光的a-SMA纖維；在熒光顯微鏡下計(jì)算各表面細(xì)胞上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化率結(jié)果顯示：A(84.16±10.48)%B(17.33±5.71)%D1(14.22±4.64)%D2(13.99±9.11)%D3(9.98±3.80)%；其中A組同B、D1、D2、D3組之間轉(zhuǎn)化率之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),而B、D1、D2、D3之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.HE染色結(jié)果培養(yǎng)72 h后人工晶狀體表面細(xì)胞的HE染色結(jié)果示：A、 B、C、D1、D2、D3組表面生長的人晶狀體上皮細(xì)胞核藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)為淡紅色；B、D1、D2、 D3組細(xì)胞明顯較A組多,其細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,輪廓不清,胞核清晰,為橢圓形,大小差異不明顯,高倍鏡下(400X),細(xì)胞幾乎全部融合,偶見正在分裂的細(xì)胞核及其細(xì)胞核凝集、核固縮和核碎裂現(xiàn)象；C組人工晶狀體表面可見染色的細(xì)胞,細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整,部分細(xì)胞未見細(xì)胞核,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)偶見大空泡,幾乎充滿整個(gè)細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞核大小不一,形狀各異,有四邊形、三角形、五邊形、小圓形及橢圓形；而A組細(xì)胞數(shù)明顯較少,大多聚集成團(tuán),細(xì)胞核層疊,胞核染色深,核固縮現(xiàn)象明顯,偶見核碎裂,胞質(zhì)內(nèi)可見碎裂的絲狀細(xì)胞核。[結(jié)論]在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,人工晶狀體的囊膜生物相容性與人工晶狀體的材料是相關(guān)的；從人工晶狀體表面黏附的細(xì)胞形態(tài),增殖數(shù)及其EMT免疫熒光分析,疏水性丙烯酸類人工晶狀體具有較好的囊膜生物相容性,其次為硅凝膠晶狀體、PMMA人工晶狀體；后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)展可能與人工晶狀體表面黏附的細(xì)胞數(shù)量及其增殖形式有關(guān),且人工晶狀體表面一定數(shù)量的人晶狀體上皮細(xì)胞單層增殖有利于后發(fā)性白內(nèi)障的預(yù)防。第二部分人晶狀體上皮細(xì)胞細(xì)胞因子的表達(dá)[目的]探索體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞是否表達(dá)TGF-β2、IL-6、MMP-2和MMP-9,并探究細(xì)胞因子的表達(dá)和人工晶狀體材料的關(guān)系。[方法]1、將人晶狀體上皮細(xì)胞種植在人工晶狀體表面并培養(yǎng)24 h,將培養(yǎng)液收集于離心管內(nèi)并置于-80℃冰箱內(nèi)；2、依次緩慢將培養(yǎng)液復(fù)溫并將其分裝成4部分,分別對培養(yǎng)液進(jìn)行TGF-β2、 IL-6、MMP-2和MMP-9 ELISA檢測；3、所有數(shù)據(jù)采用SPSS Statistics 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)量資料以mean±tandard deviation表示,各組間的比較以one-way ANOVA分析,兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn),認(rèn)為P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)果]在人工晶狀體與人晶狀體上皮細(xì)胞混合培養(yǎng)24h后的培養(yǎng)液中能檢測出TGF-β2、IL-6、MMP-2和MMP-9,其中IL-6和MMP-9的分泌水平趨勢大致相同,以PMMA人工晶狀體組分泌最高,其次為疏水性丙烯酸酯人工晶狀體組,硅凝膠人工晶狀體,親水性丙烯酸酯人工晶狀體較低,而TGF-β2和MMP-2的表達(dá)水平以疏水性丙烯酸人工晶狀體組最高,其次為硅凝膠人工晶狀體組,PMMA組和親水性丙烯酸酯組較低；TGF-β2、IL-6、MMP-2和MMP-9的分泌水平各組間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。[結(jié)論]人晶狀體上皮細(xì)胞能合成分泌TGF-β2、IL-6、MMP-2和MMP-9,且人工晶狀體可能誘導(dǎo)人晶狀體上皮合成分泌TGF-β2、IL-6、MMP-2和MMP-9,其分泌水平可能同人工晶狀體的材料無關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人工晶狀體 人晶狀體上皮細(xì)胞 后發(fā)性白內(nèi)障 囊膜生物相容性 人晶狀體上皮細(xì)胞 人工晶狀體 TGF-β _2 IL-6 MMP-2 MMP-9
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R779.66;R318.18
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 前言18-19
• 第一章 不同材料人工晶狀體囊膜生物相容性的實(shí)驗(yàn)研究19-40
• 1 儀器及試劑19-20
• 1.1 主要儀器及材料19-20
• 1.2 主要試劑20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-24
• 3 結(jié)果24-27
• 3.1 正常培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞形態(tài)為典型上皮樣細(xì)胞24
• 3.2 黏附結(jié)果24-25
• 3.3 CCK-8增殖結(jié)果25
• 3.4 EMT免疫熒光結(jié)果25-26
• 3.5 HE染色結(jié)果26-27
• 4 討論27-30
• 5 結(jié)論30-32
• 6 附圖32-40
• 第二章 人晶狀體上皮細(xì)胞細(xì)胞因子的表達(dá)40-49
• 1 材料與試劑40
• 1.1 主要材料40
• 1.2 主要試劑40
• 2 實(shí)驗(yàn)方法40-43
• 3 結(jié)果43-44
• 3.1 IL-6分泌結(jié)果43
• 3.2 TGF-β2分泌結(jié)果43
• 3.3 MMP-2分泌結(jié)果43-44
• 3.4 MMP-9分泌結(jié)果44
• 4 討論44-47
• 5 小結(jié)47
• 6 附圖47-49
• 第三章 總結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-58
• 附錄A 中英文對照縮略詞表58-59
• 附錄B 成果59-60
• 綜述60-87
• 參考文獻(xiàn)76-87
• 致謝87-89

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1 徐國興;潘永明;;人工晶狀體材料與人工晶狀體植入術(shù)并發(fā)癥及不良事件[J];海峽科學(xué);2007年03期

2 夏瑞靜;徐栩;羅麗;李玲t(yī) ;陳浩;;氧等離子處理人工晶狀體材料的生物相容性[J];中國組織工程研究;2013年21期

3 劉芳;周曉蓮;崔鳳萍;賈德民;;聚甲基丙烯酸羥乙酯水凝膠人工晶狀體材料的合成與性能[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2007年03期

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本文編號(hào)：686291