本文關(guān)鍵詞：食管去細(xì)胞基質(zhì)復(fù)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程食管的初步研究

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【摘要】：食管是連接咽和胃的通道,食團(tuán)經(jīng)吞咽從咽部進(jìn)入食管,通過(guò)食管進(jìn)入胃腔。食管器質(zhì)性疾病或動(dòng)力障礙性疾病或功能性食管病均可以影響食管的功能。食管疾病包括食管的畸形、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、炎癥和腫瘤。有些無(wú)癥狀或癥狀輕微,對(duì)健康影響不大。有些則影響進(jìn)食,甚至威脅生命，需手術(shù)治療。食道疾病的治療方法主要由手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療和生物治療，這幾種方法都沒有很好的提高中末期食管疾病的治愈率。20世紀(jì)中期，人們開始用自身的其他組織或器官來(lái)替代受損的食管，然而手術(shù)創(chuàng)傷大，術(shù)后并發(fā)癥多，所以人們一直在努力尋找一種理想的人工食管代替物。隨著材料科學(xué)的進(jìn)步，人工食管的研究進(jìn)入了嶄新階段。目前可用于人工食管的生物替代材料主要包括人工合成的可降解高分子材料和細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）衍生材料，后者又包括生物大分子無(wú)結(jié)構(gòu)材料和脫細(xì)胞的天然的ECM材料。由于無(wú)細(xì)胞食管支架能逐漸被吸收，同時(shí)能誘導(dǎo)組織特異性結(jié)構(gòu)重塑，因而受到研究者的重點(diǎn)關(guān)注。干細(xì)胞技術(shù)是再生醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的前沿技術(shù)之一，近年來(lái)，干細(xì)胞治療手段也為多種疾病提供了新的研究策略。BMSCs是干細(xì)胞其中的一種，可以作為組織工程器官的種子細(xì)胞。 方法： 采用化學(xué)去垢劑脫氧膽酸鈉（Sodium desoxycholate，SD）使食管組織有效去細(xì)胞，制成天然食管細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）支架，用HE染色進(jìn)行去細(xì)胞效果的觀察，用Masson染色、VG染色、免疫組織化學(xué)染色等進(jìn)行組織學(xué)觀察。運(yùn)用掃描電鏡、透射電鏡進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察。分離提取大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone mesenchymal stem cells，，BMSCs），體外培養(yǎng)、擴(kuò)增并進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)鑒定。以低濃度過(guò)氧乙酸溶液對(duì)ECM支架進(jìn)行滅菌；將BMSCs接種于食管ECM支架上進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng)，最后做HE染色觀察。 結(jié)果： 1.經(jīng)處理后所得ECM為白色、質(zhì)地柔軟、彈性良好，制得的天然管狀ECM成形良好，經(jīng)HE染色可觀察到，ECM內(nèi)部無(wú)細(xì)胞成分殘留；經(jīng)Masson染色、VG染色、免疫組織化學(xué)染色可觀察到ECM的膠原蛋白、彈性蛋白、纖維連接蛋白與去細(xì)胞之前相比較沒有顯著差異。經(jīng)掃描電鏡、透射電鏡觀察可見ECM具有三維網(wǎng)狀的立體空間結(jié)構(gòu)；采用過(guò)氧乙酸溶液對(duì)ECM滅菌后進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果顯示滅菌效果良好。 2.采用全骨髓貼壁法分離培BMSCs細(xì)胞，擴(kuò)增培養(yǎng)后取第三代（P3）細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。CD29、CD90表達(dá)率分別為98.21%、99.58%、CD3、CD45表達(dá)率分別為2.43%和2.38%，符合BMSCs的抗原表達(dá)，證明P3代BMSCs的純度達(dá)到98%以上。 3.BMSCs與去細(xì)胞食管ECM支架接種復(fù)合培養(yǎng)，經(jīng)HE染色后可見大量藍(lán)染的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，連接緊密，孔隙內(nèi)亦可見細(xì)胞生長(zhǎng)，證明ECM與BMSCs的接種復(fù)合良好。 結(jié)論： 利用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)的BMSCs在P3代純度可達(dá)到98%以上。脫氧膽酸鈉聯(lián)合DNaseI對(duì)食管進(jìn)行去細(xì)胞，有效去除了組織中細(xì)胞成分，保留了細(xì)胞外基質(zhì)；支架的形態(tài)、大小、體積未發(fā)生明顯改變，證實(shí)獲得理想的去細(xì)胞食管支架。用二次沉淀法將組織與細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)，BMSCs可在支架內(nèi)較好生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：組織工程 食管 細(xì)胞外基質(zhì) 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R318.08
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 中英文對(duì)照11-12
• 第1章 緒論12-20
• 1.1 組織工程與再生醫(yī)學(xué)12-13
• 1.2 組織工程支架材料13-16
• 1.2.1 去細(xì)胞方法14-16
• 1.3 種子細(xì)胞的選擇16-17
• 1.4 組織工程食管17-20
• 第二章 材料與試劑20-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 2.2 器材與設(shè)備20
• 2.3 主要試劑20-21
• 2.4 主要試劑的配制21-23
• 第三章 實(shí)驗(yàn)方法23-30
• 3.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定23-24
• 3.1.1 全骨髓貼壁法分離培養(yǎng) BMSCs23
• 3.1.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代培養(yǎng)23
• 3.1.3 BMSCs 的凍存23-24
• 3.1.4 BMSCs 的鑒定24
• 3.2 組織工程食道支架的制備24
• 3.3 組織工程食道支架生物學(xué)特性研究24-28
• 3.3.1 組織學(xué)檢測(cè)24-27
• 3.3.2 掃描電鏡觀察脫細(xì)胞前后食管27
• 3.3.3 透射電鏡觀察脫細(xì)胞前后食管27
• 3.3.4 去細(xì)胞前后食管 DNA 定量檢測(cè)27-28
• 3.4 種子細(xì)胞與支架的體外種植實(shí)驗(yàn)28-29
• 3.4.1 支架的滅菌28
• 3.4.2 將細(xì)胞種植于支架上28-29
• 3.5 再細(xì)胞化支架的生物學(xué)特性研究29-30
• 3.5.1 再細(xì)胞化支架HE染色29-30
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-38
• 4.1 BMSCs 的分離培養(yǎng)與鑒定30-31
• 4.1.1 BMSCs 的分離培養(yǎng)30
• 4.1.2 BMSCs 的表面特異標(biāo)記鑒定30-31
• 4.2 組織工程食道支架的生物學(xué)特性分析31-36
• 4.2.1 大鼠食管的分離結(jié)果31
• 4.2.2 去細(xì)胞食管支架的特殊染色及免疫組織化學(xué)染色31-34
• 4.2.3 電鏡觀察去細(xì)胞前后食管腔表面34-36
• 4.2.4 去細(xì)胞前后食管 DNA 含量36
• 4.3 再細(xì)胞化食道支架生物學(xué)特性分析36-38
• 4.3.1 再細(xì)胞化食管的 HE 染色36-38
• 第五章 討論38-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 作者簡(jiǎn)介及攻讀學(xué)位期間發(fā)表研究成果46-47
• 致謝47

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 Shobha Mareddy;Ross Crawford;;Clonal Characterization of Bone Marrow Derived Stem Cells and Their Application for Bone Regeneration[J];International Journal of Oral Science;2010年03期

2 張文杰;曹誼林;;組織工程的突破與挑戰(zhàn)——組織工程國(guó)家工程中心科研進(jìn)展[J];中國(guó)科學(xué):生命科學(xué);2014年02期

3 Giorgia Totonelli;Panagiotis Maghsoudlou;Jonathan M Fishman;Giuseppe Orlando;Tahera Ansari;Paul Sibbons;Martin A Birchall;Agostino Pierro;Simon Eaton;Paolo De Coppi;;Esophageal tissue engineering:A new approach for esophageal replacement[J];World Journal of Gastroenterology;2012年47期

4 Joshua Schroeder;Janina Kueper;Kaplan Leon;Meir Liebergall;;Stem cells for spine surgery[J];World Journal of Stem Cells;2015年01期

5 Shima Salmasi;Deepak M Kalaskar;Wai-Weng Yoon;Gordon W Blunn;Alexander M Seifalian;;Role of nanotopography in the development of tissue engineered 3D organs and tissues using mesenchymal stem cells[J];World Journal of Stem Cells;2015年02期

本文編號(hào)：667972