本文關(guān)鍵詞：兔纖維環(huán)細胞復(fù)合KLD-12多肽納米纖維凝膠體外三維培養(yǎng)的實驗研究

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【摘要】：目的探討兔纖維環(huán)細胞復(fù)合KLD-12多肽納米纖維凝膠體外培養(yǎng)的可能性,尋找修復(fù)椎間盤退變的理想種子細胞和支架。方法胰蛋白酶消化法提取6月齡新西蘭大白兔纖維環(huán)細胞,培養(yǎng)至第3代,復(fù)合于KLD-12多肽制備KLD-12多肽/纖維環(huán)細胞凝膠。倒置顯微鏡觀察凝膠內(nèi)細胞形態(tài)變化;細胞計數(shù)試劑盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法檢測細胞增殖活性;鈣黃綠素(Calcein-AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)雙熒光染色觀察凝膠內(nèi)活、死細胞,計算活細胞比率;阿爾新藍法檢測培養(yǎng)基中糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量;免疫熒光染色觀察Ⅱ型膠原分泌情況;實時熒光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)檢測纖維環(huán)細胞Ⅱ型膠原及蛋白聚糖(Aggrecan)基因表達情況。結(jié)果復(fù)合于凝膠中的纖維環(huán)細胞呈圓形,少部分在凝膠邊緣處貼壁的細胞呈多角形。CCK-8結(jié)果顯示,細胞增殖活性隨培養(yǎng)時間延長呈增加趨勢,培養(yǎng)14 d活性顯著高于其余各時間點(P0.05),且各時間點活性均顯著高于空白凝膠對照組(P0.05)。Calcein-AM/PI雙熒光染色觀察示,培養(yǎng)5、14 d凝膠內(nèi)細胞活細胞比率分別89.32%±8.58%和97.81%±1.09%,比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=—1.962,P=0.097)。GAG檢測示,細胞中GAG含量隨培養(yǎng)時間延長逐漸增加,8 d達峰值,之后逐漸下降;培養(yǎng)5、8、11 d時GAG含量顯著高于2、14 d時(P0.05)。免疫熒光染色示細胞中Ⅱ型膠原正常分泌。RT-q PCR檢測示,培養(yǎng)5、14 d凝膠內(nèi)纖維環(huán)細胞均可見Ⅱ型膠原和Aggrecan基因表達,14 d時基因相對表達量均顯著高于5 d時(P0.05)。結(jié)論纖維環(huán)細胞能夠在KLD-12多肽納米纖維凝膠中正常生長增殖,主要細胞外基質(zhì)成分可正常表達,細胞生物活性良好。
【作者單位】： 石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院骨三科;
【關(guān)鍵詞】： 椎間盤退變 組織工程 纖維環(huán)細胞 KLD-多肽 兔
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81160224,81560363) 兵團博士基金資助項目(2011BB017)~~
【分類號】：R318.08;R681.53
【正文快照】： 腰椎間盤退變是引發(fā)下腰部疼痛的主要病因[1];其主要病理表現(xiàn)為髓核、纖維環(huán)等椎間盤組織中細胞凋亡、細胞減少,組織含水量及蛋白多糖等細胞外基質(zhì)含量減少[2-4]。纖維環(huán)細胞是構(gòu)成纖維環(huán)組織的細胞,其生物學(xué)特性與髓核細胞類似[5],且在體外培養(yǎng)時穩(wěn)定性較髓核細胞更強[6],因

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 謝健;童培建;肖魯偉;金紅婷;吳承亮;單樂天;毛強;潘佳菲;;兔髓核與纖維環(huán)細胞生物學(xué)特性差異的研究[J];中國骨傷;2013年06期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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2 徐濤濤;廖菲;金紅婷;童培建;肖魯偉;吳承亮;;椎間盤退變與細胞死亡的相關(guān)研究進展[J];中國骨傷;2015年07期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 謝卯;線粒體在壓力誘導(dǎo)椎間盤細胞凋亡和能量代謝障礙中的作用及其實驗研究[D];華中科技大學(xué);2011年

2 劉蘭濤;人退變椎間盤軟骨終板干細胞的鑒定及性質(zhì)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

3 李俊;不同彈性模量靜電紡絲聚氨酯纖維支架對兔纖維環(huán)干細胞分化的調(diào)控研究[D];蘇州大學(xué);2014年

4 劉剛;MicroRNA-27a調(diào)控在椎間盤髓核細胞凋亡中的作用機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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2 李振強;自組裝顳下頜關(guān)節(jié)盤纖維軟骨模型的構(gòu)建及靜水壓對其基質(zhì)合成的影響[D];蘭州大學(xué);2011年

3 牛朋彥;滲透壓負荷對兔椎間盤器官培養(yǎng)模型的影響[D];華中科技大學(xué);2010年

4 李春林;AQP1、AQP3在人不同退變椎間盤軟骨終板和纖維環(huán)中表達的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

5 張春瑜;靜水壓聯(lián)合IGF-1干預(yù)對山羊顳下頜關(guān)節(jié)盤細胞F-actin表達影響的實驗研究[D];蘭州大學(xué);2013年

6 沈皆亮;SIRT1基因?qū)ν俗冏甸g盤調(diào)控作用及其機制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

7 董興成;組織工程椎間盤纖維環(huán)支架構(gòu)建的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 潘勇;周躍;李長青;郝勇;初同偉;張峽;王衛(wèi)東;王建;張正豐;張年春;王敏;;組織工程椎間盤纖維環(huán)種子細胞的培養(yǎng)和鑒定[J];四川醫(yī)學(xué);2009年04期

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3 劉杰;王建;周躍;;兔椎間盤髓核細胞體外生物學(xué)特性的實驗研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2008年09期

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 卞正君;KLD-12多肽/TGF-β1誘導(dǎo)MSCs向髓核樣細胞分化的實驗研究[D];石河子大學(xué);2015年

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本文編號：648540